利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除H9c2细胞Tudor-SN基因对细胞周期的阻滞及增殖的抑制

基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,实现对大鼠心肌H9c2细胞Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)基因的敲除,并观察其对H9c2细胞周期及增殖的影响。选择PX462质粒为载体,利用软件设计能特异性识别H9c2细胞Tudor-SN基因第2个外显子的上下游sgRNA(single-guided RNA),构建1对重组质粒。随后,将这对质粒共同转入H9c2细胞中,再挑选阳性单克隆细胞进行培养。Western印迹鉴定其敲除效果,并用敲除成功的细胞株通过流式细胞术及CCK-8(cell counting kit 8)实验进行细胞周期和增殖的检测。Western印迹结果显示,在阳性细胞中,Tudor-SN蛋白不表达,成功实现了对Tudor-SN基因的敲除。流式结果显示,Tudor-SN基因敲除(KO)细胞发生了G1期阻滞。G1期细胞占比由H9c2野生型(WT)细胞的54.28%±0.21%升高到KO细胞的61.96%±0.40%(*P0.05)。CCK-8实验结果显示,KO细胞的增殖速率减慢。生长第6天的A值由WT细胞的2.82±0.03降低到KO细胞1.85±0.19(*P0.05)。本实验成功构建了H9c2细胞Tudor-SN基因敲除细胞株,并检测到Tudor-SN基因敲除对细胞周期的阻滞及增殖的抑制,为研究Tudor-SN基因对心肌细胞功能的调控提供了便利的工具及研究的基础。     

冰肌玉骨水仙花

正数九寒冬,百花凋零,唯有水仙花敢与斗寒傲雪的梅花媲美。婷婷玉立的水仙犹如淡妆害羞的少女,在嫩绿翠叶的陪衬下,绽出朵朵洁白如玉、花蕊淡黄的小花,散发出阵阵清香,令人心醉。水仙花适宜冬季盆栽,春节前后抽茎开花,故有"一盆水仙满堂春,冰肌玉骨送清香"的美誉。古往今来,人们素把"玉质金相素带围"的水仙花作为吉祥、美好、纯洁、高尚的象征。百卉中唯水仙最清高,一带翠薄之裳,不施胭脂,素影绰约,绿意娉婷;天然的冰肌玉骨,一盏清水,几粒卵石,独处淡雅,自有天地。     

青菜(Brassica chinensis)花药培养的初步研究

青菜是上海地区主要叶菜类蔬菜,但存在种性退化、病害严重、产量不稳的问题。为了培育抗病、高产的优良品种,我们于1976—1977年对青菜的花药培养进行了初步研究。材料和方法1976年用(二月慢×三月慢)F_1和白叶三月慢、马桥常菜作试验材料;1977年用9个 F_1和两     

我国褐飞虱迁入始见期的分析

常年3月下旬褐飞虱在我国的广西区西南南部、广东省西南部和云南省南部始见。随着时间的推移,始见湖北界不断向东向北呈扇形扩展;年间有—定的差异月时在110°E以西地域比以东地域北进速度要快一些。分析表明,4～6月在28°N、103°E附近的西南抵涡的形成和移动方位和始见期北界的移动关系密切。     

人重组IL6／IL2融合蛋白的变化,复性及纯化

经超声破碎,分离已表达ＣＨ９２５包涵体,较系统地研究变性剂浓度、融合蛋白浓度对蛋白折叠的影响,在还原型及氧化型谷胱复性条件下,成功地将融合蛋白ＣＨ９２５折叠成具有ＩＬ６及ＩＬ２双活性蛋白,ＩＬ６的比活为２．３×１０＾８Ｕ／ｍｇ,ＩＬ２比活为２．２×１０６Ｕ／ｍｇ。经阴离子交换,凝过滤层析,获得一定纯度的ＣＨ９２５,配合反相ＨＰＬＣ,洗脱收集蛋白峰,ＣＨ９２５纯度为９８％。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究──Ⅰ结构中氢键相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具有Ｎ－糖苷酶活性,２．０Ａ分辨率的三维结构已经测定。α－苦瓜子蛋白中总共有３５３个氢键,其中主链原子间氢键１６５个,主链原子与侧链原子间氢键５４个,侧链原子间氢键２１个,蛋白分子中原子与溶水剂的氢键１１３个,主链Ｃ＝Ｏ,主链ＮＨ及侧链分子结构中有９５％的残基能生成氢键,Ａｓｐ．Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ具有较强的生成多个氢键的能力,并对１３个没有任何氢键的残基作了分析。Ａｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＧｌＵ、Ｇｌｎ在α螺旋中出现税率较大,Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ在β结构中占了一半以上,Ａｒｇ容易形成远程的氢键,而Ｓｅｒ、Ｔｈｒ则容易形成近程氢键。某些氢键,特别是保守残基间的氢键,对形成蛋白分子局部特征构象和活性部位的特征构象有影响,α－苦瓜子蛋白的特定折叠方式对其与溶剂水分子成氢键有影响。     

IL－2／LAK对荷瘤机体细胞免疫功能的改善

本实验将ＩＬ－２／ＬＡＫ应用于荷瘤鼠,对荷瘤机体的细胞免疫功能（鼠脾ＮＫ细胞活性、鼠脾ＩＬ－２产生能力及腹腔巨噬细胞吞噬功能）进行动态观察。结果证实：ＩＬ－２／ＬＡＫ能在一定程度上改善荷瘤机体的细胞免疫功能,并能够有一定程度的阻抑荷瘤机体的细胞免疫功能降低。同时探讨了ＩＬ－２／ＬＡＫ在肿瘤治疗中,提高细胞功能的机理。     

蔗糖酶和GOD的共固定化研究

本文研究了用吸附交联技术共固定化蔗糖酶和葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）的方法,考查了共固定化酶的动力学性质。试验结果表明：与溶液酶相比较,固定化蔗糖酶和ＧＯＤ的响应滞迟期分别为３分钟和２分钟,４态响应时间增加６分钟和４分钟,Ｋｍ值增大,ｐＨ─活力曲线变宽,最适ｐＨ值分别增大０．７和０．６４,最适温度则降低７．３℃和１６℃。以活性氧化铝作载体,戊二醛作交联剂制备的共固定化蔗糖酶和ＧＯＤ,其蛋白质固定化率为９２．９％,分解葡萄糖的总速度为４４１．６ＩＵ,当蔗糖浓度在０．２％以内时其反应速度与蔗糖浓度呈正相关（ｒ＝０．９９６）,使用半衰期１６２３次,在４℃下保存１２０天活力残存为８３．７％。     

“血液循环器官”一章的教学(续)

要通过澄清血液的演示来介绍血液的成分。学生会看出血液被分为两层,一层是透明的血浆;另一层是稠密的、不透明的,这是由血球组成的。教师应使学生注意到存在於血浆与红血球之间的那层灰白色的薄膜,这是由白血球组成的。观察血液的澄清,能向学生清楚的指明血液的成分、血浆的透明特性和颜色、各种血球的颜色以及白血球和红血球的相对数量。教师应让学生根据对澄清血液演示的体会,在练习本上绘出血液成分的图解。     

病毒蛋白的解离和聚合作用 Ⅰ.烟草花叶病毒(TMV)的解离及其蛋白亚基的构型变化

近年来,通过对简单病毒细微结构的研究,已经揭示了病毒的一般结构原则,即许多蛋白亚基聚合成棒或廿面体,并将活性核酸包围在中心,蛋白外壳与核酸相互作用而各自得到更高的稳定性。在此我们第一次看到蛋白质分子的聚合反应在形成最原始的生命中所起的重要作用。