850 nm波长微激光对肥大细胞脱颗粒及释放组胺的影响

目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞(RBL-2H3 (Rat basophilic leukemia))照射后组胺释放的影响.方法:肥大细胞铺于96板上,密度为5×104/孔,12 h后细胞经D-Hank's缓冲液清洗3次用于实验.肥大细胞经微激光照射15 min后,轻轻吸取细胞上清液,加入等量0.1 mmol/L的邻苯二甲醛,充分混匀,室温下反应20 min后,于荧光酶标仪上测量混合物的荧光光谱.结果:微激光照射之后的肥大细胞上清液,能发出440 nm左右的荧光,说明850 nm微激光能使肥大细胞脱颗粒,从而判断850 nm微激光能作为仿灸仪器的光源.     

低强度激光血管内照射治疗的机理初探

用532nm的激光作为激光光源分别测量正常血液、血浆及HBsAg阳性血液、血浆的荧光光谱。血液光谱的测量结果显示,两种血液樯本都在630nm及710nm附近出现有荧光峰值。从光谱学的角度分析,可得出激光照射血液治疗的内在机制在激光照射可增强血液的携氧能力,从而促进了机体的新陈代谢。血浆图谱测量结果显示,正常血浆及HBsAg阳性血浆在738nm处的荧光强度有显著差异,可作为临床光谱诊断中判断HBsAg阳性的标准和依据。对HBsAg阳性血液的生化检测结果显示,He-Ne激光照射可抑制或杀伤乙肝病毒。     

微激光照射肥大细胞对胞内钙离子浓度的影响

目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞照射后胞内钙离子浓度的影响。方法:实验前12 h,将肥大细胞接种于激光共聚焦专用培养皿中,然后用D-Hank’s液洗涤3次,加入2 m L D-Hank’s液,按照照射时间不同共分六组(Control,1 min,2 min,2.5 min,3 min,4 min),其中,空白对照组不进行激光照射处理;激光照射后,弃去D-Hank’s液,加入含有Fluo-3/AM的D-Hank’s液1 m L,放入培养箱中孵育30 min后,用D-Hank’s液洗涤3次去除胞外多余的Fluo-3/AM,再加入含有10%FBS的D-Hank’s液2 m L,置激光扫描共聚焦显微镜检测。结果:空白对照组中细胞内未见荧光,说明此时胞内无钙离子,但从1 min开始在细胞中发现荧光,而且发现随着照射时间的加长,其荧光强度越来越强,这可能与微激光照射时间越长从而刺激胞内出现更多的钙离子有关。从上面的实验说明850 nm微激光能作为仿灸仪器的光源。     

He-Ne激光照射对血液及其组分荧光光谱影响的实验研究

为研究弱激光照射对人血液携氧能力的影响及机制,我们用荧光仪分别测量了He-Ne激光照射前后正常血液及其组分（血浆、红细胞）的荧光光谱,研究了激光照射导致的光谱变化,并分析了光谱变化与血液携氧能力改变的关系。实验结果显示：全血液标本在490nm及614nm附近有荧光峰值;血浆的荧光则主要分布在420－500nm之间;红细胞在500nm及614nm附近有荧光。He-Ne激光照射后,全血液及红细胞在614nm处的荧光谱都有较明显的变化,且较相似。由此可得出结论,He-Ne激光照射可影响血液的携氧能力。     

一种酵母细胞生长现象的实时单细胞拉曼光谱观察

用拉曼镊子观察单个即发活性干酵母(Saccharomy cescerevisiae)细胞在2.0%葡萄糖溶液中的活化过程,收集其拉曼光谱。结果发现,在某一批次的产品中,酵母细胞的1364cm-1峰强度随着细胞的活化而显著增加,531cm-1、652cm-1、1053cm-1等源自葡萄糖或葡萄糖基的信号峰也会随细胞的生长而增强,随后增强的还有1432cm-1、1448cm-1、1561cm-1等源自脂类物质的峰,而源自蛋白质及脂类的1000cm-1、1445cm-1、1655cm-1等峰的信号强度基本不变,酵母细胞代谢活跃的标志峰1603cm-1也基本不变。该批次产品中,10次实验有7次观察到上述现象,而在别的批次产品中并没有观察到该现象。用单细胞拉曼光谱实时记录了这一特殊的生长现象。     

正常和癌变胃粘膜组织的共焦拉曼光谱初探

目的:分析研究胃正常和癌变粘膜组织的拉曼光谱特征,为拉曼光谱应用于胃癌的临床检测诊断奠定基础。方法:收集胃镜检查中活检的19例正常和12例癌变胃粘膜组织标本,采用785 nm激发光拉曼光谱仪进行拉曼光谱采集。比较分析胃正常和癌变粘膜组织的拉曼光谱特征差异并研究其区分正常和癌变组织的价值。结果:1)特征峰1 098 cm-1、1 444 cm-1、1 555 cm-1、1 660 cm-1等在胃癌组织中发生了移位,平均位移(2.57±1.28)cm-1,以红移为主;2)癌变组织中相对峰强比I1087 cm-1/I1207 cm-1≥1.87,其区别胃癌和正常胃粘膜组织的准确率、灵敏度和特异度分别为87.1%、83.3%、89.5%;3)癌组织中增加了表征蛋白质的特征峰1 262 cm-1、1 586 cm-1,但同时减少了表征蛋白质和脂质特征峰1 172 cm-1。结论:拉曼光谱不仅可以准确区分正常和癌变,而且可以探索癌变相关的分子生化改变。拉曼光谱在胃癌的跟踪发现和检测诊断中具有良好前景。     

微藻细胞油脂含量的快速检测方法

以斜生栅藻(Scenedesmus obliquus JNU20)为实验材料,采用尼罗红(NR)荧光光谱法和傅里叶变换红外光谱法(FTIR)测定该藻细胞中的油脂含量。研究结果表明NR的最佳染色条件为:染色前微波处理40 s,二甲基亚砜体积分数1%, NR最终质量浓度1.5 μg/ml,染色时间5 min,染色温度40℃。比较了NR荧光光谱法、FTIR与传统重量法测定的该藻在不同时相的油脂积累情况,利用激光共聚焦显微镜观察了细胞中油体形成的动态过程。实验结果表明NR荧光光谱法、FTIR与传统重量法测定的结果显著相关(R²=0.9258, R²=0.9844),但NR荧光光谱法和FTIR更简便快速,研究结果为规模化筛选高含油量藻株及跟踪产油微藻油脂积累过程奠定了基础。     

动脉粥样硬化斑块的微区拉曼光谱检测

为探讨动脉粥样硬化斑块的微区拉曼光谱特征,以球囊损伤日本长耳白兔右侧颈总动脉后予以高脂饮食喂养,在实验过程中监测体重和血脂变化情况。3个月后,以中国斑点蝰蛇毒和组胺加以触发使斑块破裂,将动物处死并查找动脉硬化斑块,动脉组织经大体病理分类后,进行微区拉曼光谱及病理检测。结果显示:动脉粥样硬化斑块的拉曼光谱图在1450及1660cm-1处均有明显的胆固醇等脂质特征峰。特征峰曲线下相对面积统计结果表明:明显动脉粥样硬化斑块的谱峰下相对面积(5.80×10-3±3.51×10-3)显著高于轻度动脉粥样硬化组织(2.01×10-3±1.49×10-3)及正常动脉组织(1.01×10-3±0.94×10-3),P<0.05。正常动脉组织拉曼光谱曲线较光滑,无明显特征峰。血栓形成处拉曼光谱图荧光背底较强,未见特征谱峰。该研究结果证明微区拉曼光谱可以对动脉粥样硬化斑块的胆固醇等脂质含量进行特异性定量检测,表明微区拉曼光谱是评估动脉粥样硬化程度及斑块稳定性的可行方法。     

美白祛斑药物对强脉冲光作用下的鼠皮黑色素的影响

观察美白祛斑药物对强脉冲光(intensive pulse light, IPL)作用下的鼠皮黑色素的影响,探讨IPL作用下,皮肤的黑色素的增生和美白药物之间的作用关系,以期探寻美白药物在减少光子嫩肤术并发症的作用机制.以小白鼠作为研究对象,用IPL在一定的波长及能量密度照射活体小鼠皮肤, 在照射后15 min涂抹低浓度的维A酸霜,分别在照射后的4 h、5 d,用显微镜观察涂霜剂、没涂霜剂的皮肤黑色素及其周边组织的变化情况;在照射后的1 d用多光子显微镜观察涂霜剂、没涂霜剂皮肤组织的变化.讨论了美白祛斑药物在光子嫩肤过程中抑制黑色素生成的过程,为如何减少光子嫩肤术并发症提供参考和借鉴.     

Q开关激光爆破技术对豚鼠皮肤色素的影响

目的研究Q开关激光爆破术对豚鼠黑素细胞的影响及照射周边组织的变化,为临床治疗皮肤色素病变提供实验依据。方法用Q开关-YAG激光分别照射豚鼠黑色毛区及棕色毛区(波长分别用1064nm和530nm,光斑直径2mm),实验动物20只,随机分四组,分别于照射后间隔7d、10d、14d取材,照射前取材作对照,10%甲醛固定,冰冻切片,分别用HE和DOPA反应显示黑素细胞。结果照射后皮肤黑色素颗粒逐渐减少至消失,照射后30d黑毛区与棕毛区肉眼见照射区皮肤变白,毛也变白,HE染色皮肤、毛囊及毛未见黑色素颗粒,DOPA反应表皮黑色素细胞、毛囊和毛均呈阴性反应,部分豚鼠棕毛区毛及毛囊见黄色色素颗粒。结论波长1064nm和532nm Q-YAG激光对豚鼠皮肤黑色素细胞和黑色素颗粒的破坏效果显著;但对棕色色素清除效果较差。波长1064nm Q-YAG激光对豚鼠皮肤黑色素消减与照射次数有关,与照射间隔时间长短无关。     

光谱法研究甲醇和盐酸对短梗霉黑色素的分离效果

应用紫外和红外光谱对甲醇和盐酸分离的短梗霉黑色素进行了分析。分析结果表明:甲醇和盐酸法分离的黑色素在紫外图谱215 nm处都有最大吸收峰,而甲醇法分离的黑色素其紫外图谱在260、280 nm处无吸收峰表明此法分离的黑色素不含核酸及蛋白质;红外图谱中,在3340 cm-1、1637 cm-1处有很强的吸收峰表现为黑色素的典型特征;同时在对照中发现盐酸多次处理后的黑色素显示较少的结构信息,说明盐酸沉降法有可能破坏黑色素的结构。由此选用甲醇作为沉淀剂有利于黑色素的纯化及确保其结构信息的完整,为进一步分析短梗霉黑色素的结构表征奠定了基础。     

近红外与荧光光谱法检测血糖试验研究

采用荧光光谱法检测血糖。结果表明,检测血清的最佳激发波长为340 nm,血清中葡萄糖的发射峰位置为470 nm。随着血清中葡萄糖浓度的增加,荧光光谱图中荧光峰处荧光强度,面积积分强度整体呈上升趋势,荧光峰的半峰全宽整体呈现下降趋势。利用近红外光谱法检测血糖,血清可分辨的光谱区域位于5 600~6 060 cm-1范围内,不同血糖浓度的吸收峰均位于5 768 cm-1处。随着血糖浓度的增大,其吸收峰处的吸光度逐渐增大,面积积分强度也呈上升趋势。分析二者的优缺点,荧光分析法受外界因素的干扰更小,精确度更高,光谱参数与血糖浓度之间的规律更明显,在有创检测方面具有更明显的优势,而近红外光谱法检测血糖则在无创血糖检测方面具有更大的潜力。     

基于拉曼光谱的鼻咽癌细胞株总蛋白放射敏感性研究

本文以鼻咽癌细胞株CNE2为放射敏感性的研究对象,经不同剂量X射线照射及不同时间培养后分别提取总蛋白,用共聚焦显微拉曼光谱仪检测其拉曼光谱。统计分析表明:被测样品的拉曼光谱中观察到一些可以归属于蛋白质物质的较为明显的基团频率振动峰;不同剂量的X射线照射后,总蛋白质的平均拉曼光谱与对照组谱形基本一致,但与对照组间的光谱存在着对应峰信号强度的不同。实验提示:照射后谱峰强度的增大或减小,提示着相关物质含量有所改变。分析照射后癌细胞总蛋白拉曼光谱的变化情况,结合数学统计方法,以探寻放射敏感性的特征拉曼标志,可以作为研究肿瘤放射敏感性的手段之一。     

Nd:YAP激光辐照对雨生红球藻生理效应的荧光分析

目的：Nd：YAP激光辐照对雨生红球藻生理效应的荧光分析j方法：利用Nd：YAG激光（功率10W,辐照剂量为15s、35s、55s）辐照雨生红球藻,在对辐照细胞进行生长测定以及色素吸收光谱分析的基础上,进一步利用激光共聚焦扫描显微镜（LSCM）,在波长488nm的Ar^＋激发光条件下,对细胞的自体荧光以及吖啶橙染色的细胞核荧光物质进行定位定量分析,获得细胞自发荧光光谱和细胞核荧光物质的荧光光谱。结果：①低剂量的Nd：YAG激光辐照（15s左右）对藻细胞有促长作用,生长速率提高20．3％,色素吸收峰的峰值提高25．3％。较高剂量的Nd：YAG激光辐照（35s、55s）对藻细胞生长有抑制作用,并有明显的致死、致突效应。②对自体荧光的分析结果表明,与对照组相比,低剂量激光辐照组的细胞,在荧光光谱的峰型及峰值上变化不大,在682nm处均有较强的荧光发射,而高剂量激光辐照组的细胞多无明显的荧光发射。③对细胞核荧光物质的分析,雨生红球藻细胞在530nm（DNA）和640nm（RNA）处均有荧光发射峰。与对照组相比,低剂量激光辐照组的DNA荧光发射有所增强,但RNA的荧光发射则有所减弱;高剂量激光辐照组的核物质荧光发射谱,在峰型上与对照组存在差异,荧光强度也明显下降。结论：低剂量的Nd：YAP激光辐照对细胞核的DNA合成与复制有一定的刺激作用,可促进光合色素的合成并提高其对光能的吸收效率,从而增强光合活性,促进细胞的增殖与生长;高剂量激光辐照则对细胞的DNA有损伤作用,是致死率上升并发生突变的可能原因。     

荧光光谱分析法在地沟油鉴别中的应用研究

由于地沟油的成分含量复杂性和不定量性,导致了现有的单一检测方法不能同时满足快速和准确的辨认。荧光光谱具有高灵敏度和分辨率的特性,由此提出了一种利用荧光光谱快速检测食用油中是否掺有地沟油的新方法。将花生油分成7组,每组油所含的地沟油的比例不同,用220 nm到800 nm的激发和发射光检测各组样品油,收集其荧光数据后做归一化处理进行分析。在荧光实验中,特别是在365 nm和720 nm激发波长波段和434 nm发射波长波段,样品油的荧光强度与所含地沟油的体积分数大小明显成反比,当地沟油的体积分数大于5%时,荧光强度的衰减更为明显。结果证明了荧光光谱法检测地沟油的可行性,而且步骤更为简单。利用荧光光谱的非接触和高灵敏度的优势,能够更为简便地检测到加入了5%以上地沟油的花生油。     

卵巢癌患者血清的拉曼光谱研究初探

目的:探究拉曼光谱技术应用于卵巢癌研究的可能性。方法:收集卵巢癌患者血清及健康人血清各20例,用激光共聚焦显微拉曼光谱仪进行检测。结果:两组血清的平均拉曼光谱形态和谱峰基本相似,但在约1010、1158、1283、1520、1646、2307和2661cm-17个拉曼频移附近,卵巢癌患者血清的拉曼光谱谱峰强度明显低于健康对照组,而在其余大部分波段,卵巢癌患者血清的拉曼光谱强度均高于健康对照组。结论:拉曼光谱技术可以初步区分卵巢癌及健康人血清,值得进一步研究和探讨其临床应用价值。     

功能红细胞研究的拉曼光谱技术与进展

红细胞在人体新陈代谢和物质运输方面起着非常重要的作用。作为一种无损、快速而灵敏的光谱学检测方法,拉曼光谱技术在生物医学领域的应用日渐广泛。本文综述了近年来拉曼光谱技术在红细胞及血红蛋白研究中的应用进展,详尽评述当前研究功能红细胞中较有优势的拉曼技术—显微拉曼光谱技术和光镊拉曼光谱技术,并对其技术的改进做出总结,以期为利用激光拉曼光谱研究红细胞提供较系统的参考。     

低强度532nm与633nm激光血管内照射生物效应比较

目的：研究同等照射条件的低强度532nm与633nm激光血管内照射对家兔白细胞计数与淋巴细胞凋亡的影响,比较两种激光生物效应的特点。方法：用532nm和633nm激光对健康日本大耳白家兔血管内照射,平均照射功率均设在5mW左右,照射总能量约12J。两组家兔均于照前及照后1d、4d、7d、11d进行外周血白细胞计数,于照前及照后1d、5d进行淋巴细胞凋亡分析。结果：532nm激光照射后,家兔外周血白细胞计数表现为先显著升高后趋向恢复,633nm激光照射后白细胞计数变化类似,但与照前相比升高不明显;与照前相比,两组家免外周血淋巴细胞凋亡比例于照后1d均明显降低,照后5d均显著升高;两组家兔相比,照射后白细胞计数差别明显,但淋巴细胞凋亡比例差异不显著。结论：同等照射条件下,低强度532nm与633nm激光照射血液的生物效应相似,都可以促进白细胞的代谢更新,只是532nm激光的效应略强一些。     

XeCl准分子紫外激光辐照生物大分子BSA(V)对其蛋白质结构的影响

XeCl(308 nm)准分子紫外激光(单脉冲输出能量25 mJ,33.3 mJ~34.4 mJ,脉冲频率每秒两次,光斑15 mm×7 mm或4.5 mm×0.5 mm,透镜焦距300 mm),辐照小牛血清白蛋白[bovine serum albumin fraction V,BSA(V)]固体或溶液样品的时间分别为15 s、30 s、45 s或60 s;样品距激光光源的距离分别为:150 mm、250mm、290 mm、340 mm。改变激光参量辐照BSA(V)样品和其对照,用光谱法测试其FT-IR(IR)、Vis-UV(UV)、FR光谱,并比较分析。受辐照后的BSA(V)与主链构象相关的酰胺平面的特征FT-IR谱线,特别是与蛋白质二级结构敏感的酰胺面Ⅰ,1 652 cm-1;与α-螺旋结构相关的FT-IR 1 140 cm-1~500 cm-1;及与蛋白质侧链氨基酸残基Tyr、Phe、Trp相关的特征峰UV277.6 nm、UV216 nm和FR 340 nm、FR 680 nm的峰强度(T%或OD%或Q%)和它们的峰位(cm-1或nm)均受激光辐照的影响,其影响程度与使用的XeCl激光参量的改变有一定的敏感性和相关性。实验结果与讨论对认识激光生物学效应的分子机理、探索建立激光-生物学效应的关系参数,以便进一步发现新的有效的激光生物学效应,发现和认识潜在(后继)的正、负面的激光生物学效应,进而加以调控有一定的理论与实用参考价值。     

胃癌患者手术前后血清的激光拉曼光谱研究

为了探讨胃癌患者血清光谱在手术前后的变化及临床应用价值,用光谱法分别检测了30例胃癌细胞培养液、20例健康人血清和41例胃癌患者手术前、后血清的激光拉曼光谱。结果表明细胞培养液的拉曼光谱与空白对照有明显不同,且峰值与培养时间增成正相关;胃癌患者血清的拉曼光谱与健康人有显著差异;手术后胃癌患者血清的拉曼光谱峰值比术前明显降低。研究表明拉曼光谱可以作为胃癌细胞体外研究的检测手段,并有潜力成为胃癌筛查、预后监测及疗效判断的新方法。