西南部分野生羊肚菌ITS序列鉴定及生境分析

分析了川渝7个县（/区）18个位点野生羊肚菌的生态环境;同时对羊肚菌的品种进行鉴定。运用SPSS对各位点野生羊肚菌的生态环境相关数据(包括海拔、生长环境、土壤物理指标和有机质、总氮、总磷等化学成分)进行因子分析。采用内转录间隔区（ITS）序列,结合观察特征,鉴定各位点羊肚菌品种。各位点样品PCR 扩增所得片段大小约为1 200~1 800 bp,经过测序及BLAST 分析,18个位点羊肚菌品种集中为羊肚菌（Morchella esculenta）、尖顶羊肚菌（Morchella conica）、小羊肚菌（Morchella deliciosa）等7个种类,与根据形态命名方式得到的结果差距较大;其生境中关键因子为有机质,范围为0.55%~2.60%;其次是磷元素和含水量。西南地区野生羊肚菌生境相似度较高,品种较为集中,为西南地区羊肚菌野生资源研究和人工栽培提供了参考依据。     

六妹羊肚菌的化学成分

以六妹羊肚菌Morchella sextelata为研究对象,对其子实体的化学成分进行研究。采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）进行子实体芳香物和亲脂性提取物的化学成分分析,同时对其亲脂性提取物的抗氧化和抗菌活性进行了初步评价;采用正反相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等多种色谱分离方法进行化学成分的分离纯化,并通过核磁共振（NMR）、质谱（MS）等技术鉴定化合物结构。从六妹羊肚菌子实体的芳香物中共鉴定出26个化合物,辛-1-烯-3-醇（32.53%）、(E)-辛-2-烯醛（25.15%）和苯乙醛（12.31%）为主要成分;从六妹羊肚菌子实体的亲脂性提取物中共鉴定出14个化合物,亚油酸（77.80%）为主要成分;六妹羊肚菌亲脂性提取物仅显示出中等强度的抗氧化活性。从六妹羊肚菌子实体中共分离鉴定出14个化合物,包括7个甾体类化合物,其中化合物1、2、4、7、11、13和14为首次从羊肚菌属中分离得到。本研究首次对六妹羊肚菌的小分子化学成分进行了分析,对羊肚菌活性物质的阐明及进一步开发利用具有重要意义。     

六妹羊肚菌PacBio基因组测序和DNA 6mA甲基化分析

羊肚菌属于子囊门真菌,是世界范围内最受欢迎的食用菌之一。本研究通过PacBio单分子实时测序技术对我国四川省成功栽培的六妹羊肚菌Morchella sextelata SCLS菌株进行全基因组测序,获得其高质量核基因组组装,大小为53.57Mb,重复序列含量为17.03%,包含42条重叠群（contigs）,重叠群N50高达1.82Mb,其中13条重叠群两端均含有端粒重复序列,为完整的染色体。通过链特异性RNA-seq测序和转录本拼接,并结合多种基因预测策略,预测到13 182个蛋白编码基因,包括267个碳水化合物活性酶,11个次生代谢产物合成基因簇。通过与内蒙古地区栽培的六妹羊肚菌菌株NZTD180501373基因组比较发现,六妹羊肚菌进化过程中可能发生过染色体重组事件,二者具有33 055个SNP和48 726个InDel位点差异,并且各自拥有超过6Mb的特有序列。此外,相比于梯棱羊肚菌M. importuna,六妹羊肚菌SCLS菌株中与逆转录转座酶有关的orthogroup发生了扩张,并且拥有5个成员数超过100的特有逆转录转座酶基因家族。对SCLS菌株中的DNA N⁶腺嘌呤甲基化（6mA）修饰进行了鉴定,发现SCLS菌株基因组中0.42%的腺嘌呤被6mA甲基化,其含量显著高于已报道的6种双核亚界（Dikarya）真菌。6mA甲基化位点在逆转录转座子上显著富集,表明六妹羊肚菌中6mA甲基化可能调控逆转录转座子的活性,这也是首次在真菌中报道6mA甲基化与转座子相关。     

六妹羊肚菌多糖的提取工艺优化及结构表征和抗氧化活性

六妹羊肚菌Morchella sextelata是一种珍贵的食药用真菌,具有重要的经济价值。本研究在单因素试验基础上,采用响应面分析法优化其多糖提取工艺,利用Sevage法及透析法对粗多糖进行初步纯化,获得六妹羊肚菌多糖（Morchella sextelata polysaccharide,MSP）组分。采用凝胶色谱-示差-多角度激光光散射（gel permeation chromatography- refractive index-multi angle laser light scattering,GPC-RI-MALLS）、高效阴离子交换色谱（high performance anion exchange chromatography,HPAEC）、傅里叶变换红外光谱仪（fourier transform infrared spectrometer,FTIR）和气相色谱质谱联用仪（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）等对其进行结构分析,并检测了该多糖清除自由基活性的能力。结果表明,六妹羊肚菌多糖最优提取工艺为：提取温度89.94℃、液料比31.07mL/g、提取时间162.86min。在此工艺条件下,提取率为23.98%。该多糖主要由分子量为4.655×10 ⁶Da和6.571×10 ⁴Da的两个组分组成,其单糖组成为葡萄糖、甘露糖、半乳糖,摩尔百分比分别为71.60%、23.70%和4.70%。该多糖的糖苷键主要有T-Glc、1,2-Man、1,4-Glc、1,6-Man、1,3,4-Man、1,4,6-Gal。此外,该多糖具有较强的清除2,2‐联氮基双‐3‐乙基苯并噻唑啉‐6‐磺酸[2,2‐azino bis (3‐ethylbenzothiazoline‐6‐sulfonic acid),ABTS]、1,1‐二苯基‐2‐苦基肼（1,1‐diphenyl‐2‐picrylhydrazyl,DPPH）和羟自由基活性的能力。本研究结果为六妹羊肚菌多糖功能食品的开发和利用提供研究基础。     

微酸性电解水和紫外光结合对采后六妹羊肚菌的保鲜作用

联合使用微酸性电解水和紫外光（SAEW+UV）处理食品是一种延长食品保质期的有效方法。本研究在20℃条件下,观察经SAEW+UV处理六妹羊肚菌Morchella sextelata采后9d内品质的变化。SAEW+UV处理能减少六妹羊肚菌表面附着的细菌和真菌数,提高六妹羊肚菌中超氧化物歧化酶和维生素C含量,降低多酚氧化酶、过氧化物酶含量,并在此基础上改善六妹羊肚菌储存过程中褐变及质地软化,而对六妹羊肚菌失重率、风味和营养成分无明显作用。转录组分析发现,SAEW+UV处理能上调六妹羊肚菌涉及抗氧化酶的基因表达,下调细胞壁降解、细胞凋亡和黑色素合成的基因表达,该结论与上述品质分析结果一致。综上,SAEW+UV处理能够延长六妹羊肚菌的保鲜期。     

初夏格西沟自然保护区菌类资源调查研究Ⅰ--大型菌类的鉴定与分布

目的:对四川省雅江县格西沟自然保护区大型菌类资源种类、菌类分布状况和经济与医药价值进行调查。方法:对保护区内大型菌类的调查主要采用走样线法采集菌类标本,以子实体形态为主,孢子、菌丝形态鉴别为辅进行菌种鉴定。结果:在格西沟自然保护区共走21条样线,采集菌类标本185号,鉴定为18科45种,大型菌类资源主要分布在高山草甸、硬绿常绿阔叶林、针叶阔叶混交林、针叶林等四种生境。结论:保护区具有丰富的菌类种类,菌类的分布与保护区的各种生境密切相关。     

泰山羊肚菌生境调查及营养价值研究

泰山羊肚菌生境调查及营养价值研究高俊杰（山东省泰安市食用菌研究所,２７１０００）羊肚菌Ｍｏｒｃｈｅｌａｅｓｃｕｌｅｎｔａ（Ｌ．）Ｐｅｒｓ．,又称羊肚菜,羊肚蘑、阳雀菌,是美味且营养保健价值很高的一种食用菌,其珍贵程度在欧洲被认为仅次于块菌。为进一步...     

一种六妹羊肚菌的新型柄腐病害

近年来,四川等地种植的六妹羊肚菌先后爆发柄腐病害,造成严重经济损失。本研究对该病害发生情况进行了调查,从四川、河南、甘肃、贵州4个省收集的12份六妹羊肚菌柄腐病子实体,分离纯化得到37株真菌和3株细菌。根据柯赫氏法则,对所有分离纯化得到的疑似病原菌进行了回接试验,最终确定GJB-3菌株为柄腐病的病原菌。经ITS、RPB2和EF1α序列分析,结合菌落形态和显微特征鉴定柄腐病的病原菌为Fusarium nematophilum。本研究为后期羊肚菌生产病害防控提供了有效的基础数据。     

羊肚菌营养方式的稳定碳同位素研究

采用稳定碳同位素分析方法对羊肚菌的营养方式进行了研究.发现山西省关帝山庞泉沟自然保护区羊肚菌生境中的δ13C=-24‰为菌根营养型/腐生营养型分界线;菌盖呈黑色、有纵脉的羊肚菌为腐生营养型,菌盖呈污黄色的羊肚菌为菌根菌营养型;云南、四川、北京等地羊肚菌的营养方式呈现相似规律.     

西南地区部分野生羊肚菌ITS序列鉴定及生境分析

分析了川渝7个县(/区)18个位点野生羊肚菌的生态环境;同时对羊肚菌的品种进行鉴定。运用SPSS对各位点野生羊肚菌的生态环境相关数据(包括海拔、生长环境、土壤物理指标和有机质、总氮、总磷等化学成分)进行因子分析。采用内转录间隔区(ITS)序列,结合观察特征,鉴定各位点羊肚菌品种。各位点样品PCR扩增所得片段大小约为1 200~1 800 bp,经过测序及BLAST分析,18个位点羊肚菌品种集中为羊肚菌(Morchella esculenta)、尖顶羊肚菌(Morchella conica)、小羊肚菌(Morchella deliciosa)等7个种类,与根据形态命名方式得到的结果差距较大;其生境中关键因子为有机质,范围为0.55%~2.60%;其次是磷元素和含水量。西南地区野生羊肚菌生境相似度较高,品种较为集中,为西南地区羊肚菌野生资源研究和人工栽培提供了参考依据。     

梯棱羊肚菌营养类型的研究

羊肚菌是羊肚菌属Morchella中所有种的统称,其味道鲜美,深受人们的喜爱。目前,大多数羊肚菌物种仍然无法实现人工栽培,其重要原因之一就是它们营养类型仍然不甚清楚。梯陵羊肚菌M. importuna是少数可以人工栽培的羊肚菌之一,其腐生营养特性已经明确,但是否与植物根系存在共生营养关系仍然有疑问。为了探究梯陵羊肚菌菌丝与植物根系之间的相互关系,本研究选用梯棱羊肚菌2个不同交配型同核体菌株A2（MAT1-2-1）、A50（MAT1-1-1）和1个异核体菌株A59（MAT1-1-1和MAT1-2-1）为材料,将3个菌株分别与杂交白杨717（Populus tremula × P. alba,clone 717）进行共培养试验,观察菌丝与根系之间的互作情况。结果显示,A2、A50和A59菌丝体都能使杨树根系发生形态变化,产生明显的菌套（mantle）以及“Y”型菌根状结构,但均未观察到明显的哈蒂氏网（Hartig net）结构。研究表明,梯棱羊肚菌与杨树根系存在某种营养关系,但与外生菌根的共生关系不同。     

六妹羊肚菌工厂化制备液体菌种繁育条件的优化

为适合大规模工厂化制备羊肚菌液体菌种,以提高菌丝体生物量为目的,控制菌丝球直径,使用六妹羊肚菌Morchella sextelata,采用单因素、Plackett-Burman、响应面Box-Behnken实验摇瓶培养优化液体菌种制备条件,发酵罐扩大培养,具体参数为玉米淀粉2.5%、麸皮6%、酵母粉0.4%、葡萄糖2.5%、蛋白胨0.25%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、接种量10%、pH 5.5、转速200-500r/min、温度25℃、培养1-3d,在该条件下羊肚菌菌丝体干重可达16mg/mL,菌丝球直径降至1.5mm以下,密度达到2 967个/mL,从母种到栽培种仅需13-19d。本研究结果为羊肚菌工厂化液体菌种制备和栽培提供了理论基础。     

梯棱羊肚菌镉胁迫响应基因ATX1功能分析

梯棱羊肚菌Morchella importuna是一种可以大田覆土栽培的珍稀食用菌,而土壤重金属污染状况日益严重,对梯棱羊肚菌菌丝生长和子实体产品质量安全构成了潜在的威胁。本研究先采用镉离子胁迫处理梯棱羊肚菌菌丝体,RT-PCR检测发现候选基因ATX1的表达量显著下调。克隆梯棱羊肚菌ATX1基因,对ATX1p蛋白结构进行功能预测,发现ATX1p可能与铜离子转运及重金属胁迫相关。然后分别构建ATX1的超表达和RNAi基因沉默载体,采用农杆菌介导的转化方法,将其转入梯棱羊肚菌同核体菌株A50中,分别筛选到4个ATX1表达显著上调的超表达转化子和4个ATX1表达显著下调的RNAi基因沉默转化子,镉敏感性检测发现ATX1的RNAi基因沉默转化子表现为镉抗性增强,而ATX1超表达转化子则表现为镉抗性减弱。结果表明,梯棱羊肚菌ATX1基因表达与镉抗性呈负相关,ATX1p可能在梯棱羊肚菌镉胁迫响应过程中发挥着某种重要作用。     

梯棱羊肚菌全基因组SNP/Indel分析及基于Indel标记的遗传连锁图谱构建

基于梯棱羊肚菌Morchella importuna两个子囊孢子培养物的全基因组测序数据,对全基因组范围内的变异位点进行分析。共鉴定到18 438个变异位点,平均每Mbp的变异位点数量为361个;变异位点以单核苷酸多态性SNP为主,共计17 104个,基因组中SNP的频率为335SNPs/Mbp;Indel多态性位点1 334个,以2-10bp的插入缺失为主;73.4% SNP/Indel位于基因间隔区域,外显子区域共检测到3 042个变异位点,占总数的16.50%;对基因功能产生确定影响的移码突变有1 088个,占5.90%,错义突变916个,占比4.97%;不同Scaffold上的SNP/Indel出现频率不同,SNP频率最大的为Scaffold80,平均每Mbp包含2 856个SNP,频率最低为Scaffold60和Scaffold75,分别为16SNPs/Mbp和30SNPs/Mbp;对≥11bp的Indel变异位点进行标记开发和多态性群体分析,成功开发出75对Indel标记。采用原生质体单细胞分离技术,获得了梯棱羊肚菌M04的两个可亲和的同核体菌株M04P01和M04P40,同时采用来自M04子囊果的58个单孢菌株作为作图群体,初步构建了包含75个Indel标记和1个交配型基因的梯棱羊肚菌遗传连锁图谱,共获得12个连锁群,连锁群总长度273.7cM。     

单孢分离菌株的异核不对称特性揭示梯棱羊肚菌为假同宗结合真菌

本文以基因组数据显示只具有MAT1-1 idiomorph的单孢菌株YPL6-3和只具有MAT1-2 idiomorph的单孢菌株YPL6-1为材料,研究它们子代的子囊果、单孢菌株群体和同一子囊中8个单孢菌株的交配型分布情况。YPL6-3和YPL6-1菌株分别隔离栽培和互补混栽均能形成正常的子囊果,其子囊果菌柄交配型分布与亲本菌株有关。PCR扩增检测235株子代单孢菌株的交配基因出现有趣现象：一些菌株的MAT1-1-1基因电泳条带强,而MAT1-2-1基因的条带弱;另一些菌株则MAT1-1-1基因条带弱,而MAT1-2-1基因条带强。同时也有两基因条带都强或者一基因条带强,另一基因无条带的菌株。从3个子囊果中共挑取了10个子囊,并对每个子囊中的单孢进行独立分离,PCR扩增并电泳检测交配基因时也出现了上述相同的情况。若MAT1-1-1强,则MAT1-2-1弱或无,这样的菌株在同一子囊中不会超出4个,反之亦然。利用长片段PCR扩增YPL6-1和YPL6-3菌株的全长MAT idiomorph,利用Nanopore测序技术对扩增子进行单分子实时测序,2次重复实验的序列比对发现：菌株YPL6-1中存在99.63%和99.81%的MAT1-2 idiomorph分子及0.37%和0.19%的MAT1-1 idiomorph分子;菌株YPL6-3中存在99.45%和99.74%的MAT1-1 idiomorph 分子及0.55%和0.26%的MAT1-2 idiomorph分子。从而证实,这2个基因组测序和PCR扩增都只能检测到一种交配型的菌株,其实是异核菌株,只是2种交配型核的数量占比存在较大偏离。根据上述现象推断,梯棱羊肚菌的子囊孢子都是异核的,萌发后形成的单孢菌株具有异核不对称特点,从而推测梯棱羊肚菌是一种特殊的假同宗子囊菌,同时也揭示了梯棱羊肚菌单孢出菇的真相。     

羊肚菌不同单孢及不同萌发孔菌丝间的遗传多样性

本研究对来自不同单孢和不同萌发孔菌丝的166份羊肚菌菌株进行形态研究、交配型基因检测、基于ISSR的遗传多样性分析和菌株杂交选育。结果表明,来自不同单孢及其不同萌发孔菌丝培养的菌株间均存在不同程度的形态和遗传差异。4条ISSR引物共扩增出条带清晰的22条多态性谱带,多态性比率为88%。基于遗传相似性系数（GS）、不加权成对群算术平均法（UPGMA）构建的系统树,可将供试菌株分为梯棱羊肚菌Morchella importuna和六妹羊肚菌M. sextelata两大类群。聚类分析发现不同物种间的单孢菌株和单丝菌株的遗传差异显著;同一单孢不同萌发孔菌丝的菌株间存在较大的遗传分化,遗传多样性丰富。交配型基因检测证实羊肚菌是异宗结合型真菌,同一单孢的不同萌发孔菌丝体含相同的交配型基因（MAT 1-1-1或MAT 1-2-1）。遗传多样性结果表明：梯棱羊肚菌比六妹羊肚菌的遗传背景更广泛。此外,ISSR分子标记也表明仅依靠菌丝和菌核的形态特征并不能准确衡量羊肚菌菌株间的亲缘关系。研究羊肚菌单孢菌株、单丝菌株间的形态和遗传特征,将为羊肚菌优质菌种的精准选育提供理论参考。