对德氏乳杆菌DM8909菌株的药理学研究

由大连医科大学微生态学研究所从阴道中分离的德氏乳杆菌 DM890 9菌株经实验证明 ,其具有产乳酸和 H2 O2 的能力。为研究本菌株是否具有继续开发的前景 ,我们对其毒性及一般药理学进行了研究 ,现报告如下 :1　材料与方法1 .1　菌种及菌粉来源　实验采用的菌种是德氏乳杆菌 DM890 9菌株 ,其实验用菌粉系采用 DM890 9菌株经小罐发酵、离心分离、冷冻干燥、乳糖稀释制成 ,均由大连医科大学微生态学研究所提供。1 .2　急性毒性试验1 .2 .1　实验动物　昆明种小鼠 ,体重 ( 2 0± 2 ) g,雌雄兼用 ,共 5 0只 ,随机分成 5个剂量组 ,每组 1 0只。…     

对德氏乳杆菌DM8909菌株的发酵工艺研究

德氏乳杆菌 DM890 9菌株是大连医科大学微生态学研究所分离驯化的一株兼性厌氧菌 ,主要用于防治非特异性阴道炎等妇科疾病。本实验通过对德氏乳杆菌 DM890 9菌株进行摇瓶、小型全自动发酵罐和 5 0 0 L发酵罐发酵工艺学研究 ,考察其发酵工艺中试条件。现将研究结果报告如下 :1　材料与方法1.1　菌种　本研究所使用的菌种德氏乳杆菌 DM890 9(L actobacillus debrueckii subsp.lactis)由大连医科大学微生态学研究所提供。1.2　培养基　摇瓶种子培养基、小罐发酵培养基及大罐发酵培养基均采用 L BS培养基。1.3　培养方法1.3.1　摇瓶培养　…     

保加利亚乳杆菌冻干保护剂的优化

目的 研究4种常用冻干保护剂的添加量.方法 以保加利亚乳杆菌为出发菌株,以其冻干菌粉活菌数为指标,通过正交试验优化4种常用冻干保护剂的添加量.结果 保加利亚乳杆菌的最佳冻干保护剂配比为乳糖∶谷氨酸钠∶抗坏血酸∶脱脂奶粉=3∶1∶2∶7,其中脱脂奶粉对菌体保护效果极显著(P＜0.01),乳糖对菌体保护效果显著(P＜0.05).结论 通过对保加利亚乳杆菌的4种常用冻干保护剂的添加量进行优化,为保加利亚乳杆菌的冻干工艺提供基础.     

冷冻干燥对乳酸菌细胞膜通透性的影响

对细胞膜通透性变化的研究是认识冷冻干燥过程对乳酸菌损伤机理的途径之一。用荧光探针检测冻干过程前后细胞内H+和Ca2+浓度的变化, 可以精确的表征细胞膜通透性的改变。利用荧光探针BCECF-AM和Fluo3-AM对德氏乳杆菌保加利亚亚种在冻干前后的细胞膜通透性进行研究, 并对比菌种在冻干过程中的活力损失, 发现细胞膜在冻干前后通透性有显著增加, 并与活力的损失成反相关关系。说明在冻干过程中细胞受到了生理性损伤, 细胞膜通透性的改变可能是导致乳酸菌在冻干过程中致死和失活的原因之一。     

对德氏乳杆菌DM8909菌株的临床药代动力学研究

本文对大连医科大学微生态学研究所研制的阴道乳杆菌活菌制剂进行药代动力学研究 ,目的是为了探讨德氏乳杆菌活菌阴道制剂在正常志愿者阴道中的变化情况 ,确定临床观察的给药剂量、间隔时间和给药方法。现将有关试验情况报告如下 :1　材料与方法1 .1　药代动力学试验研究对象　为 1 0名志愿者进行阴道乳杆菌活菌动态研究。1 .2　药品来源　定菌生 DM890 9由大连医科大学科达药业有限公司提供 ,批号 961 0 2 0。1 .3　试验设计　分 3个剂量组 ,单次阴道给药 ,低剂量组 ( 0 .2 5× 1 0 6CFU/粒 )、中剂量组 ( 0 .2 5×1 0 7CFU/粒 ) ;高剂…     

冻干高活力纳豆芽胞杆菌菌粉保护剂的筛选和优化

【目的】对冻干高活力纳豆芽胞杆菌菌粉保护剂进行筛选和优化研究,提高菌粉活菌存活率。【方法】采用单因素实验和正交实验设计,通过测定活菌存活率,筛选出最佳保护剂的配方;并研究采用优化后冻干保护剂制备的菌粉在20°C、4°C、25°C下的保存稳定性。【结果】纳豆芽胞杆菌的有效保护剂是:脱脂乳粉、甘露醇、L-抗坏血酸钠。最佳冷冻干燥保护剂配方是:脱脂乳粉10%+甘露醇4%+L-抗坏血酸钠1%,存活率达到91.63%。菌粉在20°C、4°C、25°C下保存12个月后,存活率分别为:88.79%、70.16%和10.52%,说明菌粉在20°C和4°C下保存稳定性较好,25°C下稳定性比较差。【结论】对纳豆芽胞杆菌冻干菌粉保护剂的优化,对纳豆芽胞杆菌的应用、活菌产品的质量稳定及新产品的研发均有一定的指导意义。     

活菌制剂冻干保护剂的研究进展

冷冻干燥技术广泛应用于细菌性活疫苗生产和菌种保藏等方面。细菌细胞在冷冻干燥过程中会出现损伤,甚至死亡。通过添加适合的冻干保护剂可以最大程度减小细胞损伤,保持活菌制剂的活力和性能。就冻干过程对细菌的损伤机制、冻干保护剂的作用机理以及保护剂的筛选方法等方面进行了阐述,对活菌制剂保护剂的筛选有所启示。     

乳杆菌优良菌株的筛选及对小鼠阴道白假丝酵母菌过度增殖干预

目的探讨乳杆菌优良菌株的筛选及其对小鼠阴道白假丝酵母菌过度增殖干预作用。方法对德氏乳杆菌DM8909菌株进行诱变筛选,得到耐抗生素突变株208,以ICR小鼠为实验对象,用甲硝唑进行小鼠阴道菌群脱污染,将白假丝酵母菌接种到小鼠阴道内,构建小鼠阴道白假丝酵母菌过度增殖模型。采用阴道接种德氏乳杆菌DM8909突变株208菌液（2×108CFU/mL）处理,取其阴道冲洗液进行阴道菌群分析,并进行阴道上皮细胞的电镜检查。结果乳杆菌干预后显著清除阴道内的假丝酵母菌,肠杆菌恢复正常水平,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论德氏乳杆菌DM8909抗性菌株208能调整白假丝酵母菌在小鼠阴道内定植,对小鼠阴道上皮细胞有恢复作用。     

妊娠女性阴道中两种德氏乳杆菌亚种的生物学特性

目的 探讨妊娠女性阴道中德氏乳杆菌的生物学特性，以供临床进一步研究。方法 采用质谱鉴定仪初步鉴定菌种，再用16S rRNA基因和一代测序技术进行确认，同时观察德氏乳杆菌在培养基上的生长特征、染色情况、生化反应和抑菌现象。结果 在妊娠女性阴道中首次分离出德氏乳杆菌印度亚种和sunkii亚种。两种细菌16S rRNA基因扩增产物1 438 bp中存在3个碱基的差异。两种细菌均为革兰阳性兼性厌氧长杆菌。德氏乳杆菌印度亚种菌落边缘不整齐、菌落粗糙，而德氏乳杆菌sunkii亚种菌落边缘整齐微凸起且中间凹陷、菌落湿润，都能产生α-溶血环。两种细菌均能产生精氨酸双水解酶1(ADH1)、精氨酸双水解酶2(ADH2s)、丙氨酸芳胺酶（AlaA）、丙氨酸—苯丙氨酸—脯氨酸芳胺酶（APPA），分解蔗糖（SAC）和D-葡萄糖（dGLU），同时奥普托欣耐受试验（OPTO）呈阳性，过氧化氢试验为阴性，能分解葡萄糖产酸。两种菌都能抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的生长。结论 两种德氏乳杆菌亚种核苷酸序列存在单个碱基差异，直接影响其部分生物学特性。     

冷冻干燥对重组酵母乙型肝炎疫苗效力(抗原性)的影响

重组酵母乙型肝炎疫苗(酵母乙肝疫苗)加入保护剂后冷冻干燥,观察是否影响疫苗抗原性和稳定性。按5％和1％的比例,在酵母乙肝疫苗原液中分别加入蔗糖和明胶,低温冷冻干燥,制备3批冻干疫苗,分别进行体外相对效力和小鼠ED50测定。加保护剂冻干后酵母乙肝疫苗体外相对效力和小鼠ED50值较冻干前改变不大,而4℃放置和热加速后的稳定性均优于液体疫苗。因此现有酵母乙肝疫苗加入保护剂冻干后,显著提高了疫苗的稳定性,为进一步制备稳定的疫苗参考品打下了初步基础。     

双歧杆菌包埋保存技术工艺研究

采用一种全新的思路和方法,从将双歧杆菌活菌完全隔绝空气和降低其对温度的敏感性出发,运用制备微囊的方法,采用一种药用成膜材料,将包埋与冷冻干燥有机结合起来,在冷冻干燥的同时迅速在双歧杆菌活菌体周围形成一层类似微囊的保护膜,即将双歧杆菌活菌体包埋在保护膜内,从而达到减少甚至避免菌体冻干损伤,提高活菌存活率和收率,延长活菌常温保存期,提高活菌常温稳定性的目的。同时,这种包埋保存技术完全去除了常规冻干辅料——脱脂奶粉,能有效减少冷冻干燥菌粉的吸湿性,更利于活菌保存。用双歧杆菌包埋保存技术制备出的冻干菌粉,其含菌量比用常规冻干保护剂作冻干辅料的冻干菌粉高几百亿个／克,双歧杆菌活菌在37℃的保存期达四个月(相当于常温下保存一年以上),有效地解决了双歧杆菌活菌制剂常温保存期短的技术关键问题。     

抗生素诱导小鼠阴道菌群失衡及乳杆菌调节作用的研究

目的 构建抗生素诱导的小鼠阴道菌群失衡模型,并研究乳杆菌对假丝酵母菌的阴道菌群失调的调整作用.方法 以IRC小鼠为实验对象,用头孢曲松造成阴道菌群失调,并将白假丝酵母接种到小鼠阴道内,造成小鼠阴道白假丝酵母过度增殖模型.对抗生素作用后的小鼠,采用乳杆菌预防、同步、治疗3种方式,阴道接种德氏乳杆菌DM8909菌液(2×108CFU/ml);取其阴道分泌物进行假丝酵母菌及乳杆菌的阴道菌群分析,并同时进行分泌物镜检,取阴道组织标本做病理组织学检查.结果 模型组小鼠阴道内细菌总数显著下降(P<0.01),出现阴道红肿、分泌物涂片镜检查到白细胞及假丝酵母.乳杆菌对小鼠抗生素导致的阴道菌群失衡的调节作用明显,受损小鼠阴道菌群的多样性和数量恢复至正常(P>0.05),其中乳杆菌预防组阴道菌群破坏程度最小(P<0.01);乳杆菌干预后的小鼠都可以显著性清除阴道内的假丝酵母菌(P<0.01),以乳杆菌预防组效果最好.结论 德氏乳杆菌DM8909能阻止白假丝酵母对阴道上皮的黏附作用,能调整阴道的菌群,对阴道黏膜有一定的修复功能.     

超速离心机制备冷冻干燥保存菌种

利用超速离心机原有的冷冻系统和真空系统进行冷冻干燥的方法冻干保存了３０种国际标准菌种,４℃保存一年后,随机检测了其中的１８种,全部存活良好。用本法还可以制备出１、２、３、１０ｍｌ不同容量的冷冻干燥生物制剂,适用于中批量各种冻干生物制剂的生产和研究。一机两用,省资金,省用房,提高了机器的利用率。     

对DM8909菌株治疗菌群失调性阴道病作用机制的研究

自 Doderlein( 1 894)首次报道乳杆菌以来 [1] ,人们普遍认为 ,乳杆菌是阴道优势菌群 ,能抑制内源性及外源性病原菌的过度生长 ,对维持阴道生态平衡起重要作用。资料指出 ,非特异性 (细菌性 )阴道炎的发病原因是阴道乳杆菌生物拮抗活性降低或消失 [2 ]。虽然许多研究者用外源性乳杆菌调整肠菌群失调及治疗非特异性阴道炎具有一定效果 [4 ] ,但乳杆菌产生保护作用的机制仍不十分清楚。本试验以从阴道分离的乳杆菌 DM890 9菌株作为试验菌株进行了乳杆菌治疗菌群失调性阴道病的机制研究 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 .1　降低阴道 p H1…     

冻干保护剂对假单胞菌菌粉存活率的影响

保护剂的添加对提高假单胞菌冷冻干燥菌粉的存活率和贮藏稳定性有显著效果。设计实验对冻干保护剂进行筛选和优化研究,通过单因素实验和正交实验筛选出了最佳保护剂组合:脱脂乳粉10%,山梨醇3%,甘油1%,L-抗坏血酸钠2%,假单胞菌冻干后的存活率可达90%,菌粉25℃存放6个月,存活率为50.2%。     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F（ab）2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18 F(ab′)2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18 F(ab′)2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(＜3%)、复溶时间(＜10 s)、纯度(＞95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18 F(ab′)2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab′)2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18 F(ab′)2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18 F(ab′)2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(＜3%)、复溶时间(＜10 s)、纯度(＞95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18 F(ab′)2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.     

乳酸杆菌细胞裂解物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑制作用

目的探讨乳杆菌DM8909裂解物在体内外对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑制作用。方法通过对乳杆菌超声波破碎制成裂解物,分别用乳杆菌裂解物原液、裂解物稀释液、发酵上清液、乳杆菌活菌制剂进行体内、体外实验,观察乳杆菌各成分对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑制作用。结果德氏乳酸杆菌裂解物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑制作用与乳杆菌活菌制剂的抑制作用相近。结论德氏乳酸杆菌裂解物在体内外对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌均有较强的抑制作用。     

乳杆菌DM8909菌株抑制小鼠阴道感染的研究

目的 :探讨乳杆菌 DM880 9菌株对小鼠阴道内其他菌群的抑制及调整阴道菌群的作用。方法 :通过用阿莫西林钠溶液对小鼠阴道冲洗处理后 ,接种致病性大肠埃希菌 EPEC10 4 ,建立起大肠埃希菌在小鼠阴道内的定植 ;用乳杆菌 DM890 9菌液冲洗治疗来去除大肠埃希菌 EPEC10 4在小鼠阴道的定植。结果 :通过各组小鼠阴道冲洗液检出的平均对数值比较 ,乳杆菌治疗组的小鼠阴道内大肠埃希菌的数量 ( 3.82±0 .6 2 )较自然恢复组小鼠阴道内大肠埃希菌的数量 ( 6 .72± 1.16 )减少明显 ( P<0 .0 5 ) ,而且治疗组的症状好转率 ( 8/10 )显著好于自然恢复组的症状好转率 ( 2 /10 ) ( P<0 .0 5 )。结论 :乳杆菌 DM890 9菌株能有效去除大肠埃希菌 EPEC10 4在小鼠阴道的定植和改善小鼠外阴的炎症症状     

女性阴道中产细菌素的乳杆菌筛选与鉴定

目的对从60例健康女性阴道中筛选出产生细菌素的优势乳杆菌进行鉴定,并为研制开发微生态制剂提供优良可靠菌种。方法利用牛津杯法筛选出19株乳杆菌,其菌株发酵乳酸量高并且产生细菌素。对19株乳杆菌进行了多项理化鉴定。结果19株乳杆菌分别为：格氏乳杆菌9株,唾液乳杆菌1株,卷曲乳杆菌9株。结论筛选的19株乳杆菌是健康女性阴道中的优势有益菌,具有较强的产酸能力,都产生细菌素,其中16株产生过氧化氢,某些菌株具有较高的生产应用价值。