一株H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定及全基因序列分析

2006年从辽宁省某猪场采集具有流感症状猪鼻拭子共30份,经9~11日龄SPF鸡胚分离,对分离株进行了血凝试验、血凝抑制试验、RT-PCR亚型鉴定,全基因序列比对和接种试验动物试验。结果表明:该毒株具有凝集0.5%鸡红细胞的活性,且与抗猪流感H1标准血清发生血凝抑制反应,RT-PCR分别扩增得到全基因8个片段,利用DNAStar生物学软件进行序列分析,HA基因与GenBank登录的H1~H16中的H1基因序列同源性最高,NA基因与N1~N9中的N1基因序列同源性最高,故该LN株分离毒为猪流感H1N1亚型病毒。全基因序列中,除了M基因不是猪源的,其它基因片段均与国内H1N1亚型猪流感参照株高度同源,推测LN株可能是由类人和类禽谱系的流感病毒与古典猪谱系的流感病毒重排形成的;用该病毒接种试验动物可成功复制出猪流感典型症状。该病毒的分离鉴定及全基因组序列分析为我国进一步调查猪流感的流行规律提供了基础数据。     

DYS458、DYS534、DYS426和DYS626基因座多态性研究

目的：研究河南汉族群体DYS458、DYS534、DYS426和DYS626四个Y-STR基因座遗传多态性,评估其法医学应用价值。方法：采用PCR扩增和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及DNA测序分析河南汉族113名无血缘关系、健康男性个体的4个Y-STR基因座基因及单倍型频率分布。结果：4个基因座共发现了24个等位基因,频率分布在0.0177～0.9027,基因多样性（gene diversity,GD）值最低为0.1801（DYS426）,最高为0.8368（DYS626）。113个个体共检测到94个单倍型,其79种为惟一的,单倍型多样性为0.99589。结论：4个Y-STR基因座在河南汉族群体均具有较高的遗传多态性,可应用于法医学个体识别和亲子鉴定。     

绵羊类胚胎干细胞长期培养中增殖、凋亡、多能性相关基因的表达动力学

已报道的家畜类胚胎干细胞(embryonic stem-like cell, ESC-like)均无法实现长期培养,这制约了家畜ESC的研究．通过检测本实验室建系的绵羊类胚胎干细胞oESC-like,探究导致oESC-like无法持续培养的原因,为以后的研究打下基础. 实验观察了oESC-like形态变化,检测了AKP的表达,使用免疫荧光技术检测了PCNA、Bcl-2、Bax、Sox-2、Oct-4蛋白的表达,并用软件Image-Pro Plus 60计算蛋白表达水平．结果显示,oESC-like在长期培养过程中其形态具备ESC的典型形态特征;AKP持续表达;Sox-2和Oct-4的表达有不同程度的提高,增殖能力无明显变化;Bax表达水平逐代提高,Bcl-2的表达水平在5、10代显著高于Bax的表达水平可抑制Bax的活化,而从15代开始Bcl-2表达水平下降,低于Bax的表达水平,不能有效地抑制Bax的活化;Bcl-2/Bax表达水平的比值逐代下降,说明oESC-like在长期培养过程中逐渐走向凋亡.为解决绵羊类胚胎干细胞能够体外长期培养的科学问题,针对本实验室已有研究成果和存在的问题,进行逆向思维找出突破口,为遗传育种、基因工程、医疗等方面在实践上提供理论基础.     

植物病毒弱株系及其应用III．烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14的安全性测定

烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14接种17科54种植物,只能感染7科20种植物,其中除矮牵牛(Petunia hybrida)表现轻花叶症状外,其它植物均无症状。N14。与CMV、PVX和PVT混合接种番茄时的病情指数只与CMV、PVX和PVY单独接种番茄时的病情指数相等或略高。6年来,N14 已连续传代100多次,毒力无明显变化,使用N14多年的地区未出现问题,为使用N14的安全性提供了依据。     

抗黄瓜花叶病毒单克隆抗体细胞株的建立及其抗体鉴定

用黄瓜花叶病毒(CMV)免疫的BALB／C小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14,经5次细胞融合,6次有限稀释,获得1株6个稳定分泌cMV单克隆抗体的杂交瘤细胞培养物,所分泌的单克隆抗体均属IgM亚类。试验结果证明,6个单克隆抗体对cMV是特异的,对CMV-Q、CMV—P和cMv—B呈阳性反应,对cMV一6和番茄不孕病毒(TAV)呈阴性反应,对所用的其他8种植物病毒：南瓜花叶病毒(0qMV)、绒毛烟斑驳病毒(VT№V)、大毒条纹花叶病毒(BsMv)、马铃薯病毒x(PVx)、马铃薯病毒Y(PVY)、玉米矮箍花叶病毒(MDMV)、大豆花叶 病毒(sMV)和烟草花叶病毒(TMV)均无交叉反应。     

黄瓜花叶病毒卫星RNA生防制剂在烟草上的防病作用

用人工组装的黄瓜花叶病毒卫星RNA生防制剂在烟草生产品种进行了田间保护试验。由于使用了生防制剂,经处理的烟草发病率降低84.9～86.4％,同时比对照早熟5天,上等烟比率增加151.3～173.5％,平均每亩收入增加43.3～65.7％。另外发现生防制剂能增强烟草对真菌病害的抵抗作用。     

干扰素的功能表达机制——Ⅵ.2’-5’三腺苷酸对烟草花叶病毒增殖的抑制作用

2′-5′三腺苷酸是否能抑制植物病毒在植物组织中的繁殖,过去无人报告过。本文证实2′-5′三腺苷酸能抑制烟草花叶病毒对离体的枯斑三生烟(Nicotina tabacum cv.samsum NN)叶片的侵染和在离体的普通烟(Nicotina tabacum)叶片内的繁殖,说明在植物中也存在2′-5′寡腺苷酸的作用体系,为植物干扰素的作用机理研究提供了新的依据。     

耳穴按压监管护理对改善失眠抑郁症患者睡眠效果的观察

目的观察抑郁症患者耳穴治疗后进行按压监管护理的疗效。方法选取60例行耳穴治疗的抑郁症患者按随机法分为观察组和对照组,每组30例。观察组耳穴治疗后进行耳穴按压监管护理,对照组耳穴治疗后给予常规护理,两组治疗前后采用匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)进行评测,观察比较两组患者睡眠质量改善情况。结果观察组患者的睡眠质量改善显著高于对照组(P0.05)。结论耳穴按压监管护理可以有效改善失眠抑郁症患者的睡眠质量,提高临床疗效。     

牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达

以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体pET30a(+)的KpnI／EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠杆菌DE3内,以IPTG进行诱导,终浓度为1mmol／L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pET30a+-mpb64融合蛋白相对分子量为30.4kDa,与实测相符。牛分枝杆菌pET30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断及新型疫苗的研究奠定了基础。     

活与失活的蛔虫卵的鉴别方法

活与失活的蛔虫卵的鉴别方法通过本实验不仅能掌握快速而简便地鉴别蛔虫卵活与失活的方法,而且也可作为粪便或污水处理过程中检查蛔虫卵生活力的一个可靠指标。因为蛔虫卵具有蛋白膜,用一般鉴别细胞活与失活的染料极易使蛋白膜着色,所以不能鉴别卵的死活。若用强碱性氧...