芝麻凝集素的纯化及其性质

凝集素作为研究细胞表面糖蛋白的结构和功能的探针,日益引起人们的兴趣。各种来源的凝集素可以有不同的糖结合专一性,这就为研究含糖高分子中糖部分的结构提供了一个有效的手段。我们在从各科植物种子中筛选凝集素时发现,芝麻抽提液含有能与多糖结合的蛋白     

芝麻凝集素的纯化及其性质

凝集素作为研究细胞表面糖蛋白的结构和功能的探针,日益引起人们的兴趣。各种来源的凝集素可以有不同的糖结合专一性,这就为研究含糖高分子中糖部分的结构提供了一个有效的手段。     

凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用

建立了凝集素芯片技术检测糖蛋白的方法,对实验条件进行了优化,应用凝集素芯片初步检测分析了Chang?蒺s liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成．将凝集素ConA、GNA固定于环氧化修饰的玻片表面,用Cy3标记标准糖蛋白RNaseB,利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法．摸索出最佳封闭剂是含1% BSA的磷酸缓冲液,最佳孵育时间及温度为3 h和室温,最佳孵育缓冲液为含1% BSA和0.05% Tween-20的磷酸缓冲液,并用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性．用包含10种凝集素的芯片,成功解析了标准糖蛋白RNaseB、Fetuin的糖链构成,证实了凝集素芯片检测糖蛋白糖链的可行性．最后用凝集素芯片初步检测分析了Chang?蒺s liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成,发现 Chang's liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能有多价 Sia或GlcNAc、terminalα-1,3 mannose、GalNAc、Galβ-1,4GlcNAc这些糖链结构的存在．蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动中起着重要作用,因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重视,但由于缺乏一种简便、快速、高通量的检测手段,蛋白质糖基化修饰的研究发展缓慢．凝集素芯片技术的出现实现了对糖蛋白的快速、准确、高通量的检测 分析．     

岩藻糖糖链与肝癌细胞的迁移作用

通过凝集素印迹转移电泳和亲和层析技术,对岩藻糖糖基化蛋白在肝癌细胞中的作用进行了研究.在化学诱发的大鼠肝癌过程中, 分子质量在23 ku到40 ku范围内与荆豆凝集素(UEA)及扁豆凝集素(LCA)结合的岩藻糖糖基化蛋白显著减少, 诱癌至17～20周这些条带重新恢复,而分子质量为80 ku的条带却在诱癌过程中逐周增加.比较高、低转移性肝癌细胞的岩藻糖糖基化蛋白, 发现高转移性肝癌细胞具有多种增强的条带.利用橘果粉胞凝集素(AAL)和LCA亲和层析柱分离了这些岩藻糖基化糖蛋白, 并用这些糖蛋白直接作用于肝癌细胞,发现AAL-糖蛋白具有显著抑制肝癌细胞迁移的作用,迁移细胞数从对照的(100±4.9)%下降到(48.1±2.5)% (P＜0.01), LCA-糖蛋白也有类似作用.用胰酶和木瓜蛋白酶水解蛋白质部分后,形成的糖肽抑制肝癌细胞迁移的作用并不改变,甚至增强.此外直接用肝癌转移灶的组织测定了岩藻糖转移酶活性,发现α1,6岩藻糖基转移酶活性显著比正常肝组织高,而α1,3岩藻糖基转移酶活性没有显著的改变.用系列凝集素分析发现这些糖链主要能结合伴刀豆凝集素A, 也能结合E-型及L-型植物凝集素, 显示这种糖蛋白的糖链可能含有较多的高甘露糖型.这些结果提示糖链在诱癌过程中结构有了改变,使之在肝癌细胞的迁移和转移中起重要作用.     

小鼠精子在附睾成熟过程中质膜糖蛋白的变化

利用蛋白印迹法研究了小鼠精子在附睾成熟过程中质膜糖蛋白的变化。结果表明：与花生凝集素结合的１０４ｋＤ和９５ｋＤ糖蛋白,与伴刀豆凝集素结合的１１７、１１４、１０４、８７、７６、７０ｋＤ糖蛋白在睾丸中已完成了蛋白合成及修饰过程;与伴刀豆凝集素结合的１２０ｋＤ和６５ｋＤ糖蛋白,与双花扁豆凝集素结合的５４ｋＤ糖蛋白在精子附睾成熟过程中被修饰成其它种类的蛋白或被丢失。与伴刀豆凝集素结合的１０９ｋＤ糖蛋白,与     

蓖麻蚕血淋巴中的凝集素

凝集素是一类蛋白质(或糖蛋白),它们具有凝集细胞的活性,并能够与某种(或某些)糖类专一结合。凝集素现已被广泛地用作研究细胞表面糖蛋白、糖脂的糖链结构以及研究伴随细胞生长和恶性转化时,细胞表面含糖物质变化的探针。另外,凝集素在生物体内的生理意义,也正在引起人们日益广泛的兴趣。     

蓖麻蚕血淋巴中的凝集素

凝集素是一类蛋白质(或糖蛋白),它们具有凝集细胞的活性,并能够与某种(或某些)糖类专一结合。凝集素现已被广泛地用作研究细胞表面糖蛋白、糖脂的糖链结构以及研究伴随细胞生长和恶性转化时,细胞表面含糖物质变化的探针。另外,凝集素在生物体内的生理意义,也正在引起人们日益广泛的兴趣。     

酪氨酸的不同化学修饰对黄精凝集素生物学活性的影响

凝集素作为一类非免疫原的糖结合蛋白,在与细胞的识别和结合中介导了一系列事件的发生,如促淋巴细胞有丝分裂、对肿瘤细胞的特异凝集、抑制病原微生物的生长等[1].凝集素的特性主要归因于其特异的糖结合活性,而特殊氨基酸对它保持这种结合活性是必需的.故确定这些特异的氨基酸是研究凝集素结构与功能关系的基础.化学修饰可以鉴别哪些氨基酸位于功能区[2].黄精凝集素(Polyg-onatumcyrtonemaHua.lectin,PCL)是具有多种生物学活性的糖蛋白,二硫键、巯基、色氨酸、金属离子并不影响其兔红细胞凝集活性[3].本文报道用不同试剂修饰酪氨酸,以研究…     

应用生物素标记的凝集素分析登革Ⅱ型病毒糖蛋白

应用十二种生物素标记的凝集素,分析了经SDS-PAGE和电转印分离的登革Ⅱ型病毒(D_2V)糖蛋白。结果表明:D_2V的包膜糖蛋白E可与三种D-甘露糖特异的凝集素(conAPSA及LCA)结合,提示E蛋白的寡糖链为高甘露糖型。D_2V的糖基化非结构蛋白NS_1可与两种D-甘露糖特异的凝集素conA及LCA结合,提示NS_1的寡糖链亦为高甘露糖型。实验结果还显示了一些可能为C6/36细胞感染D_2V后新合成、合成量增加或减少以至完全受抑制的糖蛋白成分,有关这些糖蛋白的性质、功能、意义尚不清楚。在本实验条件下,这种生物素标记凝集素印迹法证明了其敏感性和糖基特异性,可以作为分析各种微量含糖大分子的一种实用方法。     

黏液性/浆液性胰腺囊性肿瘤囊液蛋白质糖基化差异表达研究

随着影像学技术的进步,胰腺囊性病变(恶性胰腺囊性病变包括黏液性囊腺瘤(mucinous cystic neoplasm,MCN)和导管内乳头状黏液瘤(intraductal papillary mucinous neoplasm,IPMN)以及黏液性囊腺癌(mucinous cystic adenocarcinoma,MCA)的检出率有所提高,但是区分囊性病变的良恶性仍然是一个难题.本研究根据外科手术病理结果及囊液液基细胞结果,从120例经CT或MRI方法诊断为胰腺囊性肿瘤患者中选取35例样本,其中胰腺黏液性囊腺瘤(MCN)组17例与浆液性囊腺瘤(serous cystic neoplasm,SCN)组18例,通过超声内镜下细针穿刺(endoscopic ultrasonography-guided fine needle aspiration,EUS-FNA)方法吸取囊液,采用凝集素芯片分析蛋白质糖链谱差异.经t检验结果表明,MCN组与SCN组相比,6种凝集素,STL、WGA、BPL、DBA、PTL-Ⅰ及MAL-Ⅰ,识别的糖链结构二者之间存在明显差异(P0.05),其中凝集素BPL、DBA、WGA、STL识别的糖链结构在MCN囊液中呈高表达(R2.0),例如DBA特异识别的Tn抗原表达的增多,可能与肿瘤上皮细胞分泌的黏蛋白增多密切相关.而凝集素PTL-Ⅰ、MAL-Ⅰ特异识别Galβ-1、4Glc NAc结构以及Gal NAcα-1、3Gal结构在MCN囊液中表达降低(R0.5).通过凝集素印记法检测了STL和BPL分别于MCN、SCN囊液中蛋白的结合情况,结果表明STL和BPL与囊液中的糖蛋白结合明显强于SCN组.本文通过比较MCN和SCN糖蛋白糖谱表达差异,寻找胰腺囊性肿瘤诊断和肿瘤良恶性评估的新方法,同时为探索胰腺囊性肿瘤发生发展机制和治疗的潜在靶点奠定基础.