肌动蛋白存在于蚕豆细胞核和染色体中

以兔抗肌动蛋白抗体为一抗,FTTC偶联的羊抗兔IgG抗体为二抗进行间接免疫荧光实验,观察到蚕豆(Vicia faba L.)根端分生组织中完整的细胞核和染色体均有明亮荧光。用抗肌动蛋白抗体和蛋白A-胶体金进行标记的免疫电镜实验结果表明,金颗粒分布在蚕豆细胞核中,集缩染色质和核仁中金颗粒较多。经DNaseI消化和2 mol/L NaCl处理得到去除DNA和组蛋白的细胞核和染色体。免疫荧光实验结果指出,去除DNA和组蛋白的细胞核和染色体与抗肌动蛋白抗体呈阳性反应。上述结果说明,肌动蛋白不仅存在于完整的蚕豆细胞核和染色体中,而且存在于去除DNA和组蛋白的蚕豆细胞核和染色体中。另外,用抗原肌球蛋白抗体所做的免疫荧光标记结果表明,原肌球蛋白也存在于蚕豆细胞核和染色体中。对高等植物细胞核和染色体以及核骨架和染色体骨架是否含有肌动蛋白等问题进行了讨论。     

肌动蛋白是多头绒泡菌细胞核骨架和染色体骨架的组成成分

自多头绒泡菌(Physarum polycephalum Schw.)的原质团中分离细胞核和染色体,分别经DNaseⅠ消化和2 mol/L NaCl抽提后制备成细胞核骨架和染色体骨架。以抗肌动蛋白的抗体作一抗、FITC标记的羊抗兔IgG抗体作二抗进行的间接免疫荧光实验结果显示,细胞核骨架和染色体骨架都分别与抗体呈阳性反应。间接免疫斑点印迹实验结果进一步证实,细胞核骨架和染色体骨架的蛋白质成分中存在与肌动蛋白抗体呈阳性显色反应的抗原。以抗肌动蛋白的抗体作一抗、金颗粒标记的蛋白A作二抗的间接免疫电镜实验结果表明,在实验组间期细胞核的核仁、集缩染色质和核基质以及中期染色体上都有很多金颗粒分布。上述结果证明,肌动蛋白是多头绒泡菌细胞核和染色体及其骨架的组成成分。     

扁绒泡菌Physarum compressum原质团细胞核核骨架制备技术的研究

以扁绒泡菌显型原质团为材料,进行细胞核的提纯、核骨架的制备及电镜观察。结果表明：用2mol/L NaCl+TritonX-100/NP40可得到具有复合纤维的核骨架,而用Lis + TritonX-100/NP40得到的核骨架具有核纤层,不使用RNase得到了具有网状的细胞核骨架,RNA在核骨架的结构形态中起重要作用。阐述了原质团中游离细胞核在细胞生物学研究中的意义。     

扁绒泡菌Physarum compressum原质团细胞核核骨架制备技术的研究

以扁绒泡茵显型原质团为材料,进行细胞核的提纯、核骨架的制备及电镜观察。结果表明：用2mol／L NaCl＋TritonX-100／NP40可得到具有复合纤维的核骨架,而用Lis＋TritonX-100／NP40得到的核骨架具有核纤层,不使用RNase得到了具有网状的细胞核骨架,RNA在核骨架的结构形态中起重要作用。阐述了原质团中游离细胞核在细胞生物学研究中的意义。     

HMG_(17)非组蛋白与转录活性基因的关系

 用核内蛋白质与经0.4mol/L NaCL抽提后的细胞核重组,以DNA酶I消化法为测定活性基因的指标,观察猪胸腺HMG_(17)非组蛋白对细胞核中活性基因的影响。结果显示:猪胸腺HMG_(17)使细胞核对DNA酶I作用的敏感性增加,因此认为HMG17为使细胞核胞核中基因呈较大活性的重要因素。     

与大鼠Morris肝癌7777相关的染色质蛋白的免疫亲和层析分离与鉴定

 用5mol/L尿素,将大鼠Morris肝癌7777染色质解离为染色质非组蛋白 (UP组分)及染色质沉淀(UC组分)。UP(含90—95％非组蛋白)用免疫亲和层析(与大鼠Morris肝癌7777去组蛋白染色质抗体交联)分级,经2mol/L NaSCN及8mol/L尿素分部洗脱。将UP及UC,来自UP亲和层析的2mol/L NaSCN及8mol/L尿素洗脱组分同时进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。以大鼠Morris肝癌7777去组蛋白染色质抗体作探针,进行免疫显迹(Immunoblot)测定。在UP部分出现二条阳性带,分子量为:200K及116K。UC部分有三条染色不很深的阳性带,分子量为200K,118K及91K。来自UP亲和层析的2mol/L NaSCN及8mol/L尿素洗脱部分分别有一条浓而清晰的阳性带,分子量分别为74K及83K。用酶联免疫吸附法(E1isa)测试从UP凝胶上切割下的阳性区带,其免疫特异性显著。     

多头绒泡菌核仁及其骨架中原肌球蛋白的免疫细胞化学鉴定

分离多头绒泡菌(physarum polycephalum)细胞的核仁,先用Dnase I消化,去除核仁内的DNA;然后用025mol/L (NH4)2ＳＯ４和2mol/L NaCl相继抽提去掉大部分蛋白质,制备成核仁骨架。SDSPAGE分析结果表明,核仁骨架中含有约20种多肽,其中包括37kD左右与原肌球蛋白分子量相当的多肽。以兔抗原肌球蛋白抗体为一抗,FITC标记的羊抗兔IgG抗体为二抗的间接免疫荧光检测结果表明,核仁和核仁骨架样品都能发出明亮的荧光,而对照样品未见明亮的荧光。间接免疫斑点印迹检测结果进一步证明,在核仁骨架的蛋白质成分中存在原肌球蛋白。胶体金免疫电镜检测结果显示,标记原肌球蛋白抗体的标本上有较多的金颗粒,而对照组标本上只有极少的金颗粒。金颗粒在核仁中主要呈散在分布。     

HeLa细胞核和核骨架含有肌动蛋白

提取HeLa细胞核并制备核骨架标本,以抗肌动蛋白抗体为探针,采用SDS－PAGE、免疫荧光和免疫印迹等方法,对HeLa细胞细胞核和核骨架中的肌动蛋白进行了研究,并用鬼笔环肽荧光染色方法研究了其中的F－肌动蛋白。在荧光显微镜下观察到：代表肌动蛋白的特异性荧光分布在细胞核和核骨架中,说明肌支蛋白是细胞核和核骨架的固有成分;代表F－肌动蛋白的特异性荧光存在于细胞和核骨架中,说明细胞核和核骨架含有F－肌动蛋白。免疫印迹结果进一步肯定了细胞核和核骨架中肌动蛋白的存在。     

扁绒泡菌Physarum compressum原质团细胞核核骨架制备技术的研究

以扁绒泡菌显型原质团为材料,进行细胞核的提纯、核骨架的制备及电镜观察。结果表明:用2mol/LNaCl+TritonX-100/NP40可得到具有复合纤维的核骨架,而用Lis+TritonX-100/NP40得到的核骨架具有核纤层,不使用RNase得到了具有网状的细胞核骨架,RNA在核骨架的结构形态中起重要作用。阐述了原质团中游离细胞核在细胞生物学研究中的意义。     

银杏与玉米花粉肌动蛋白含量的比较研究

通过免疫印迹鉴定,证明银杏(Ginkgo biloba L.)花粉中存在肌动蛋白。同时对银杏和玉米(Zeamays L.)花粉肌动蛋白含量进行了比较。结果表明,银杏花粉肌动蛋白含量明显少于玉米花粉肌动蛋白含量。SDS-PAGE扫描图谱显示,银杏花粉肌动蛋白含量只有玉米花粉的1/6。两种花粉DNaseⅠ活性抑制结果表明,银杏花粉肌动蛋白含量约为玉米花粉的1/7。     

猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装技术研究*

目的:探索猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLPs)的高效组装技术,提高VLPs的稳定性。方法:利用大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装为VLPs,分析不同离子强度下VLPs的稳定性。利用切向流技术添加尿素,降低pH,可使VLPs解组装,利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和pH,实现VLPs的高效再组装。结果:PCV2 Cap蛋白自组装VLPs在150mmol/L NaCl下稳定性较差,而在500mmol/L NaCl下可提高VLPs的稳定性,但仍较易发生聚集,核酸含量均较高。在150mmol/L NaCl、300mmol/L尿素和pH 5.5的缓冲体系条件下,能够使VLPs解组装。经25%~50%饱和硫酸铵(V/V)分级沉淀粗纯,阴离子交换层析500mmol/L NaCl下洗脱获得精纯Cap蛋白,蛋白质纯度≥95%,并能够有效去除核酸。通过切向流技术去除体系中的尿素,并将NaCl浓度提高至1mol/L、pH提高至8.0,改变蛋白质表面静电荷分布,实现VLPs的高效、均一再组装,组装效率≥99%,回收率为65.85%,并明显提高VLPs的稳定性,能够稳定保存6个月以上。结论:利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和pH,实现VLPs的高效再组装。     

盐胁迫对石蒜叶片形态结构和生理指标的影响

以石蒜为试材,测定了0.1、0.5、1.0mol/L NaCl胁迫下叶片的超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）的活性,可溶性蛋白、不溶性蛋白以及脯氨酸、丙二醛含量等生理指标的动态变化。用石蜡切片法对不同浓度NaCl胁迫后的叶片结构特征作比较,进行其抗盐性分析。结果表明：随NaCl浓度增加,对石蒜形态结构的影响表现在其叶片长度的变化及叶细胞的受损程度等方面;随NaCl浓度的增加和处理时间的延长,SOD和POD活性,不溶性蛋白、脯氨酸含量均呈先升后降趋势;可溶性蛋白呈先降后升趋势;丙二醛含量呈整体上升趋势。石蒜叶片各生理指标的变化通常在NaCl处理后的第7周和第8周为转折点。石蒜对低浓度的NaCl胁迫具有一定的耐受性。     

The Effect of NaCl on growth, N2 fixation (acetylene reduction), and percentage total nitrogen in Leucaena leucocephala (Leguminosae) var. K-8

Leucaena leucocephala var. K-8 is a fast-growing, tropical leguminous tree that has multiple economic uses. This study was conducted to evaluate the effect(s) of varying NaCl concentrations on growth, N(2) fixation, and percentage of total tissue nitrogen in different organs in L. leucocephala. Seeds were germinated and grown for 10 wk with a nitrogen-free fertilizer applied every 2 wk. At 10 wk, plants were treated for either 0, 7, 14, 21, or 28 wk with either deionized water (control), 0.00625 mol/L, 0.0125 mol/L, 0.025 mol/L, 0.05 mol/L, or 0.1 mol/L NaCl in addition to the fertilizer every 2 wk. Growth was measured as plant height, nodule number and mass, and dry tissue mass. N(2) fixation was measured by the acetylene reduction assay. Percentage of tissue nitrogen was determined using Kjeldahl analysis. In younger plants (7-wk treatment), major fluctuations in NaCl tolerance were observed in the different plant organs. As plants matured (14- and 21-wk treatment) NaCl concentrations of 0.025 mol/L and higher caused the greatest reduction in growth and tissue nitrogen. We conclude that NaCl concentrations of 0.025 mol/L and greater caused a major decrease in growth, N(2) fixation, and percentage of tissue nitrogen in L. leucocephala plants that were less than 1 yr old.     

黑腹果蝇对高盐的产卵避性反应及其生物学意义

【目的】研究黑腹果蝇Drosophila melanogaster对高盐的产卵避性,并通过高盐下后代生存率和发育历期的变化来揭示这一现象的生物学意义。【方法】应用产卵双选择装置,检测黑腹果蝇和雅库巴果蝇D. yakuba雌成虫分别对含有0. 25和1 mol/L NaCl的培养基的产卵选择性;利用产卵装置,检测黑腹果蝇对1 mol/L NaCl的位置效应;通过强迫产卵实验检测钠盐胁迫下黑腹果蝇的产卵能力;通过毛细管摄食法和观察口器延伸,检测钠盐胁迫下黑腹果蝇的摄食行为。利用黑暗条件和突变体Orco2分别探究视觉和嗅觉对高盐的产卵选择性。通过外科手术法摘除黑腹果蝇前足部分味觉感受器,并使用咸味突变体Ionotropic Receptor 76b (IR76b),研究介导该行为的感觉系统。在含有不同浓度NaCl (0,0. 25,0. 50,0. 75和1 mol/L)的培养基上培养黑腹果蝇,探究NaCl对黑腹果蝇后代的发育历期和存活率的影响。【结果】雌性黑腹果蝇产卵对高盐产生避性反应,对0. 25和1 mol/L NaCl的产卵偏嗜指数分别为-0. 45和-0. 59;雅库巴果蝇对高盐的反应与黑腹果蝇相同,对0. 25和1 mol/L NaCl的产卵偏嗜指数分别为-0. 78和-0. 99;并且两种果蝇均对0. 25和1 mol/L KCl和CaCl2产生产卵避性反应。黑腹果蝇避开含0. 25和1 mol/L NaCl培养基,位置指数分别为-0. 74和-0. 88。高盐不影响黑腹果蝇的生育能力,其对0,0. 25和1 mol/L NaCl的产卵指数分别为5. 59,6. 63和5. 41。黑腹果蝇对0. 25和1 mol/L NaCl摄食产生明显排斥反应,摄食指数分别为-0. 37和-0. 41,且随浓度增大食欲越低。同时在黑暗条件下,黑腹果蝇对0. 25和1 mol/L NaCl仍产生了显著的避性反应,产卵偏嗜指数分别为-0. 49和-0. 59,摘除前足的黑腹果蝇对0. 25 mol/L NaCl的产卵偏嗜指数为-0. 05,IR76b突变体对高盐的产卵避性反应消失,对0. 25和1 mol/L NaCl的产卵偏嗜指数分别为0. 46和0. 39。0. 25 mol/L NaCl明显延长了后代成蛹时间0. 40 d,后代幼虫存活率降低了16. 5%,而在1 mol/L NaCl上后代卵完全不能形成蛹和成虫。【结论】黑腹果蝇雌成虫通过咸味感觉器官感知高盐而产生产卵避性反应,以促进后代的生长发育和提高后代的幼虫存活率。     

Mechanism of calcium-dependent salt tolerance in cells of Nitellopsis obtusa: role of intracellular adenine nucleotides

Abstract. The tonoplasts of internodal cells of Nitellopsis were removed by perfusing the vacuoles with media containing a Ca² chelator, EGTA. Treatment of tonoplast-free cells with 100 mol m³ NaCl induces a large membrane depolarization, a drastic decrease in the membrane resistance and an increase in Na⁺ influx. These events are identical to those that occur in intact cells subjected to high NaCl. These responses to NaCl are prevented if 10 mol m³ Ca²⁺ is supplied together with 100 mol m³ NaCl. The protective effect of Ca²⁺ is evident only when the intracellular ATP concentration exceeds 0.1 mol m³ and does not occur full when the intracellular ATP is removed. AMP at concentrations greater than 0.5 mol m³ or 0.25 mol m³ AMPPNP can replace ATP. It is concluded that ATP does not act as an energy source nor as a substrate for protein phosphorylation. ATP seems to exert its effects as a coeffector with Ca²⁺ in regulating the Na⁺ permeability of the plasma membrane.     

Growth and soluble amino acid composition inPenicillium corylophilum andHalobacterium halobium grown under salt stress

Penicillium corylophilum can grow in a medium containing NaCl up to 3 mol/L, whereasHalobacterium halobium can grow at 5 mol/L NaCl. At 1 and 3 mol/L NaCl the number of spores decreased with constrictions in the conidiophore and damage in phialides and metulae while there were no morphological changes in bacterial cells grown in the presence of NaCl. Addition of some amino acids or sugar alcohol to the growth medium enhanced the growth of both organisms in the presence of NaCl. Total protein in the fungal cells grown at 1 mol/L NaCl increased by 50% more than in the control cells but it decreased in the bacterial cells with increasing NaCl concentration in the growth medium. Total saccharides and lipids increased in both organisms with increasing NaCl in the growth medium. The endogenous amino acid pool increased in fungal and bacterial cells in the presence of NaCl. Proline was the major amino acid in the fungal cells at 1 mol/L NaCl, representing 41.3% of the total identified amino acids at this concentration, being 8.4 times higher than in the control cells. Glutamate and aspartate showed the highest amount in bacterial cells at 3 mol/L NaCl. Isoleucine showed the highest increase at 3 mol/L NaCl, being 54 times higher than in the control cells.     

建立和优化双向电泳分析柱花草根系蛋白谱的方法

本研究以柱花草根系为材料,比较了不同蛋白质提取方法和蛋白上样量等因素对双向电泳方法分析根系蛋白图谱的影响。结果表明,在苯酚法提取蛋白中,加入0.7mol·L-1NaCl和20%乙醇,并在蛋白沉淀过程中加入1/10倍体积5mol·L-1NaCl,能够有效去除组织样品中的非蛋白成分,结合使用pH4～7范围的IPG胶条,1mg根系蛋白可以在双向电泳图谱上分辨出较多蛋白点,图谱背景清晰,该体系适合柱花草根系蛋白质的双向电泳分析。