CTX-M型阴沟肠杆菌插入序列的检测

目的研究插入序列ISEcp1B及超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)、AmpC酶基因在CTX-M型阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,ECL)中的分布,并分析其与耐药的关系。方法用MIC法分析2株含CTX-M基因的阴沟肠杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC、ISEcp1B基因及I类整合子,对PCR产物进行DNA测序。结果 2株阴沟肠杆菌对青霉素类、四代头孢菌素、喹诺酮类和呋喃类抗生素耐药,对氨基糖苷类和碳青霉烯类表现为敏感。在ECL15同时检出TEM、CTX-M-G1、ACT-1、I类整合子及ISEcp1B基因;在ECL45同时检出SHV、CTX-M-G1及ISEcp1B基因。ECL45(400 bp)ISEcp1B的右端均连接一个反向重复序列,有-35及-10两个启动子,与CTX-M型ESBLs编码起始距离不相同,与ECL15序列一致,GenBank登录号:EF437434;ECL45(500 bp)无反向重复序列,只有一个-35启动子,与CTX-M型ESBLs编码起始距离不相同,与ECL15序列不相同,GenBank登录号:EF441350。结论在CTX-M型阴沟肠杆菌中检出2种新的插入序列ISEcp1B,其对CTX-M的高水平表达和传播可能起重要的调控作用。     

217株铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶状况及血清学分型的调查研究

目的了解广州地区铜绿假单胞菌（PA）3种主要β-内酰胺酶（金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶）的产生情况和血清型分布,观察这些铜绿假单胞菌的耐药差别.方法用法国生物梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定与药敏系统进行217株铜绿假单胞菌的鉴定与药敏,对可疑产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶的菌株,用双纸片协同试验和头孢西丁三维试验进行3种酶的表型确证,同时采用玻片凝集试验对这些菌进行血清分型.结果217株铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶产酶率为20.7%（45/217）,其中产金属β-内酰胺酶的有26株,占12.0%（26/217）,产AmpC酶的有11株,占5.1%（11/217）,产超广谱β-内酰胺酶的有8株,占3.7%（8/217）;对氨曲南、头孢吡肟、头孢他啶、环丙沙星、亚胺培南、左旋氧氟沙星、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/棒酸和美洛培南这些临床常用抗生素,产酶菌较不产酶菌敏感性明显降低（P均小于0.05）;217株铜绿假单胞菌的血清分型以G型为主,占39.6%（86/217）,其次为L型,占19.8%（43/217）;产酶菌株的血清型以B和L型为主.结论广州地区引起临床感染的铜绿假单胞菌产生的β-内酰胺酶以金属酶最常见,其次为AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶;产酶株对临床常用抗生素敏感性降低;广州地区铜绿假单胞菌的血清型以G型为主,产酶菌株以L和B型为主,临床上治疗铜绿假单胞菌引起的感染应根据实验室的药敏结果选择抗生素.     

MBL与IntⅠ对铜绿假单胞菌耐药作用的研究

整合子和金属β-内酰胺酶(MBL)使铜绿假单胞菌的耐药机制更加复杂,给临床的抗感染治疗带来了较大的困难。Ⅰ类整合子(IntⅠ)的结构与其在铜绿假单胞菌四类金属酶的耐药基因中的传播作用是临床关注的问题之一。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关耐药基因的检测

目的对耐亚胺培南（IMP）的铜绿假单胞菌（IRPa）相关耐药基因进行检测。方法 2003年至2009年从临床标本中分离到（P.aeruginosa）共220株,采用三维试验筛选产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌,应用普通PCR和多重PCR分别检测碳青霉烯酶基因和质粒携带的C类头孢菌素酶（AmpC酶）耐药基因,应用荧光定量RT-PCR的方法检测oprD2基因的表达情况。结果共检出43株产β-内酰胺酶的菌株,其中产AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、金属β-内酰胺酶（MBLs）和未知酶菌株的构成比分别58.14%（25/43）、18.60%（8/43）、4.65%（2/43）和16.28%（7/43）。74株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中,有2株菌携带IMP-9基因,1株菌携带DHA质粒型AmpC酶基因,其他碳青霉烯酶基因检测为阴性。40株菌株oprD2基因表达蛋白量降低,34株oprD2基因表达蛋白量正常。结论 oprD2基因的突变或蛋白表达量降低是IRPa对亚胺培南耐药的主要原因,AmpC酶可水解亚胺培南可能与铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药有一定的关系,而KPC-1酶和MBLs在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制中不是主要因素。     

铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌超超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：了解多重耐药的铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌的主要耐药机制超超广谱β-内酰胺酶即超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和高产AmpC酶的产生情况。方法：建立一种简易快速地检测超超广谱β-内酰胺酶的K-B药敏试验法：首先选择5种药敏纸片：IMP、FOX、FEP、CTX、CD03,依据纸片的抑菌环直径综合判断分析。怀疑产AmpC酶的菌株,用OBs抑制试验进一步证实。结果：使用该法分别检测产AmpC酶、ESBLs的4株标准株和多重耐药的70株铜绿假单胞菌和30株阴沟肠杆菌,结果各种标准株检测无误。70株铜绿假单胞菌中产AmpC酶的有40株,产ESBLs的有18株,同时产AmpC酶和ESBLs的是5株,还有9株细菌两类酶检测均阴性,原因待分析。同时利用此试验法检测铜绿假单胞菌的诱导阳性率为42／70(60％)和阴沟肠杆菌的诱导阳性率为16／30(53．3％)。结论：此法简易快速,能较好地鉴别产ESBLs或和AmpC酶株,并适用于临床常规检验。     

产酶革兰阴性杆菌致医院感染与耐药特性

目的：了解超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与诱导型β-内酰胺酶革兰阴性杆菌致医院感染的检出率及耐药特点,对产酶与不产酶菌株进行耐药性对比分析,为临床用药提供依据。方法：双纸片试验检测ESBLs与诱导酶,Etest ESBLs试条确定产ESBLs菌株,对临床分离的960株细菌采用K—B法进行药物敏感试验。结果：哌拉西林、头孢培南、亚胺培南、环丙沙星对296株铜绿假单胞菌的抗菌活性较强;肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对亚胺培南100％敏感,对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类药物,产ESBLs与不产ESBLs菌株之间呈现交叉耐药。结论：常规药敏试验不能完全反映产诱导酶的铜绿假单胞菌耐药特点,Etest ESBLs试条可提高检测ESBLs的阳性率和准确性,产ESBLs革兰阴性杆菌的耐药性高于非产酶菌株,ESBLs菌引起的感染,应用亚胺培南、头霉素类进行治疗。     

产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药特征和基因分型研究

目的了解广东省中医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的流行、耐药特点和基因型分布。方法对该院2001年7月至2003年8月间临床分离保存的208株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用VITEK-32细菌鉴定仪进行细菌鉴定,用K—B法进行药敏试验,用双纸片法进行ESBLs初筛,用NCCLS1999年推荐的确证方法进行ESBLs确证。并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果分离到产ESBLs细菌76株,总检出率为36．5％,其中肺炎克雷伯菌阳性率为41．9％（39／93）、大肠埃希菌阳性率为32．2％（37／115）,产酶株的耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs细菌对青霉素类、环丙沙星及头孢菌素类耐药率较高,加酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦后耐药率有明显下降;PCR初步分型结果表明：TEM型42株（55．3％）,均为TEM-1型,CTX-M型27株（35．5％）,SHV型33株（43．4％）。结论产ESBLs细菌具有多重耐药的特点;CTX-M型和SHV型是该院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型。     

多药耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶和16S rRNA甲基化酶基因分析

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌对氨基糖苷类、β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物耐药情况、氨基糖苷类耐药相关基因和16S rRNA甲基化酶基因存在情况以及菌株之间的亲缘性。方法采用琼脂稀释法测定临床分离的30株铜绿假单胞菌对7种临床常用于治疗铜绿假单胞菌感染的抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应分析氨基糖苷类修饰酶、16S rRNA甲基化酶基因型及其他基因型,运用SPSS统计分析软件对菌株样本亲缘性做聚类分析。结果30株铜绿假单胞菌对临床常用抗生素的耐药率分别是奈替米星70%、妥布霉素63.3%、庆大霉素63.3%、环丙沙星53.3%、亚氨培南40%和阿米卡星13.3%,而多黏菌素B的耐药率为0。21株氨基糖苷类耐药菌株中（其中20株为多药耐药菌株）,氨基糖苷类耐药基因型aac（6＇）-Ⅰ阳性13株（61.9%）、aac（6＇）-Ⅱ阳性13株（61.9%）、ant（2＇＇）-Ⅰ阳性10株（47.6%）、ant（3＇＇）-Ⅰ阳性9株（42.9%）、aac（3）-Ⅱ阳性1株（4.8%）,另有1株菌oprD2基因缺失,未检出基因型aac（6＇）-Ⅰae、aph（3＇）-Ⅲ、aac（6＇）-aph（2＇＇）和ant（4＇）-Ⅰ;16S rRNA甲基化酶基因rmtA基因型阳性19株（90.4%）、armA基因型阳性有8株（38.1%）,未检出基因型rmtC、rmtD。聚类分析结果显示分离的菌株中存在克隆传播。结论大部分测试的铜绿假单胞菌对临床常用的铜绿假单胞菌抗感染药物已产生广泛耐药,尤其对氨基糖苷类抗生素。这些菌株的氨基糖苷类修饰酶常见耐药基因型检出率高,16SrRNA甲基化酶基因型rmtA和armA的检出率亦较高。30株测试菌株中存在克隆传播。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物耐药相关基因(12种)研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物耐药相关基因（12种）存在状况。方法自临床分离40株对铜绿假单胞菌。采用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（TEM、SHV、OXA-10群、CTX-M-1群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA和oprD2）。结果40株中CARB阳性18株（45．0％）、35株oprD2基因缺失（87．5％）．其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌CARB基因携带率高。     

对一株铜绿假单胞菌22种耐药基因的研究

目的研究铜绿假单胞菌多重耐药情况和相关机制。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对一株多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂基因（qacE△1-sul1）和整合酶基因检测,并对VIM基因进行了测序。结果PCR扩增结果显示该菌株aac（6′）-Ⅰb、blaCARB、gyrA、oprD2、ant（2″）-Ⅰ、qacE△1-sul1、blaIMP-I、blaTEM、blaVEB、aac（3）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、intⅠ1、blaVIM基因均为阳性,而aac（3）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、blaGES、blaGIM、blaOXA-10群、blaPER、blaSPM、blaSHV、blaDHA基因均为阴性,VIM基因扩增产物测序后经BLAST同源性分析表明为VIM-2型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因。管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的II代导管的抑菌效果需重新评价。     

中山地区小儿血培养病原菌分布及耐药性分析

目的了解中山地区小儿血培养病原菌分布及其常见病原菌对抗生素的耐药情况。方法对2008年至2009年南方医科大学附属中山市博爱医院新生儿科、儿科住院患儿进行血培养,应用BacT/ALERT 3D全自动血培养仪进行检测,阳性菌株用VITEK-32全自动微生物分析仪进行菌株鉴定及药敏试验。结果 4 647例小儿血培养共检出病原菌316株,总阳性率为6.8%;革兰阳性菌258株(81.6%),其中凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)209株(66.1%);革兰阴性菌55株(17.4%),以大肠埃希菌14株(4.4%)和肺炎克雷伯菌12株(3.8%)为主。革兰阳性菌对青霉素G耐药率高达93.4%,其次为氨苄西林/舒巴坦(82.9%)、苯唑西林(82.3%),耐药率均在80%以上。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)占25%,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)占82.3%。未检出对万古霉素、利奈唑胺和呋喃妥因耐药的菌株。革兰阴性菌中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌ESBLs的检出率分别为50%和33%,这些菌株对头孢哌酮/舒巴坦、丁胺卡那霉素、左旋氧氟沙星和亚胺培南的敏感率分别为91.7%、100%、92.9%、100%,表现了较低耐药率。结论本地区小儿血培养病原菌以革兰阳性菌为主,且表现为多重耐药。     

ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌整合子分布及其与ESBLs基因关系研究

目的研究整合子在院内感染ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中的分布及其与细菌耐药的相关性,探讨Ⅰ类整合子在ESBLs基因水平转移中的作用及其与ESBLs基因型的关系。方法运用K-B法,纸片扩散法,PCR,接合传递试验、套式PCR、质粒谱分析及DNA测序研究携带耐药基因的Ⅰ类整合子与耐药播散的关系。结果产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性例数分别是70例（占66.7%）和22例（占22.4%）,2组整合子阳性率差异有统计学意义（P〈0.01）。整合子阳性组中ESBLs、多重耐药菌均明显高于阴性组。产ESBLs菌株中blaSHV、blaCTX和blaTEM基因与整合子经质粒共同转移的频率分别是79.3%、58.5%和45.1%。结论整合子在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中的分布明显高于非产ESBLs菌株,主要为Ⅰ类整合子,并参与产ESBLs菌株多重耐药性的形成,其中blaSHV基因型与整合子经质粒共同转移的频率高于其他两类基因,提示SHV型酶在浙南地区具有更强的扩散优势。     

2008-2012年484株肺炎克雷伯菌耐药性分析及耐药机制的初步研究

目的回顾性分析近五年来医院住院及门诊病原菌感染患者中肺炎克雷伯菌的分离趋势,探讨其对常规抗菌药物的耐药性变迁和相关耐药机制。方法采用法国梅里埃公司的Vitek-2 Compact全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,部分菌株采用微量生化管鉴定,部分药敏试验采用琼脂扩散法（KB）,药敏结果判读按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）制定的标准判读,纸片法表型确证试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,EDTA双纸片法检测金属酶表型。结果五年间484株肺炎克雷伯菌部分药物耐药率正逐年上升,其常见药物平均耐药率如下：阿米卡星（3.0%）,复方新诺明（31.1%）,头孢三嗪（14.5%）,环丙沙星（18.7%）,氯霉素（21.6%）,特治星（6.3%）,头孢他啶（22.0%）,头孢噻肟（23.6%）,舒普深（4.2%）,呋喃妥英（26.9%）,美罗培南（2.1%）,ESBLs阳性99株（20.4%）,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型阳性5株,EDTA双纸片法检测金属酶表型阳性2株。结论部分药物耐药率逐年上升的有复方新诺明、环丙沙星、头孢他啶、头孢噻肟;耐药率较低的有美罗培南、阿米卡星、舒普深、特治星、头孢三嗪。应加强细菌耐药性监测,以及耐碳青霉烯酶筛查试验,为临床提供用药参考。     

I类整合子与产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药关系的研究

目的了解产ESBLs肺炎克雷伯菌的整合子存在状况。方法用PCR方法扩增Ⅰ类整合酶基因,经电泳后检测扩增产物。结果72株产ESBLs肺炎克雷伯菌中检测出Ⅰ类整合子67株,检出率为93．0％,Ⅰ类整合子阳性菌对氨基糖苷类、喹诺酮类及头孢菌素类药物表现出较高的耐药,其多重耐药率明显高于Ⅰ类整合子阴性菌株（P〈0．05）。结论Ⅰ类整合子广泛地存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中,Ⅰ类整合子对细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用。     

血培养中病原菌的分布及其耐药状况分析

目的:了解血培养中病原菌的菌群分布及其耐药状况.方法:血培养标本用Bact/Alert-120自动血液分析系统和Vitek60鉴定仪进行血培养及鉴定,药敏用K-B法,用Whonet 5软件进行分析.结果:在3 680份血培养标本中分离出细菌348株,阳性检出率为9.4%,病原菌中以革兰阴性杆菌为主共分离出189株,占54.3%,其中主要为大肠埃希菌占15.5%,肺炎克雷伯菌占12.4%;革兰阳性菌138株,占39.7%,主要为凝固酶阴性葡萄球菌占14.9%,金黄色葡萄球菌占12.1%;链球菌占6.6%.血培养中的革兰阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦治疗较为敏感:革兰阳性球菌对万古霉素和替考拉宁较为敏感.结论:肠杆菌科细菌和葡萄球菌是血培养中的主要病原菌,而产ESBLs菌株、MRSA、MRCNS耐药严重,提示应高度重视合理使用抗生素,减少细菌耐药性产生,以提高临床治疗效果.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性基因型分析

检测我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型。表型确定临床分离产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌56株,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法,分别对TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9编码基因进行分析。产酶菌株对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他16种抗生素耐药性较高。在56株菌株中有50株为CTX-M型,占89%,34株为TEM型(60.7%),20株SHV型(35.7%);其中CTX-M-9型共计39株占78%,CTX-M-1型19株占38%,CTX-M-2型16株占32%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性值得关注,主要临床流行基因型是CTX-M型。     

鲍曼不动杆菌的基因分型及耐药性分析

目的分析上海某综合性医院不同科室来源的鲍曼不动杆菌菌株的同源性及耐药状况,了解鲍曼不动杆菌院内感染流行情况。方法采用重复序列PCR技术（REP-PCR）,对51株临床分离的鲍曼不动杆菌菌株进行基因分型,并用纸片扩散法进行药敏试验。结果51株鲍曼不动杆菌分为13个基因型,其中A型16株,为主要流行型别;C型、D型各6株;M型有5株;E型、F型和G型各3株;B型、H型和K型各2株;I型、J型、L型各1株。药敏试验结果显示分离出的菌株对常用抗菌药呈现出多重耐药的现象。其中对阿米卡星和亚胺培南的耐药性最低,均为33.3%;对头孢唑啉耐药性最高,为100%。结论鲍曼不动杆菌基因的同源性分析表明,该院存在着以A型鲍曼不动杆菌为主的感染流行,估计该型菌株可能以克隆株的形式播散。鲍曼不动杆菌的耐药性很强,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

头孢他啶耐药褪色沙雷菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解头孢他啶耐药褪色沙雷菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）及碳青霉烯酶情况,并分析其对14种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs、AmpC采用三维试验进行检测;碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测;药物敏感试验采用K-B法测定。结果 112株头孢他啶耐药褪色沙雷菌ESBLs、AmpC检出率较高;未发现同产ESBLs、AmpC及碳青霉烯酶3种酶的菌株。产ESBLs、AmpC褪色沙雷菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率低于6.00%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢比肟的耐药率均明显高于非产酶菌株（P〈0.01）。另外,同产ESBLs＋AmpC头孢他啶耐药褪色沙雷菌分离株与单产酶株相比,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢比肟、复方新诺等多种抗生素耐药率差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。碳青霉烯酶株对14种常见抗生素多重耐药或泛耐药。结论我院头孢他啶耐药褪色沙雷菌分离株对常用抗菌药物的耐药性较高,耐药性的产生与细菌产多种β-内酰胺酶有关。     

ICU患者中心静脉导管相关性血流感染病原菌分布及耐药性分析

目的了解舟山市普陀区人民医院重症监护室（ICU）中心静脉导管相关性血流感染（CRBSI）患者病原菌分布及其药敏特点,为临床预防诊疗提供依据。方法收集2010年1月至2013年12月间在ICU住院的CRBSI患者的中心静脉导管进行培养,用法国梅里埃VITEK-32细菌鉴定仪进行菌种鉴定,用K-B纸片法进行细菌药敏试验,并用WHONET 5.4软件对耐药数据进行统计分析。结果共分离出病原菌310株,革兰阴性杆菌占50.97%,前四位为鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,占比分别为14.19%、12.26%、9.35%和7.10%;革兰阳性球菌占41.61%,前三位为表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和溶血葡萄球菌,占比分别为18.06%、7.42%和6.77%;真菌占7.42%,以白假丝酵母菌为主。药敏结果显示,主要革兰阴性杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星、妥布霉素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南耐药率较低,主要革兰阳性球菌对左氧氟沙星、利福平、呋喃妥因、替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺耐药率较低。结论 CRBSI的中心静脉导管培养的病原菌种类分布广泛,部分病原菌对常用抗菌药物的耐药率较高。临床医护人员应规范操作,减少耐药株的产生。