广东省烟草花叶病病原病毒的鉴定

烟草花叶病是广东省产烟区的主要病害之一。我们在南雄等八个县进行调查,1983年至1984年的一般发病率为2～20％。根据血清学反应、病毒粒体形态、鉴别寄主反应及寄主范围、媒介昆虫种类、物理性质、交互保护反应等各项检验结果,鉴定广东省烟草花叶病病原是:三个黄瓜花叶病毒可能株系(普通株系CMV-C,烟草坏死株系CMV-TN,烟草黄色坏死株系(CMV-TYN),烟草花叶病毒(TMV),马铃薯病毒Y(PVY),烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和烟草褪绿斑驳病毒(TCMV)(暂定)。     

新疆伊犁地区侵染蚕豆和三叶草的豌豆花叶病毒的鉴定

从伊犁地区采集的蚕豆花叶病和三叶草花叶病植株获得的病毒分离物,经接种子鉴别寄主,可系统侵染蚕豆、三叶草、豌豆,局部侵染苋色藜和菜豆。可通过蚕豆蚜进行非持久性传播,不通过种子传播。电镜下,病毒粒体呈线条状,平均长度为756nm。在汁液中的热钝化温度是55℃。体外存活期3天。在感病蚕豆叶超簿切片中,可观察到风轮状内含体。血清反应结果证明,该病毒与马铃薯Y病毒、菜豆黄色花叶病毒和菜豆普通花叶病毒有一定相关性。根据上述特性认为,从伊黎地区蚕豆花叶和三叶草花叶植株得到的病毒分离物,为豌豆花叶病毒(PMV)。     

小麦土传病毒在感病小麦细胞中的分布及小麦梭条斑花叶病毒RNA组分

四川雅安、陕西长安的土传小麦病毒病由小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)引起,而浙江安吉、新昌、江苏宜兴的病害则由WSSMV和土传小麦花叶病毒(SBWMV)所致。WSSMV和SBWMV可以同时复合侵染同一株小麦,但在病细胞中二者彼此独立分布。我国WSSMV RNA有2个基因组,分子量分别为2.6×10~6和1.5×10~6,与日本小麦黄花叶病毒(WYMV)一致。     

芝麻病毒病病原研究——Ⅰ.芝麻矮化坏死病害的鉴定

在湖北武昌芝麻上分离到的矮化坏死分离物(DNe-I)侵染芝麻引起严重矮化,叶片皱缩坏死。它能够摩擦接种侵染7科14种植物。在苋色藜、千日红上引起局部坏死斑,侵染油菜和百日菊引起系统花叶和黄化。DNe-I能够被桃蚜、花生蚜以非持久性方式进行传播。病毒体外稳定性状:存活期4天,钝化温度60～65℃,稀释限点4×10~(-4)。提纯病毒为线状粒体,长度为770nm。病毒外壳蛋自为单一亚基组成,分子量为30,700±600D。制备抗血清微量沉淀法测定其效价为1:256。在油菜病组织中,观察到风轮状及长直片层叠聚体类型的胞质内含体。在血清学性质上,该分离物与芜菁花叶病毒密切相关,与花生轻斑驳病毒和花生斑驳病毒弱相关,与大豆花叶病毒和西瓜花叶病毒不相关。基于上述性质,DNe-I被鉴定为芜菁花叶病毒。这是国内芜菁花叶病毒自然侵染芝麻的首次报道。     

大麦条纹花叶病毒新疆株3''''端基因组的克隆及分析

我们应用多次加尾的方法,对大麦条纹花叶病毒新疆株的RNAs基因组进行克隆。在所述条件下可以合成2000～3000核苷酸长度的cDNA。通过原位杂交、转印杂交(Northern blot)证明所得克隆属于RNA_1和RNA_3组分,并包含有3′端基因组结构。对部分克隆进行了酶谱分析。     

浙江榨菜病毒病病原鉴定

从浙江桐乡和海宁的花叶或叶片皱缩、植株矮化的榨菜(Brassica juncea Coss)上分离毒源,摩擦接种5种鉴别寄主,在鉴别寄主上都出现不同症状;间接酶联免疫吸附法(In-direct ELISA)检测,芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的检出率为87.5％,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)为73.08％,两者复合侵染率为65.38％,所有的样本都没有检测到烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)     

单克隆抗体亲和层析纯化长叶车前花叶病毒

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)单克隆抗体1H2,经纯化后以溴化氰活化法偶联于Sepharose 4B上制成亲和层析柱。HRVsh感染的三生烟提取液,经一次聚乙二醇沉淀初步纯化,悬浮液上亲和层析柱,于磷酸缓冲液中吸附,蒸馏水洗脱。收集的病毒制剂接种心叶烟有感染性,电镜观察见典型的HRVsh粒子,紫外吸收光谱与常规方法提纯的病毒相似,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带。结果表明单克隆抗体亲和层忻得到高度纯化的HRVsh。最后讨论了单克隆抗体亲和层析方法的优点。     

一株辣椒花叶病毒的生化特性研究

本文对辣椒花叶病毒的生化特性进行了研究。病毒蛋白的紫外吸收,最高280毫微米,最低为260毫微米;以SDS-PAGE测定其分子量为17500;病毒蛋白亚基由148个氨基酸组成。从病毒提纯的核酸为线状RNA;紫外吸收最高为260毫微米,最低230毫微米;经聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,其分子量为2.0×10~6。根据形态结构、血清学试验、外壳蛋白亚基组成、核酸和蛋白的分子量等综合分析,我们认为这株辣椒花叶病毒是烟草花叶病毒组(TMV)中的一个毒株。     

不同大豆与大豆花叶病毒组合中胼胝质的荧光标记及其功能初探

选用6个大豆品种与4个不同的大豆花叶病毒株系,分别组成抗病级别不同的组合,通过对接种叶片与上位叶症状观察、苯胺蓝染色辅以荧光显微镜观察和药物学试验,探讨了不同抗病级别组合中胼胝质（即β-l,3-葡聚糖）积累的特点及其在大豆抵抗大豆花叶病毒侵染过程中的作用。试验结果表明,大豆接种病毒后,在抗病级别分别为0-3的各个组合的叶肉细胞中,在侵染早期（接种后6-72 h）不同的组合在不同时间点分别观察到了胼胝质荧光,且胼胝质荧光出现的时间与抗病级别密切相关,即品种的抗病性越强在侵染点处观察到胼胝质的时间越早;而在抗病级别为5的组合中一直未能观察到胼胝质荧光。另外,在抗病级别为0级和1级的各组合中给叶片预注射2-DDG(2-deoxy-D-glucose,一种胼胝质合成抑制剂）再接种病毒,在上位叶能观察到坏死斑的出现并且通过RT-PCR能够检测到大豆花叶病毒外壳蛋白基因。以上结果表明,大豆被大豆花叶病毒侵染后,品种的抗病性越强就会在侵染点处越早的积累胼胝质,胼胝质的沉积与大豆抗病毒侵染密切相关。     

菜豆黄色花叶病毒(BYMV)—新疆苜蓿分离株的鉴定

从新疆苜蓿黄斑花叶病株上分离到病毒分离物M-4,该分离物能引起多种豆科值物系统花叶,并在藜科植物上产生局部褪绿斑,易经汁液摩擦接种和蚜虫传毒,不经菜豆种子传毒。病毒致死温度60—65℃,体外保毒期4—5天,稀释限点10~(-3)—10~(-4)。病毒粒体线状,长约660—740nm,宽15nm;在感病的寄主叶片细胞中,电镜观察到风轮状、带状和环状内含体。免疫电镜法测定,该分离物与菜豆黄色花叶病毒(BYMV)抗血清有血清反应。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸自动分析仪分析分别测得该病毒的衣壳蛋白亚基分子量为16,200道尔顿,氨基酸残基数128个。鉴定结果认为,分离物M-4是BYMV的一个株系。     

应用冰冻蚀刻技术观察北方禾谷花叶病毒

冰冻蚀刻电子显微镜技术,在生物医学研究方面应用较多,但是在植物病毒研究方面报道极少。1985年我们对日本国小麦上的北方禾谷花叶病毒(Northern cereal mosaic virus简称NCMV)弹状病毒粒子进行了试验,获得了比较满意的结果。     

双色A与不同胞质类型高粱不育系同工酶的比较分析

本文对双色A高粱新不育系进行了酯酶同工酶和细胞色素氧化物酶同工酶的研究。结果表明,该不育系的遗传背景与A1A2和A3不同胞质类型的不育系具有明显的差异。但双色A是否为新不育系类型,还有待进一步的研究。     

花椰菜花叶病毒(新疆分离物)基因组DNA的全部核苷酸序列

用Maxam-Gilbert化学切断法,从含全长病毒DNA的克隆pCaMV C17中,测定了CaMV-XJ基因组的全部核苷酸序列。CaMV-XJ DNA含有8,060个碱基对。在不同的译读相位中,CaMV基因组含有6个主要ORF或可能的基因,与其他巳作全序列测定的三个CaMV分离物比较,有三个显著的差别;(1)ORFⅥ编码的氨基酸变化达16％,显著高于其他区域的变化和其他三个分离物之间的差别,(2)在ORFⅣ的近氨基末端有39bp的插入,它与被插入区的序列几乎是直接重复;(3)由于核苷酸置换而引入了终止信号,所以T.Hohn[2]推测,可能存在的ORFⅦ不可能编码有功能的蛋白。     

河南小麦梭条斑花叶病病原鉴定、病毒提纯及其特性

经鉴定,我国河南邓县冬小麦上发生的一种病毒病的病原,是小麦梭条斑花叶病毒。 对病毒的分离纯化进行了研究,提出了一个简单可靠的病毒纯化程序,获得了较为理想的提纯病毒制品,提纯病毒具有典型的、核酸含量约为5～6％的线状病毒紫外吸收曲线,病毒粒体宽约12nm,长度分布从200～2000nm以上,平均粒体长度约为1000nm,在300nm、600nm及1000nm处有3个分布高峰,用提纯病毒免疫兔子获得效价为1/1024的抗血清,提纯病毒的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到多条蛋白带,分子量从36.6kd至28.6kd,其中36.6kd的蛋白为病毒的外壳蛋白,其余的为外壳蛋白的降解产物。     

影响菜豆普通花叶病毒种子传毒的因素

研究了影响菜豆普通花叶病毒(BCMV)种子传毒的一些因素,不同品种,不同感染时期种子的传毒率有显著差异,苗期感病的植株,不同荚位的种子传毒率是:下部>中部>上部,花期感病者则是:中部>上部>下部,感病植株的斑驳荚种子传毒率,依品种的不同,比无斑驳荚者高3.2～9.3倍。     

大豆抗种粒斑驳基因效应的研究

３个在成株与种粒抗生不同的品种（系）东农７９－９、东农８１－４３、铁６９１５（东农）与３个都感的品种合丰２５、丰收１２、天北白目配制品个杂交组合。１９９１与１９９２年在网室与田间同时种植杂交组合物６个世代,人工接种ＳＷＶ,鉴定实验结果认为,抗种粒斑驳的行为是由基因控制的。抗生基因因为显性。抗生基因的数目与抗生亲本的抗生强度有关。抗性基因的遗传方式在抗生强的亲本中表现为单基因的简单遗传,而在抗生弱的     

雀麦花叶病毒缺陷型RNA_（3b）的研究

采用ＰＥＧ沉淀和差速离心的方法提纯雀麦花叶病毒的Ｇ和Ｔ分离物。利用蛋白酶Ｋ和两相酚法制备雀麦花叶病毒的总ＲＮＡｓ。将Ｇ和Ｔ分离物ＲＮＡｓ进行琼脂糖凝胶电泳,结果发现Ｂｒ－ＭＶ－Ｇ除含有正常的ＲＮＡ组分外,还出现了另一新的ＲＮＡ＿（３ｂ）组分,其分子量为０．５０×１０￣６。ＲＮＡ＿（３ｂ）只出现在大麦寄主中,而在昆诺基上缺失。ＲＮＡ＿（３ｂ）仅依靠于其来源的Ｇ分离物的ＲＮＡｓ进行复制。以ＲＮＡ＿（３ｂ）为模板合成￣（３２）Ｐ－ｃＤＮＡ探针,和ＢｒＭＶ－Ｇ分离物的ＲＮＡｓ进行分子杂交试验表明：ＲＮＡ＿（３ｂ）属ＲＮＡ＿３的缺陷型组分,它依赖于ＢｒＭＶ－Ｇ－ＲＮＡ＿３的帮助才能在大麦寄主中复制。ＲＮＡ＿（３ｂ）的出现和缺失对ＢｒＭＶ的症状表现没有影响。     

水仙病毒血清学研究Ⅰ．水仙花叶病毒抗血清的制备及其应用

经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒（NMV）,以表现局斑的苋色藜叶片为提纯材料,经聚乙二醇（PEG600）沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定可达1：5,000。用琼脂双扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33．3％和80．0％,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。     

大豆花叶病毒种子传毒率测定方法的比较

用苗期症状观察和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法检查了大豆种子内的大豆花叶病毒(sMV)的传毒率及带毒率,并对两种方法所得的结果进行了比较。带毒大豆种子产生的病苗,其症状主要有花叶、卷叶、叶脉束状、叶脉坏死、凸斑和单叶扭曲等类型。苗期症状观察得到的种子传毒率,与用ELISA法检查去种皮大豆种子的带毒率高度吻合,相关系数r=0.92(n=31),说明此两种方法检查种子传(带)毒率具有相同的生物学和病理学意义。 本文提出了种子“群体病毒浓度”的概念。“群体病毒浓度”=群体内病毒总量/群体内种子总数。38个处理组合和3,591粒种子逐粒用ELISA法检查表明,“群体病毒浓度”与该群体的种子传毒率呈正相关,r=0.93(n=38)。将种子群体作为一个整体用ELISA法检查的结果也证明,“群体病毒浓度”与种子传毒率呈直线相关。因此认为可以用ELISA法对种子群体直接进行测定来估计种子的传毒率。