LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的野黄芩苷含量

目的:建立LC-MS/MS的分析方法测定大鼠血浆中的野黄芩苷,研究灯盏生脉胶囊中野黄芩苷在大鼠体内的药动学行为。方法:以噻氯匹定为内标,血浆样品经1%甲酸乙腈沉淀蛋白处理后,用LC-MS/MS法测定血浆中的野黄芩苷浓度。结果:野黄芩苷线性范围为1.31～670.00 ng·mL-1(γ0.999),最低定量浓度为1.31 ng·mL-1,回收率、日内、日间考察均符合生物样品分析要求。实验结果显示,野黄芩苷在大鼠体内出现多峰现象。结论:建立的LC-MS/MS定量分析方法灵敏、准确,可用于大鼠血浆中野黄芩苷的测定及其药代动力学研究。     

小型猪血浆中二丙酸倍他米松及其代谢物倍他米松的LC-MS/MS 同时测定方法的建立及在药动学研究中的应用

目的：建立同时测定小型猪血浆中二丙酸倍他米松及其代谢物倍他米松的LC-MS/MS 法,并研究小型猪皮肤外用二丙酸倍他米松乳膏后,二丙酸倍他米松及倍他米松的药动学特征。方法：血浆样品经酸化后以乙醚- 环己烷（4 ∶ 1）提取,LC-MS/MS 分析,以Hedera ODS-2（150 mm×2.1 mm,5 μm）为分析柱,流动相为5 mmol?L-1 醋酸铵水溶液（含0.1% 乙酸）– 甲醇,梯度洗脱。二丙酸倍他米松、倍他米松及内标布地奈德的监测离子对分别为m /z 563.2（[M+CH3COO]-）→ 483.1、m /z 451.2（[M+CH3COO]-）→ 361.0 和m /z 489.3（[M+CH3COO]-）→ 357.1。对小型猪外用二丙酸倍他米松乳膏后其血浆中二丙酸倍他米松及代谢物倍他米松的浓度进行测定,并计算主要药动学参数。结果：二丙酸倍他米松血药浓度在26.85~644.4 ng?L-1 范围内线性关系良好,倍他米松血药浓度在10.62~637.2 ng?L-1 范围内线性关系良好。结论：本方法专属性强、简便、灵敏,可用于血浆样本中二丙酸倍他米松及其代谢物倍他米松的测定及药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中伊伐布雷定浓度及药动学

目的：建立人血浆中伊伐布雷定的液相色谱-质谱-质谱联用测定方法,研究健康人体药代动力学。方法：以地西泮为内标物,采用液相色谱-质谱-质谱联用法,电喷雾电离源选择性正离子峰检测。测30名健康志愿者单剂量口服盐酸伊伐布雷定片的体内血药浓度,获得药动学参数。结果：伊伐布雷定在0.101-101 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.998）,最低检测浓度为0.101 ng·mL-1。高、中、低浓度的方法提取回收率分别为93.2%、86.6%、87.5%,日内、日间精密度RSD均小于15%。结论：LC-MS/MS方法灵敏度高,专属性强,准确,简便,适用于盐酸伊伐布雷定片的人体药代动力学研究。     

LC-MS/MS 法测定人血浆中伊伐布雷定浓度及药动学

目的:建立人血浆中伊伐布雷定的液相色谱-质谱-质谱联用测定方法,研究健康人体药代动力学.方法:以地西泮为内标物,采用液相色谱-质谱-质谱联用法,电喷雾电离源选择性正离子峰检测.测30名健康志愿者单剂量口服盐酸伊伐布雷定片的体内血药浓度,获得药动学参数.结果:伊伐布雷定在0.101-101 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.998),最低检测浓度为0.101 ng·mL-1.高、中、低浓度的方法提取回收率分别为93.2%、86.6%、87.5%,日内、日间精密度RSD均小于15%.结论:LC-MS/MS方法灵敏度高,专属性强,准确,简便,适用于盐酸伊伐布雷定片的人体药代动力学研究.     

抗体类药物非聚糖翻译后修饰的LC-MS表征分析

抗体类药物往往存在复杂多样的翻译后修饰(post-translational modifications, PTMs),由此产生高度的异质性。PTMs表征是抗体类药物研发的重要组成部分。尤其在早期研发阶段,高质量的结构表征可以为药物筛选、药物发现、工艺开发和优化提供指引和依据。基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术的表征分析手段可快速、准确地识别PTMs,已成为抗体类药物PTMs分析及结构表征的有力工具。该文综述了抗体类药物非聚糖PTMs的鉴定成果,内容包括修饰类型、修饰位点、修饰所在区域、表达系统信息及潜在影响,并对LC-MS表征分析策略进行了一定的探讨,希望为抗体类药物早期研发阶段的表征分析提供参考。综述的非聚糖PTMs均通过LC-MS或LC-MS/MS技术得到了鉴定。     

妇宁康泡腾胶囊的药代动力学研究

目的研究妇宁康泡腾胶囊在家兔体内的药动学特点。方法用HPLC法测定甘草酸在家兔体内48 h血药浓度,采用3P87药动学程序计算药动学参数。结果主要药动学参数为t1/2=8.956 h,Tmax=8.27 h,Cmax=0.4544μg/ml,AUC=37.161。结论该制剂在家兔体内吸收代谢缓慢,其生物半衰期超过8 h。     

LC-MS/MS法测定苦参提取物中苦参碱和氧化苦参碱的质量浓度

摘要 目的：探讨液相色谱/串联质谱法(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)测定苦参提取物中苦参碱和氧化苦参碱的质量浓度。方法：验证LC-MS/MS测定苦参提取物中苦参碱、氧化苦参碱的可行性与有效性,并判定检出限、重复性、稳定性、加样回收率。结果绘制苦参碱、氧化苦参碱的检出标准曲线。结果：LC-MS/MS检测苦参提取物中苦参碱与氧化苦参碱的一级质谱图和二级质谱图显示,苦参碱和氧化苦参碱的相对分子量为：248.36、246.36。色谱图显示苦参碱与氧化苦参碱无干扰色谱峰,各成分及内标峰形良好,表明该方法专属性强。在5 μg/L~500 μg/L浓度范围内,苦参碱、氧化苦参碱均呈现良好的线性关系,线性方程分别为y=6.10x-118.29和y=18.29x-14.22,检出限均为0.1 μg/L。LC-MS/MS法测定苦参提取物中苦参碱、氧化苦参碱的重复性、稳定性、加样回收率RSD均<5 %。结论：LC-MS/MS法测定苦参提取物中苦参碱和氧化苦参碱的质量浓度具有可行性、高灵敏度、高特异性等优点,可用于苦参提取物的质量控制与评价,并为后续他人的研究提供关键试验参考条件。     

LC-MS/MS方法测定比格犬血浆中沙芬酰胺及其代谢物

建立液相色谱-质谱联用/质谱(LC-MS/MS)测定比格犬血浆中沙芬酰胺异构体及其代谢物浓度的方法,在此基础上对沙芬酰胺异构体及其代谢物在比格犬体内的药代动力学进行研究。色谱检测条件方法一为用AS-RH手性柱测定沙芬酰胺异构体;方法二为用XB-C18分析柱测定沙芬酰胺代谢物。质谱条件离子源为APCI源,离子化方式为正离子模式,喷雾电压5 200 V,加热毛细管温度550℃,雾化气(N2)流速75.8 KPa,气帘气(N2)75.8KPa,碰撞气(N2)55.16 KPa,扫描方式为多反应监测(MRM)。建立的LC-MS/MS方法线性范围左旋沙芬酰胺为10~2 000 ng/m L(r=0.999 4),右旋沙芬酰胺为10~2 000 ng/m L(r=0.997 6),沙芬酰胺代谢物为10~1 000 ng/m L(r=0.994 1)。本方法灵敏,快速且稳定,适用于沙芬酰胺异构体及其代谢物药代动力学研究。     

家兔关节腔中微透析探针植入方法的建立及应用

目的建立家兔关节腔中微透析探针的植入方法,并考察其应用于家兔膝关节局部药动学研究中的可行性。方法将微透析探针在注射针头、引导导管的帮助下从家兔膝关节髌韧带一侧插入关节腔中,并用x．射线检查探针活性透析膜在关节腔中的位置。以青藤碱为研究药物,HPLC—Ms为检测方法同时进行了家兔血液及关节腔局部青藤碱的药动学研究。结果微透析探针活性透析膜能准确地进入关节腔的腔隙中,并成功应用于关节局部药动学研究,得到主要药动学参数。结论家兔关节腔中微透析探针植入方法可行,位置准确,应用于关节局部药动学研究中有明显的优势。     

固体分散体提高普罗布考生物利用度的研究

目的:采用固体分散体技术(solid dispersion,SD)提高普罗布考的溶解度,从而提高其溶出速率及口服生物利用度。方法:选用共聚维酮(S-630)为载体,采用喷雾干燥法制备普罗布考固体分散体,通过差示扫描热量法(differential scanning calorimetry,DSC)、X-射线粉末衍射分析(X-ray diffraction,XRD)对其进行物相鉴定,通过动力溶解度试验模拟固体分散体在体内胃肠道的动态溶出过程,采用液相色谱-质谱(LC-MS/MS)评价大鼠体内药动学行为。结果:差示扫描热量法和X-射线粉末衍射分析表明药物以分子形式存在于固体分散体中;动力溶解度结果显示固体分散体在200 min内的累积溶出度维持在80%以上,并且没有出现药物析出现象。大鼠体内药动学研究表明,普罗布考固体分散体的Cmax和AUC0→t分别是原料药的7.5倍和6.3倍。结论:将药物制成固体分散体后,溶解度和溶出度得到了显著提高,生物利用度也随之增加。     

液相色谱串联质谱法检测法布雷病样本的质量控制研究

法布雷病(FD)是一种罕见的X连锁隐性遗传的溶酶体贮积病.用于检测FD的常用生物学标志物之一是Lyso-GB3,它是一种脱乙酰基的神经酰胺三己糖苷,通常通过高灵敏和特异性的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)进行分析.由于LC-MS/MS技术的复杂性,中国大多数医院仍无法自行建立LC-MS/MS对FD进行高效可靠的诊断.患者的样本需要在当地医院采集,然后送到中心实验室进行LC-MS/MS分析.样本经过漫长的运输和储存过程,可能会影响样本质量,从而影响诊断的准确性.我们首先建立并验证了一种新的LC-MS/MS方法以保证FD样本质量,研究了分析前变量对Lyso-GB3检测的影响.这些分析前变量包括血浆的储存温度和时间、血浆的冻融循环、血浆的溶血程度、全血的储存温度和时间,以及离心温度.最后,我们分析了86个FD样本和100个正常人样本,并对Lyso-GB3浓度和与FD疾病分型的关系进行了相关性研究.结果显示,当血浆在20℃下储存时,Lyso-GB3浓度在4 d后开始下降.此外,溶血会显著影响FD样品的质量,重度溶血导致Lyso-GB3浓度下降了57.8%,其他分析前变量对FD样品质量影响不大.本方法在使用分析前标准化操作流程下,筛查FD的灵敏度和特异度为100%,确保了检测的正确性;当Lyso-GB3浓度的cut-off值为55.15μg/L,鉴别经典型、非经典型患者的灵敏度和特异度为71%和100%,ROC曲线下面积为0.83.我们的研究结果有助于医学实验室操作程序的标准化,以保证FD样本的质量,并为临床判定中国法布雷病的分型提供依据.     

格列本脲在糖尿病大鼠体内药动学评价

目的从格列本脲的药动学考察链脲佐菌素诱导糖尿病模型大鼠的适宜性。方法腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg诱发糖尿病大鼠模型,与正常大鼠灌胃给予10 mg/kg格列本脲,采用高效液相色谱法分析其血药浓度。用DAS 2.0软件处理数据,计算药动学参数。结果格列本脲在正常大鼠和模型大鼠体内的药动学参数为：Tmax分别是84.784 min,255.427 min;Cmax分别是0.259 mg/L,0.910 mg/L;CL分别是0.092 L/min/kg,0.019 L/min/kg;AUC（0～720min）分别是509.523 mg/L.min,1528.280 mg/L.min。结论格列本脲在正常大鼠与糖尿病大鼠体内的药动学过程有显著性差异,但此结果与文献不一致,此模型可能不适合考察药物在II型糖尿病病态下的药动学研究。     

液相色谱串联质谱法检测法布雷病样本的质量控制研究（英文）

法布雷病(FD)是一种罕见的X连锁隐性遗传的溶酶体贮积病.用于检测FD的常用生物学标志物之一是Lyso-GB3,它是一种脱乙酰基的神经酰胺三己糖苷,通常通过高灵敏和特异性的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)进行分析.由于LC-MS/MS技术的复杂性,中国大多数医院仍无法自行建立LC-MS/MS对FD进行高效可靠的诊断.患者的样本需要在当地医院采集,然后送到中心实验室进行LC-MS/MS分析.样本经过漫长的运输和储存过程,可能会影响样本质量,从而影响诊断的准确性.我们首先建立并验证了一种新的LC-MS/MS方法以保证FD样本质量,研究了分析前变量对Lyso-GB3检测的影响.这些分析前变量包括血浆的储存温度和时间、血浆的冻融循环、血浆的溶血程度、全血的储存温度和时间,以及离心温度.最后,我们分析了86个FD样本和100个正常人样本,并对Lyso-GB3浓度和与FD疾病分型的关系进行了相关性研究.结果显示,当血浆在20℃下储存时,Lyso-GB3浓度在4 d后开始下降.此外,溶血会显著影响FD样品的质量,重度溶血导致Lyso-GB3浓度下降了57.8%,其他分析前变量对FD样品质量影响不大.本方法在使用分析前标准化操作流程下,筛查FD的灵敏度和特异度为100%,确保了检测的正确性;当Lyso-GB3浓度的cut-off值为55.15μg/L,鉴别经典型、非经典型患者的灵敏度和特异度为71%和100%,ROC曲线下面积为0.83.我们的研究结果有助于医学实验室操作程序的标准化,以保证FD样本的质量,并为临床判定中国法布雷病的分型提供依据.     

LC-MS/MS分析人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型中胶霉毒素的含量

目的：采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型中胶霉毒素的含量。方法建立人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型并于不同时间段检测共培养模型中胶霉毒素的含量。以支气管上皮细胞单独培养为对照组,分别于12h、24h、36h收集对照组、AF293（烟曲霉标准株）共培养组、AFB5233WT（烟曲霉野生株）及AFB5233ΔGlip（烟曲霉胶霉毒素基因敲除株）共培养组细胞培养上清液,采用LC-MS/MS检测胶霉毒素的含量。结果共培养模型中胶霉毒素水平随培养时间增加而逐渐升高（P〈005）,胶霉毒素回收率为687%~726%。结论该方法快速、灵敏、结果准确,适用于测定人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型中胶霉毒素的含量。     

基于液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）检测癫痫小鼠毛发中内源性大麻素（2-AG、AEA）的含量

摘要 目的：基于液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）对癫痫小鼠毛发中内源性大麻素（2-AG、AEA）进行含量检测。方法：匹鲁卡品腹腔注射方法建立小鼠癫痫模型,采用LC-MS/MS检测毛发中2-AG、AEA的含量,对比分析不同癫痫发作分级小鼠2-AG、AEA含量差异。结果：标准品溶液中AEA、2-AG的保留时间分别为14.3 min,18.1 min,毛发样品中AEA、2-AG的保留时间分别为14.0 min,17.7 min。毛发样品中AEA的检测限、定量限、回收率为0.7 pg/mg、2.1 pg/mg和97.9%,毛发样品中2-AG的检测限、定量限、回收率为3.2 pg/mg、10.9 pg/mg和99.3%,且二者的日内、日间变异系数均低于15%。癫痫发作1级、2级、3级、4级、5级这五个分级癫痫小鼠的AEA含量和2-AG含量依次升高,不同癫痫发作分级小鼠毛发样品中AEA含量和2-AG含量比较（P均<0.05）。结论：LC-MS/MS测定癫痫小鼠毛发中2-AG、AEA的表达量,具有灵敏度更高,样品使用量更少等优点,可大规模样本研究。     

植物代谢组学中几种重要的次生代谢物液质分析技术研究进展

代谢组学（metabolomics）主要是研究生物体、组织、细胞的代谢物组分及检测其动态变化过程,是继基因组和蛋白组学后新兴的一门组学技术。代谢物是细胞调节过程中的最终产物,其水平被视为生物系统对遗传或环境变化的最终反映。通过合适的分析平台,准确定性、定量在复杂的生物中具有化学多样性的次生代谢物是代谢组学的一项重要工作。液相色谱-串联质谱技术（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）是代谢物质检测平台最常用的方法,也为植物次生代谢物的广泛应用研究提供了基础。本文主要从植物激素类、叶酸类、黄酮类等次生代谢物方面进行阐述,结合液质联用技术,简要论述不同次生代谢物检测技术的研究进展。     

龙血竭提取物有效成分剑叶龙血素A小鼠药动学研究

目的:选取中药广西龙血竭提取物(EDB)中有效成分之一的剑叶龙血素A(2,6-三甲氧基-4'-羟基二氢查耳酮)作为考察对象,研究其药动学规律,对龙血竭临床用药具有一定的指导意义.方法:建立实验小鼠血浆中剑叶龙血素A含量的高效液相色谱测定方法,测定给药后不同时间点血浆中剑叶龙血素A的浓度.通过药动学软件3P87进行数据处理,得出剑叶龙血素A的相关药动学参数.结果:剑叶龙血素A血药浓度高效液相色谱测定方法的线性范围为50-500ng/ml,高中低三种浓度回收率分别是114.80±2.86、103.60±4.38、101.80±2.12,最小检测浓度为10ng/ml,日内差为1.28%、日间差为2.26%、精密度(RSD)小于3%;剑叶龙血素A的药动学参数是:T(peak)为77.73min、C(max)为224.99ng/ml、T1/2Ke为72.91 min、T1/2Ka为40.94min、V/F(C)为1.019(mg/kg)/(ng/ml)、AUC为49553.47(ng/ml)*min.结论:建立了小鼠血浆中剑叶龙血素A高效液相色谱测定方法;EDB口服后剑叶龙血素A药动学为一室模型,有较大的吸收利用率,其消除半衰期为吸收半衰期的1.78倍,是吸收比消除快的药物.     

LC-MS/MS测定小鼠血浆中多靶点抗AD bis-MEP-乙二酰胺杂合物ZLA浓度及药动学研究

目的:建立检测小鼠血浆内新型多靶点抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)药物双美普他酚-乙二酰胺杂合物(ZLA)浓度的高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS),并研究其在小鼠体内的药代动力学。方法:样品经甲醇沉淀去蛋白,应用Waters Xbridge C18色谱柱(2.1×100 mm,3.5μm),以甲醇-水(含5 m M甲酸铵,p H 9.8)(85:15,v/v)为流动相,流速0.25 m L/min;采用电喷雾(ESI)离子源,选择正离子模式多反应监测,待测物分别为m/z 304.3→107.0(ZLA)和m/z 621.7→232.1(内标)。分别给予KM小鼠腹腔和尾静脉注射ZLA 5mg/kg,不同时间点采集血浆用于ZLA定量分析。结果:ZLA和内标保留时间分别为3.2 min和2.5 min。血浆中ZLA线性范围为1-1000 ng/m L。血浆中提取回收率超过91%,日内和日间精密度RSD均小于6%。药动学研究结果显示,腹腔注射时ZLA可快速分布到血浆中,在10.2 min达到峰值,且能达到良好的生物利用度(47.6%)。结论:本研究建立的ZLA血药浓度测定方法快速、灵敏,特异性好,并成功应用于小鼠血浆中ZLA的药代动力学研究。本研究资料将为ZLA在AD治疗中的进一步临床前评估提供依据。     

三聚氰胺胶体金免疫层析试纸条的研制

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的三聚氰胺抗原检测方法,对奶制品及饲料中的三聚氰胺残留水平监测提供参考。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的三聚氰胺单克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将MEL-OVA(三聚氰胺和卵清白蛋白的偶练物)和纯化的羊抗鼠IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。结果显示,制备的试纸监测体系方法检出限为50 g/L。试纸条对牛奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺残留的检出限分别为100 g/L、100 ng/g和200 ng/g。将该法与LC-MS/MS法对比检测牛奶、奶粉和饲料样品,在试纸条检测范围内,与LC-MS/MS法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性。制备的三聚氰胺胶体金检测试纸在常温干燥环境下至少可保质6个月,能够检测出三聚氰胺含量大于50 g/L的样品,适用于现场实际样品三聚氰胺残留水平监测,具有良好的应用前景。     

复方依那普利非洛地平缓释片在健康中国人体内的药动学特征

目的:研究复方依那普利非洛地平缓释片在健康中国人体内的药动学特征。方法:采用双交叉实验设计,将12名健康受试者随机分为2组,先接受第1周期低剂量给药,即分别单次口服受试制剂(复方依那普利非洛地平缓释片,每片含非洛地平5 mg和马来酸依那普利5 mg)1片和2种单方参比制剂(马来酸依那普利片,含马来酸依那普利5 mg;非洛地平缓释片,含非洛地平5 mg)各1片,然后分别每日口服受试制剂1片和2种单方参比制剂各1片,连续7 d。第1周期结束后,2组再交叉进行第2周期研究,给药方案同第1周期。随后进行高剂量研究,即2组所有受试者均单次口服受试制剂2片。采用液质联用法测定人血浆中非洛地平、依那普利及其活性代谢物依那普利拉的浓度,计算药动学参数并进行统计学分析。结果:单次低剂量给药研究中,受试者分别口服受试制剂与合用2种单方参比制剂所测得的非洛地平、依那普利和依那普利拉的各药动学参数均无显著差异(P>0.05);多次低剂量给药研究中,除口服受试制剂者的依那普利拉Tmax比口服参比制剂的受试者平均提前0.6 h左右(P<0.05)以外,其他药动学参数均无显著差异(P>0.05);单次低、高剂量给药的药动学数据显示:所有受试者血浆中非洛地平、依那普利和依那普利拉的AUC和Cmax均随给药剂量提高而增大,除接受高剂量受试制剂者的依那普利Tmax较接受低剂量的受试者平均延迟0.4 h左右(P<0.05)以外,两者间的其他药动学参数均无显著差异(P>0.05);各药动学参数在男性和女性受试者间无显著差异(P>0.05)。结论:该研究建立的人血浆中非洛地平、依那普利和依那普利拉的LC-MS测定方法的准确度、精密度、稳定性及线性关系等均符合生物样品的分析要求,适用于复方依那普利非洛地平缓释片人体药动学研究;口服受试制剂与同服2种单方参比制剂的体内药动学过程基本一致。