幼体中国对虾荧光标记虾的制作

采用经过暂养,平均体长为2 cm以上的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)进行试验,用黄色、红色和绿色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾.结果表明,对照组中国对虾与用VIE标记后7个试验组中国对虾在生长发育等方面没有差异,并且各组对虾蜕皮正常.尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为95%.3种颜色的荧光染料中,红色荧光标记的效果最好.     

中国对虾荧光标记虾的大规模制作与养殖试验

以平均体长为2 cm以上的10 632只中国对虾(Fenneropenaeus chinensis),用红色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾,与10万只非标记的中国对虾在同一池塘养殖。结果表明,VIE标记对虾和非标记对虾经2-3个月的养殖后,在生长发育和成活率等方面没有差异。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为70%以上。红色VIE标记可以用于中国对虾的海洋增殖放流研究。     

两种标记方法对异齿裂腹鱼幼鱼的标记效果研究

异齿裂腹鱼（Schizothorax oconnori）是仅分布于雅鲁藏布江中游的高原特有鱼类。本研究在室内水泥池条件下探讨了可见植入荧光（VIE）标记和T型标志牌对异齿裂腹鱼幼鱼的短期（30 d）标记效果。共设置3个处理组,分别为VIE标记组、T型标志牌组和对照组。VIE标记的标记部位为试验鱼的头部表皮,T型牌的标记部位为试验鱼的背鳍基部。试验期间的水温为10.1~11.7 ℃,溶解氧为3.65~7.54 mg/L。结果显示,各标志处理组在试验期间没有显著生长,各组间的全长也没有显著性差异。VIE标记组、T型牌组和对照组的平均存活率分别为95.8%、92.0%和97.5%。VIE标记组和T型牌组的平均标志保持率分别为100%和88.95%。本研究表明,VIE标记是适宜异齿裂腹鱼幼鱼的短期标记方式。     

荧光标记红鳍东方鲀可行性研究

2012年7月13日至10月1日,注射荧光染料(Visible implant elastomer,VIE)标记体重(13.58±1.19)g、体长(7.15±0.61)cm的红鳍东方鲀。标记部位为左侧尾柄的上、下半部,分别记为标记Ⅰ、Ⅱ组。标记30 d、55 d、80 d后标记组的存活率、体重、体长与对照组均无显著差异(P0.05)。标记30 d后无论是通过紫外光源照射还是肉眼观察标记组的保持率均为100%;55 d和80 d时的保持率均有所下降,并表现为紫外光源照射识别的保持率高于肉眼观察的,80 d时通过紫外光源照射识别标记Ⅰ、Ⅱ组红鳍东方鲀的荧光标记保持率均在93%以上,可见荧光标记红鳍东方鲀具有可行性。     

利用荧光蛋白标记西瓜枯萎病菌的过氧化物酶体及细胞核

西瓜枯萎病是一种世界范围的西瓜毁灭性病害,其病原菌为尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum,FON)。研究病原菌生长发育和侵染的机制是解决病害的根本途径。利用荧光蛋白对细胞或细胞器进行标记,是病原菌研究中的重要方法。该研究利用绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白对FON的细胞核和过氧化物酶体进行了荧光标记。通过农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,AtMT),该文将3种不同的荧光定位载体分别导入FON,获得了细胞核红色荧光标记的转化子(潮霉素抗性,含mCherry-H2B融合蛋白),以及过氧化物酶体绿色(潮霉素抗性,含GFP-PTS1融合蛋白)和红色(潮霉素抗性,含DsRED-PTS1融合蛋白)荧光标记的转化子各1种。在标记细胞核的菌株中,菌丝、孢子都可见明亮、圆形的红色荧光点,荧光点与DAPI染色标记的细胞核区域完全重合。在过氧化物酶体标记的菌株中,菌丝、孢子中可见明亮的红色或绿色荧光成小点状分布,符合过氧化物酶体的分布特征,而且在脂类物质诱导的条件下,荧光点的数量明显增加。此外,该文还利用细胞壁荧光染色剂卡氏白对3种荧光蛋白标记菌株进行染色。结果显示,卡氏白染色产生的蓝色荧光与红、绿荧光蛋白的荧光在FON中互不干扰。转化子继代培养和初步分析表明,其表型与野生型无差异,菌株继代后荧光表达稳定、定位明显。该结果为进一步研究FON细胞器动态、生长发育与致病分子机制提供了方法和工具。     

养殖对虾病毒致病性的初步研究

用从日本对虾分离的杆伏病毒扣长毛对虾分离的球伏病毒分别感染健康无病毒的日本对虾,对虾死亡率分别为６５％（杆状病毒组）和５０％（球状病毒组）,而对照组的死亡率仅为２５％,在诸环境因素中,温度的上升和低压可能是对虾病毒病发作的最重要诱因之一。     

灰葡萄孢菌过氧化物酶体及细胞核的荧光蛋白标记

【目的】对灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的细胞核和过氧化物酶体进行荧光蛋白标记,为研究其生长发育和侵染过程中细胞结构和细胞器动态提供基础。【方法】以绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(DsRED、mCherry)为报告基因,利用根癌农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens mediated transformation,AtMT)将3种荧光蛋白标记载体分别导入灰葡萄孢菌标准菌株B05.10;通过PCR检测及荧光观察筛选和验证转化子,并进行单孢纯化;利用共聚焦显微镜记录细胞器荧光定位情况。【结果】获得了过氧化物酶体或细胞核稳定表达红、绿色荧光的重组单孢菌株,PCR验证表明标记基因成功整合入转化子基因组。在标记细胞核的菌株中,菌丝和孢子中可见多个明亮、圆形的荧光点,与DAPI染色共定位。标记过氧化物酶体的菌株中,菌丝和孢子中可见小点状绿色或红色荧光,在脂类物质诱导下荧光点数量明显增加,符合过氧化物酶体分布及动态特征。细胞壁染色结果显示,细胞壁染色产生的蓝色荧光与红、绿荧光蛋白的荧光互不干扰,标记效果良好。【结论】获得了理想的过氧化物酶体或细胞核荧光标记的灰葡萄孢菌菌株,为研究其细胞器动态以及生长发育与致病分子机制提供了参考和材料。     

不同人群肠道携带耐万古霉素肠球菌的研究

调查住院病人、门诊病人和正常人粪便中耐万古霉素肠球菌的携带率及其耐药表型、基因型和同源性,为临床预防和治疗选药提供依据.根据CLSI指南做药敏试验,用PCR法检测万古霉素耐药基因,用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)进行同源性分析.从住院病人肠道中分离出31株(20.67%)耐万古霉素肠球菌,其中22株VRE为VanA基因型,9株VIE为VanC1基因型.22株VRE同源性分析,A型有19株,其中A1型4株,A2型6株,A3型4株,A4型3株,A5型2株.B型、C型、D型各1株.9株VIE中有3对菌株分别有100%同源性.门诊病人分离出4株VIE(4%),为VanC1型,其中两株有100%同源性.正常人中分离出11株(27.5%)VIE,8株为VanC1型,3株为VanC2型;11株VIE同源性分析,以A型为主,A1型有1株,A2型有2株,A3型有1株,A4型有1株,D1、D2、D3型各有1株,B、C、E型各有1株.2株住院病人VIE与2株门诊病人VIE有100%同源性,另外2株住院病人VIE与1株门诊病人VIE有100%同源性.他们与正常人分离的VIE同源性低.22株VRE对万古霉素的MIC值>512μg/mL,16株VIE对万古霉素的MIC值为16μg/mL.8株VIE对万古霉素MIC值为8μg/mL.可见住院病人肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素,46株耐万古霉素肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致:耐万古霉素肠球菌对多种抗菌药物耐药;部分菌株有较高的同源性.     

复合微生物菌剂在长毛对虾标苗养殖过程中的应用研究

复合微生物菌剂是一类有效的生物防治剂,在农业和水产养殖业中都起着重要的作用。本研究以长毛对虾(Penaeus penicillatus)标苗为试验对象,共分为4个组别,组1投喂无微生物菌剂添加的饲料作为对照组,组2、组3和组4为试验组,投喂有复合微生物菌剂添加的饲料,其中微生物菌剂分别占饲料质量的1. 0%、1. 5%和2. 0%。每个组进行33 d的养殖,测定养殖期间对虾生长性能、养殖水池底泥和水质相关性质,探讨微生物菌剂对对虾生长的影响。结果显示:试验前对照组与3个试验组的体重无显著差异(P 0. 050),试验后各试验组的体重均高于对照组(P 0. 050),其中组4体重达(0. 60±0. 03) g,表明微生物菌剂的使用促进了对虾标苗的生长;水体弧菌个数在试验不同时间之间有显著差异(P=0. 000),对照组呈上升趋势,第30天时未添加微生物菌剂的对照组弧菌数目最高,表明微生物菌剂能控制水体有害菌的生长;水体中的溶解氧(DO)含量在养殖不同时间之间均具有显著差异(F=191. 959,P=0. 000),NH4-N、NO2-N和NO3-N的含量均是如此,F值分别为250. 633、659. 806和1 937. 649,P值均为0. 000,从养殖第10天开始,试验组DO含量均高于对照组,而试验组的NH4-N、NO2-N和NO3-N含量均低于对照组。综上所述,复合微生物菌剂对对虾有明显地促生长作用,并且还能在一定程度上净化养殖环境。     

以荧光物质标记平腹小蜂

将荧光物质罗丹明B加进人工寄主卵液,可使平腹小蜂Anastatus sp.的幼虫、蛹及成虫得到标记。在适宜浓度(0.02～0.03％)下,对蜂的化蛹率、羽化率、性比、雌蜂寿命、交配等没有不良影响,且子代的卵和一龄幼虫获得红色荧光标记。如果成虫期继续口服罗丹明B蜜糖水,子代的荧光可得到加强。标记蜂能与无标记蜂进行正常的交配、产子等活动。果园释放标记蜂,经挂卵可回收寄生的标记子代。经初步测定,标记蜂的卵和幼虫垂直分布,在荔枝树冠下层占58.33％,用此标记法,十分有利于平腹小蜂的种群分布的研究。