中国对虾荧光标记虾的大规模制作与养殖试验

以平均体长为2 cm以上的10 632只中国对虾(Fenneropenaeus chinensis),用红色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾,与10万只非标记的中国对虾在同一池塘养殖。结果表明,VIE标记对虾和非标记对虾经2-3个月的养殖后,在生长发育和成活率等方面没有差异。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为70%以上。红色VIE标记可以用于中国对虾的海洋增殖放流研究。     

成体对虾的荧光标记研究

采用平均体长为9cm的日本对虾(Penaeus japonicus)为试验动物,用蓝色、红色和绿色荧光染料(Visible Implant Elastomer,VIE)荧光标记对虾.结果表明,用VIE标记后的3个试验组的日本对虾与对照组的日本对虾在生长发育等方面没有差异,试验组和对照组在对应的周存活率基本一致,各组对虾蜕皮正常.尽管荧光标记的残留率随着日龄的增加有所下降,但荧光标记的保持率为100%.3种颜色中的红色荧光标记效果最好,蓝色最差.     

荧光标记红鳍东方鲀可行性研究

2012年7月13日至10月1日,注射荧光染料(Visible implant elastomer,VIE)标记体重(13.58±1.19)g、体长(7.15±0.61)cm的红鳍东方鲀。标记部位为左侧尾柄的上、下半部,分别记为标记Ⅰ、Ⅱ组。标记30 d、55 d、80 d后标记组的存活率、体重、体长与对照组均无显著差异(P0.05)。标记30 d后无论是通过紫外光源照射还是肉眼观察标记组的保持率均为100%;55 d和80 d时的保持率均有所下降,并表现为紫外光源照射识别的保持率高于肉眼观察的,80 d时通过紫外光源照射识别标记Ⅰ、Ⅱ组红鳍东方鲀的荧光标记保持率均在93%以上,可见荧光标记红鳍东方鲀具有可行性。     

两种荧光探针标记鹿茸提取物的稳定性和生物活性比较研究

比较两种荧光探针异硫氰酸荧光素FITC和Cy5标记鹿茸提取物PAEs的最佳方法。用FITC和Cy5分别标记PAEs得到标记物FITC-PAEs和Cy5-PAEs;用SDS-PAGE凝胶电泳检测并比较两种荧光染料标记蛋白分子量的差异;用酶标仪检测在特定波长处OD值计算其标记率;用PC12细胞验证两种荧光染料的生物安全性;将荧光标记物分别与人工胃液和人工肠液共孵育,观察它们在其中的稳定性。结果表明,两种荧光染料标记PAEs蛋白分子量并无明显差异,但FITC-PAEs荧光强度稍强。通过计算标记率表明两种荧光染料均可充分标记PAEs,但Cy5价格昂贵。相比于FITC-PAEs,Cy5-PAEs在人工胃液和人工肠液中稳定性较差。因此,我们选择标记率高,在人工胃液和人工肠液中较为稳定且对机体无毒副作用,价格合理的FITC荧光染料标记PAEs并用于后续实验研究。这为建立蛋白类中药大分子的活性示踪方法,开发口服蛋白类药物奠定基础。     

两种标记方法对异齿裂腹鱼幼鱼的标记效果研究

异齿裂腹鱼（Schizothorax oconnori）是仅分布于雅鲁藏布江中游的高原特有鱼类。本研究在室内水泥池条件下探讨了可见植入荧光（VIE）标记和T型标志牌对异齿裂腹鱼幼鱼的短期（30 d）标记效果。共设置3个处理组,分别为VIE标记组、T型标志牌组和对照组。VIE标记的标记部位为试验鱼的头部表皮,T型牌的标记部位为试验鱼的背鳍基部。试验期间的水温为10.1~11.7 ℃,溶解氧为3.65~7.54 mg/L。结果显示,各标志处理组在试验期间没有显著生长,各组间的全长也没有显著性差异。VIE标记组、T型牌组和对照组的平均存活率分别为95.8%、92.0%和97.5%。VIE标记组和T型牌组的平均标志保持率分别为100%和88.95%。本研究表明,VIE标记是适宜异齿裂腹鱼幼鱼的短期标记方式。     

用荧光染色技术标记生活花粉管的研究

在金鱼草和(或)烟草上试验了三种荧光染料对花粉管进行荧光活体染色与标记的效果。花粉管在异硫氰酸荧光素(FITC,12.5μg/ml)中染色5—6小时,原生质呈绿黄色荧光;换入无染料的培养基后可继续生长并保持荧光标记,但后期生长受抑。罗丹明B(RB,10μg/nl)染色的效果与上相近,花粉管呈红色荧光;换入无染料培养基后生长正常,唯后期荧光减弱。荧光素二醋酸酯(FDA,10μg/ml)染花粉粒40分钟,换入无染料培养基后正常萌发与生长,花粉管原生质呈明亮的绿色荧光。FDA方法具有染色时间短,荧光明亮,兼有活染与生活力鉴定双重功效等优点。     

DNA分析与扩增

931549利用毛细管系列电泳进~DNA.]II序[英3/Huang,X.C.…,Ahal.Chem.一1992,64(8)一.2149~2154[译自DBA,1992,11(23),92—12849] 一种DNA测序方法利用了毛细管系列电泳,双色荧光检测和双染料标记。在一系列毛细管上分离Sanger DNA测序片段,再用双色激光激发的confocal荧光扫描器进行桂上检测。在单个毛细管里分离出4套DNA测序片段,然后用双编码法进行区别,其中每套片段用两个有特定比率的染料标记的引物标记。这样就有可能筛选出电泳迁移率相同的染料l关键的是甩不同染料标记的DNA片段之间不应该出现电泳迁移的差异,而且染料具…     

利用荧光蛋白标记西瓜枯萎病菌的过氧化物酶体及细胞核

西瓜枯萎病是一种世界范围的西瓜毁灭性病害,其病原菌为尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum,FON)。研究病原菌生长发育和侵染的机制是解决病害的根本途径。利用荧光蛋白对细胞或细胞器进行标记,是病原菌研究中的重要方法。该研究利用绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白对FON的细胞核和过氧化物酶体进行了荧光标记。通过农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,AtMT),该文将3种不同的荧光定位载体分别导入FON,获得了细胞核红色荧光标记的转化子(潮霉素抗性,含mCherry-H2B融合蛋白),以及过氧化物酶体绿色(潮霉素抗性,含GFP-PTS1融合蛋白)和红色(潮霉素抗性,含DsRED-PTS1融合蛋白)荧光标记的转化子各1种。在标记细胞核的菌株中,菌丝、孢子都可见明亮、圆形的红色荧光点,荧光点与DAPI染色标记的细胞核区域完全重合。在过氧化物酶体标记的菌株中,菌丝、孢子中可见明亮的红色或绿色荧光成小点状分布,符合过氧化物酶体的分布特征,而且在脂类物质诱导的条件下,荧光点的数量明显增加。此外,该文还利用细胞壁荧光染色剂卡氏白对3种荧光蛋白标记菌株进行染色。结果显示,卡氏白染色产生的蓝色荧光与红、绿荧光蛋白的荧光在FON中互不干扰。转化子继代培养和初步分析表明,其表型与野生型无差异,菌株继代后荧光表达稳定、定位明显。该结果为进一步研究FON细胞器动态、生长发育与致病分子机制提供了方法和工具。     

以荧光物质标记平腹小蜂

将荧光物质罗丹明B加进人工寄主卵液,可使平腹小蜂Anastatus sp.的幼虫、蛹及成虫得到标记。在适宜浓度(0.02～0.03％)下,对蜂的化蛹率、羽化率、性比、雌蜂寿命、交配等没有不良影响,且子代的卵和一龄幼虫获得红色荧光标记。如果成虫期继续口服罗丹明B蜜糖水,子代的荧光可得到加强。标记蜂能与无标记蜂进行正常的交配、产子等活动。果园释放标记蜂,经挂卵可回收寄生的标记子代。经初步测定,标记蜂的卵和幼虫垂直分布,在荔枝树冠下层占58.33％,用此标记法,十分有利于平腹小蜂的种群分布的研究。     

不同人群肠道携带耐万古霉素肠球菌的研究

调查住院病人、门诊病人和正常人粪便中耐万古霉素肠球菌的携带率及其耐药表型、基因型和同源性,为临床预防和治疗选药提供依据.根据CLSI指南做药敏试验,用PCR法检测万古霉素耐药基因,用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)进行同源性分析.从住院病人肠道中分离出31株(20.67%)耐万古霉素肠球菌,其中22株VRE为VanA基因型,9株VIE为VanC1基因型.22株VRE同源性分析,A型有19株,其中A1型4株,A2型6株,A3型4株,A4型3株,A5型2株.B型、C型、D型各1株.9株VIE中有3对菌株分别有100%同源性.门诊病人分离出4株VIE(4%),为VanC1型,其中两株有100%同源性.正常人中分离出11株(27.5%)VIE,8株为VanC1型,3株为VanC2型;11株VIE同源性分析,以A型为主,A1型有1株,A2型有2株,A3型有1株,A4型有1株,D1、D2、D3型各有1株,B、C、E型各有1株.2株住院病人VIE与2株门诊病人VIE有100%同源性,另外2株住院病人VIE与1株门诊病人VIE有100%同源性.他们与正常人分离的VIE同源性低.22株VRE对万古霉素的MIC值>512μg/mL,16株VIE对万古霉素的MIC值为16μg/mL.8株VIE对万古霉素MIC值为8μg/mL.可见住院病人肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素,46株耐万古霉素肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致:耐万古霉素肠球菌对多种抗菌药物耐药;部分菌株有较高的同源性.