单克隆抗体和抗合成多肽抗体检测烟草愈伤组织中交替氧化酶表达的比较(英文)

从经过不同温度处理的烟草 (NicotianarusticaL .)愈伤组织中提取并纯化线粒体蛋白 ,分别与交替氧化酶的单克隆抗体和抗合成多肽抗体进行免疫杂交。结果表明 :交替氧化酶的含量随温度的下降而显著上升 ;单克隆抗体的特异性较高于抗合成多肽抗体 ,但后者与交替氧化酶同样有良好的亲和性。因此 ,用合成多肽方法制备的抗体可以用于交替氧化酶的研究中。     

单克隆抗体和抗合成多肽抗体检测烟草愈伤组织中交替氧化酶表达的比较

单克隆抗体和抗合成多肽抗体检测烟草愈伤组织中交替氧化酶表达的比较 晏婴才 林宏辉* 梁厚果 杜林方 （四川大学生命科学学院,成都610064I）     

应用RAD多肽展示体系制备抗hCG类抗体分子

应用基于激烈火球菌Pyrococcus furiosus重组酶RadA的ATP酶结构域(RAD骨架)的多肽展示体系,通过嫁接人绒毛膜促性腺激素(hCG)结合多肽,制备抗hCG类抗体分子。通过合成hCG结合多肽插入RAD多肽展示位点的类抗体基因,成功构建了pET30a-RAD/hCGBP-sfGFP原核表达载体,在大肠杆菌中诱导蛋白表达,分离、纯化获得类抗体蛋白,通过亲和吸附-GFP荧光检测方法测定类抗体对hCG的结合活性,并与应用单域抗体通用骨架制备的嫁接抗体比较活性差异。结果显示,RAD类抗体分子对hCG分子具有较高的亲和性和特异性,显著优于单域嫁接抗体,并与商业单克隆抗体的活性相当;同时,利用RAD多肽展示骨架制备的抗hCG类抗体,具有较高的生化稳定性,是一种具有应用潜力的抗体替代分子。     

人生长分化因子15单克隆抗体制备、鉴定及药用价值初探

目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的m Ab,用间接ELISA检测m Ab腹水效价。结果:获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水m Ab效价可达1×104~1×109。结论:获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性m Ab,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。     

一株新型抗46 ku-细胞角蛋白的单特异性单克隆抗体

利用杂交瘤技术制备了一株单克隆抗体 T2-2,对其生化性质的研究及其与抗细胞角蛋白多克隆抗体完全重合的定位表明,该抗体特异性识别一种分子质量为 46 ku 的角蛋白. 对 68 例正常组织和 65 例肿瘤组织的免疫组化结果显示,单克隆抗体 T2-2 具有上皮细胞特异性. 与其他多数抗细胞角蛋白抗体常与一种以上细胞角蛋白多肽表现出交叉反应不同的是,该抗体只识别 46 ku 细胞角蛋白多肽上的某一单特异性表位. 另外,单克隆抗体 T2-2 适用于多种免疫实验技术,包括 ELISA、免疫组化、细胞免疫荧光及蛋白质印迹等,而且适用于多种固定剂. 以上结果表明,单克隆抗体 T2-2 将成为细胞角蛋白功能研究和肿瘤诊断的有力工具.     

抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体的制备与鉴定

为了制备抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体,合成了溶葡萄球菌酶(lysostaphin)分子的3-13位的11个氨基酸的多肽(THEHSAQWLN),并利用戊二醛双功能试剂将人工合成多肤成功地与KLH进行偶联.免疫新西兰兔制备抗lysostaphin合成多肽的抗体,并经亲和层析进行了纯化.对此抗体进行鉴定的结果表明,抗溶葡萄球菌酶合成多肽抗体可与重组溶葡萄球菌酶分子发生特异性反应,并可用于蛋白免疫印迹.该抗体的制备为使用亲和层析纯化溶葡萄球菌酶提供了有用的配基.     

精子肽的固相合成及应用初探

目的 :探讨将多肽固相合成技术用于检测抗精子抗体的ELISA试剂盒制备。方法 :以多肽固相合成法合成特异性精子肽 ,并经高效液相纯化分析及质谱分析。以此合成精子肽包板制备检测抗精子抗体的ELISA试剂盒 ,检测血清标本的AsAb。结果 :HPLC结果显示 ,合成的精子肽纯度达 98.26%;质谱分析结果主峰分子质量与理论值一致。采用合成多肽抗原建立了检测抗精子抗体的酶联免疫吸附测定方法 ;不明原因不育患者组与对照组间AsAb发生率呈非常显著差异(P <0,005 )。结论 :本固相合成法可获得高纯度特异性精子肽 ;该精子肽包板的ELISA试剂盒可靠简便。     

抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术,获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶(rUOX)的杂交瘤细胞McAb17和McAb3;采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果:McAb17和McAb3的腹水效价达到1∶512000,纯化后获得纯度大于95%的单抗,抗体亚类(型)分别为IgG1/k型和IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase(商品化rUOX)可发生特异反应。结论:制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3,为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。     

用单克隆抗体分析HBsAg的多肽及a决定簇的表位

通过Western-Blot发现,多克隆抗-HBs抗体及单克隆抗体B_(13),A_1均识别24kd及27kd两条多肽带,而单克隆抗体B_6,B_9及B_(12)只识别24kd,不识别27kd的多肽带。用这几株单克隆抗体对不同来源HBsAg a决定簇的表位密度进行了研究,结果表明血源、重组CHO细胞表达及重组痘苗病毒表达的HBsAg与重组酵母表达的HBsAg在结合单克隆抗体A_1、B_6及B_9的密度上有数量的差别,并且有统计学意义。     

B型肉毒毒素重链抗原表位的预测及表位合成肽抗原性的检测

目的:预测B型肉毒毒素蛋白抗原表位,研究表位合成肽的生物学活性。方法:利用生物信息学,结合Anthwine分析软件及网络平台,预测B型肉毒毒素蛋白重链的B细胞抗原表位。人工合成4条(P1,P2,P3,P4)表位多肽,与抗B型肉毒毒素类毒素的马血清反应;采用腹腔注射的方式用合成肽免疫BALB/c小鼠,检测免疫血清与合成肽的结合;对免疫小鼠腹腔注射B型肉毒毒素。结果:合成的多肽能与抗B型肉毒毒素的类毒素的马血清结合;多肽免疫小鼠后能产生针对多肽的抗体,其中P1、P3、P4产生的抗体对受毒素攻击的小鼠具有保护作用。结论:成功预测了抗原表位,合成的表位多肽具有较好的抗原性。     

用合成多肽免疫制备人α-半乳糖苷酶A单克隆抗体

目的:获得效价高的、特异性强的抗人α-半乳糖苷酶A(α-GalA)单克隆抗体,用于法布莱氏病的诊断。方法:分析并合成人α-GalA的优势抗原表位,合成多肽,将其与载体匙孔虫戚血蓝蛋白偶联,免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基筛选杂交瘤细胞株;用酶联免疫、SDS-PAGE、Western印迹和染色体核型分析等方法对杂交瘤细胞及其产生的单抗进行鉴定。结果与结论:筛选到1株杂交瘤细胞株,获得了高效价、特异性强、亲和力高的抗人α-GalA的单克隆抗体,抗体的亚型为IgG1亚型。     

ZNF185基因抗原表位分析及合成肽免疫避孕效果研究

目的:预测ZNF185基因的抗原表位,并研究相应合成多肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应。方法:应用DNA Star软件预测ZNF185蛋白二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性与抗原指数。合成携带ZNF185抗原表位的多肽,进行小鼠免疫实验,检测小鼠血清中IgG抗体水平、交配率、妊娠率及每窝产仔数,并观察生殖器官是否发生病变。结果:筛选ZNF185两段氨基酸序列合成多肽,该多肽能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,实验组小鼠交配率和妊娠率显著低于对照组,生殖器官并无发生明显的组织病理学变化。结论:ZNF185具有一定的抗生育作用。     

不同低温胁迫对烟草愈伤组织抗氰交替途径诱导和交替氧化酶表达影响的比较

比较了不同低温（14℃和4℃）胁迫对烟草（Nicotiana rustica L.）愈伤组织抗氰交替途径诱导和交替氧化酶表达的影响。结果显示,不同低温胁迫处理能显著诱导烟草愈伤组织交替途径容量和实际运行的增加,且都呈现出基本相同的变化模式：在胁迫的初期（1～3 d）持续增加,在3 d时达到最高,而后下降到一个相对恒定的水平。但交替途径容量增加的幅度与温度下降的程度密切相关,而交替途径实际运行量的诱导程度在不同低温胁迫下的差异却很小。表明交替途径容量和实际运行对低温胁迫的响应是不同的。免疫印迹分析结果表明：低温胁迫明显诱导了交替氧化酶总蛋白的增加,且其随低温胁迫进程的变化与交替途径容量的变化基本一致;而对交替氧化酶单体与二聚体在低温胁迫下的含量变化检测结果则显示,烟草愈伤组织中交替氧化酶主要以二聚体形式存在,且这一存在形式并不随低温胁迫程度的加深而发生改变。两种形式的交替氧化酶蛋白含量都能被低温胁迫诱导增加,但其单体水平在两种不同的低温胁迫下并无明显差别,而4℃低温胁迫诱导的二聚体交替氧化酶蛋白含量明显高于14℃。表明不同程度低温对抗氰交替途径发生的不同影响主要是由于对交替氧化酶蛋白二聚体形式的不同诱导程度所致;而高活性的交替氧化酶单体形式则不因低温胁迫程度的加重而被明显诱导升高,使得抗氰交替途径的运行程度在两种不同的低温胁迫处理条件下无显著差异。     

不同低温胁迫对烟草愈伤组织抗氰交替途径诱导和交替氧化酶表达影响的比较

比较了不同低温(14℃和4℃)胁迫对烟草(Nicotiana rusticaL．)愈伤组织抗氰交替途径诱导和交替氧化酶表达的影响。结果显示,不同低温胁迫处理能显著诱导烟草愈伤组织交替途径容量和实际运行的增加,且都呈现出基本相同的变化模式：在胁迫的初期(1—3d)持续增加,在3d时达到最高,而后下降到一个相对恒定的水平。但交替途径容量增加的幅度与温度下降的程度密切相关,而交替途径实际运行量的诱导程度在不同低温胁迫下的差异却很小。表明交替途径容量和实际运行对低温胁迫的响应是不同的。免疫印迹分析结果表明：低温胁迫明显诱导了交替氧化酶总蛋白的增加,且其随低温胁迫进程的变化与交替途径容量的变化基本一致;而对交替氧化酶单体与二聚体在低温胁迫下的含量变化检测结果则显示,烟草愈伤组织中交替氧化酶主要以二聚体形式存在,且这一存在形式并不随低温胁迫程度的加深而发生改变。两种形式的交替氧化酶蛋白含量都能被低温胁迫诱导增加,但其单体水平在两种不同的低温胁迫下并无明显差别,而4℃低温胁迫诱导的二聚体交替氧化酶蛋白含量明显高于14℃。表明不同程度低温对抗氰交替途径发生的不同影响主要是由于对交替氧化酶蛋白二聚体形式的不同诱导程度所致;而高活性的交替氧化酶单体形式则不因低温胁迫程度的加重而被明显诱导升高,使得抗氰交替途径的运行程度在两种不同的低温胁迫处理条件下无显著差异。     

MAP法制备抗人Connexin31抗体

MAP（multiple antigenic peptide）多肽法具有快速、简便、成本低廉的特点．用MAP法,直接在多肽合成仪上合成Connexin31羧基端一个多肽片段（250—266AA）的MAP肽,经超滤器纯化后,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化．经western blotting、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体．     

模拟表位结合夹心化学发光法检测抗A和抗B效价

目的:获得A/B血型抗原的模拟多肽,并将其与夹心化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)相结合,以开发更有效的方法来测量A/B抗体的效价。方法:分别用NaM87-1F6和HEB-29对噬菌体12肽库进行三轮淘选。对经酶联免疫吸附实验(ELISA)确定的阳性菌斑进行测序分析,根据其氨基酸组成合成模拟多肽,并通过竞争性ELISA、凝集抑制等方法检测其抗原性。随后将获得的模拟多肽与CLIA结合,检测A、B抗体效价,制作标准曲线以及与现有的微柱凝胶法(CAT)进行相关性对比。结果:经过三轮淘选和相关鉴定后得到13个与抗A抗体和19个与抗B抗体特异性相互作用的噬菌体克隆,其中分别有9个(MTRIQLRMMRLH)和12个(PQMSRHRMRMLP)展示相同的氨基酸序列,据此合成的多肽分别命名为MTR和PQM。竞争性ELISA结果表明,MTR能够特异性拮抗A抗体和A抗原的替代多肽的免疫结合;PQM能够特异性拮抗B抗体和B抗原的替代多肽的免疫结合。凝集抑制实验表明MTR/PQM可以特异性抑制A/B型红细胞与抗A/B之间的相互作用。结合模拟肽的夹心CLIA具有较宽的线性范围(2-2048)和良好的线性相关系数(对于A抗体R~2=0.9566,对于B抗体R~2=0.9762)。基于CLIA方法和CAT测得的抗体滴度结果高度相关(P0.001)。结论:MTR和PQM有良好的A或B抗原性,具有成为其人工替代品的潜能。模拟多肽与夹心CLIA相结合能够实现对A、B抗体滴度的定量检测,且其结果准确可靠。     

抗血管生成蛋白与多肽研究进展

多项动物实验和临床实啦已经充分证实,抗血管生成疗法可以抑制肿瘤生长。在可抑制肿瘤生长的分子中,许多是蛋白与多肽,包括细胞因子、趋化因子、血管内皮生长因子及其受体的抗体、可溶性受体、胞外基质蛋白片段及小分子合成多肽等。简要综述其中部分分子的作用机理及临床应用情况。     

唐氏综合症决定域蛋白1泛素化分析

利用Fm oc固相多肽合成的方法合成DSCR1羧基端一个多肽片段(55-70AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、纯化、经W estern b lotting、免疫沉淀证实得到的抗体为抗DSCR1的特异抗体。该抗体即能检测人源DSCR1蛋白,又能检测小鼠的DSCR1蛋白。运用获得的DSCR1多克隆抗体进行功能研究,发现DSCR1广泛存在泛素化,参与泛素化-蛋白酶体途径。     

抗幼畜腹泻病原菌E. coli表面抗原(K99)单克隆抗体细胞株的建立与抗体特性分析

本文概述了抗幼畜腹泻病原菌细胞表面抗原K 99蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与抗体特性的鉴定。经过近半年的体外培养,大多细胞株仍能持续分泌较高滴度的单克隆抗体。腹水中抗体的ELIS．~反应滴度可达2 x 10’。通过EL[SA、免疫荧光、斑点试验、免疫扩散和玻板凝集等多种免疫学方法证明了该抗体是抗K 99蛋白的单克隆抗体。该抗体的特异性与稳定性分析,为使单克隆抗K 99抗体成为幼畜细菌性腹泻病的大规模诊断与防冶的标准免疫学试剂提供了基础。     

淋巴因子和干扰素

<正> 853728 抗人β-干扰素的合成多肽抗体[英]/Chow,T.P.…∥J.Biol.Chem.-1984,259(19).-12220～12225[译自 DBA,1985,4(2),85-00719]作者制备了与人β-干扰素 N-末端1-21和18-45氨基序列相一致的合成多肽。将此