实验15 DNA介导转移基因(DMGT)

1.配制试剂 100×磷酸缓冲液:Na_2HPO_4·7H_2O 0.49克。NaH_2PO_4·H_2O 0.7克,溶于100毫升水中,过滤除菌。—20℃贮存。Hepes缓冲液:Hepes(50mM)1.19克(分子量为238.3),NaCl(280mM)1.64克,溶于水中,用1N NaOH调节pH为7.05—7.10,加水至100毫升,过滤除菌。—20℃贮存。     

响应面法优化褐腐真菌竹生薄孔菌产纤维素酶的液体培养基

竹生薄孔菌是一种褐腐真菌,可产生具有重要应用价值的纤维素酶。以纤维素酶为响应值,通过响应面PlackettBurman设计、最陡爬坡设计、Box-Behnken设计建立数学模型,获得竹生薄孔菌产纤维素酶的最适液体培养基为:葡萄糖7.44 g/L、蛋白胨5.0 g/L、麸皮35.31 g/L、Tween 80 9.57 m L/L、KH_2PO_4 1.0 g/L、Mg SO_4·7H_2O 0.5 g/L、Co Cl_2·6H_2O 0.06 g/L、Fe SO_4·7H_2O 0.03g/L、Ca Cl_2 0.5 g/L、Zn SO_4·7H_2O 0.05 g/L、维生素B1 0.01 g/L。在此优化培养基条件下得到的纤维素酶活性为53.17 U/m L,与理论值52.65 U/m L相近,且比优化前提高了2.84倍,说明响应面设计对于优化液体培养基以提高纤维素酶活性切实可行。     

酚-次氯酸钠显色法测定大鼠脑中游离氨-N含量

本文介绍一种用酚-次氯酸钠试剂直接测定动物组织样品中游离氨-N含量的方法,此法简便、灵敏、省时,最小检测量为0.05微克氨-N。酚-亚硝基铁氰化钠试剂:取酚0.6克、亚硝基铁氰化钠5毫克、加水至50毫升,放置24—48小时后使用。次氯酸钠试剂:Na_2HPO_4·12H_2O 1.79克、Na_3PO_4·12H_2O 1.9克、氢氧化钠0.5克、次氯酸钠原液1毫升,加水至50毫升,贮于棕色瓶内。硫酸铵标准液(1毫升=0.05     

利用气相色谱法同时测定土壤中反硝化作用和固氮作用的强度

土壤中反硝化菌和固氮菌的作用强度与其产生的N_2O及C_2H_2还原成C_2H_4的量有一定关系。本文报导了为测定土壤中微量的N_2O、C_2H_2和C_2H_2数量,所建立的双柱双检测器一次进样同时测定的二维气相色谱法。此法能简单、快速、准确地反映出土壤中反硝化菌和固氮菌的作用强度。文中对仪器装置、色谱条件、样品处理、干扰物的消除、最小检测浓度、重复性、方法应用等进行了报导。     

蛋白质定量方法的进展

本文在简要比较常用蛋白质定量方法的基础上,结合自己的工作,选择性地叙述了Lowry法、考马斯亮蓝G-250染料测定蛋白质的改进法。还介绍了银染色定量法和4-甲酸喹啉测定蛋白质含量的新方法。     

微量元素对水稻幼苗生长和呼吸作用的影响及其相互关系

用不同浓度的各种微量元素CuSO_4·5H_2O、MnSO_4·4H_2O、ZnSO_4·7H_2O、H_3BO_3·H_2O、MoO_3处理水稻种子24小时,放在25℃恒温箱内萌发,10天后除去胚乳分别测定地上部和地下部的干重。微量元素促进生长和呼吸的最适浓度是铜2p.p.m.,锌、锰100p.p.m.,钼、硼50p.p.m.。用最适浓度浸种得到的幼苗分别测定微量元素对呼吸抑制剂(氰化钾、丙二酸、氟化纳等)的相互作用以及对琥珀酸氧化酶的影响,结果如下: 1.5种微量元素中除锌对水稻地上部有抑制作用外,其他都对生长有促进作用,一般幼苗干重可增加10％左右,最高可增加地上部27％(硼50p.p.m.)。 2.各种微量元素对生长有促进作用的浓度一般也促进呼吸,两者基本是平行的,随着浓度的增加对生长和呼吸均表现有抑制作用。 3.铜、锌、锰、钼对呼吸抑制剂氰化钾的抑制作用有明显的拮抗作用,它们随时间的延长而逐渐恢复。 4.各种微量元素均有加重丙二酸抑制作用的现象,这可能是因为微量元素对琥珀酸去氢酶就有抑制作用。 5.锰对琥珀酸氧化酶表现有好的作用,而铜却表现不利的影响。     

海洋来源链霉菌MY0504产纤溶酶的发酵条件优化

【目的】以发酵液纤溶酶活力为指标,优化海洋来源的链霉菌菌株MY0504的发酵条件。【方法】在菌株生长曲线及单因素试验基础上,采用Plackett-Burman设计筛选影响纤溶酶活性的主要因素,进一步用最陡爬坡试验及Box-Behnken中心组合设计法优化发酵条件。【结果】纤溶酶活性最高的发酵条件为:葡萄糖21.68 g/L,酵母粉25.31 g/L,NaCl5.0 g/L,K_2HPO_4·3H_2O3.0 g/L,MgSO_4·7H_2O 0.5 g/L,FeSO_4·7H_2O 0.02 g/L,装液量50 mL(250 mL摇瓶),接种量10%(体积比),初始pH 7.5,温度24°C,转速200 r/min,培养时间4.5 d。发酵液纤溶酶活性可达2 190.6 U/mL。【结论】确定了MY0504菌株产纤溶酶的最优发酵条件,为该酶的进一步分离纯化及性质研究奠定基础。     

响应面法优化黑曲霉产果胶酶培养基中无机盐成分的研究

利用SAS软件中的二水平设计和响应面分析方法较系统地研究了发酵培养基中无机盐组分对黑曲霉(Aspergillus niger)JW-1菌株产果胶酶的影响.得到了在一定条件下果胶酶随无机盐组分的变化规律,并根据分析结果优化了产酶培养基.最终确定KH_2PO_4,FeSO_4·7H_2O,CaCl_2·2H_2O的最优浓度分别为0.85mg/mL,1.86mg/mL和2.52mg/mL,此时果胶酶活力可达5054.6U·g~(-1),为该菌株今后的研究和应用奠定了基础.     

敦煌地区产胞外多糖菌株的筛选鉴定及其发酵条件研究

盐碱土壤是一类典型的极端环境,极端环境下微生物产生的胞外多糖具有更加优良的性质。从敦煌地区盐碱土壤中分离出一株胞外多糖产量较高的菌株并确定其分类学地位和最佳培养基。多糖含量测定采用苯酚硫酸法,菌株鉴定结合生理生化特征、形态学特征和16S rDNA分子生物学鉴定方法,最佳培养基采用单因子优化培养基实验和正交实验。菌株Ⅱ4-01为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),其在25 g/L蔗糖、25 g/L黄豆粉、0.5 g/L MgSO_4、2 g/L Na_2HPO_4·12H_2O、1 g/L NaH_2PO_4·2H_2O、pH=7.5的发酵培养基中培养36 h时,胞外多糖产量可达8.594 g/L。菌株Ⅱ4-01发酵培养基经优化后胞外多糖产量提高了10倍。     

金属-水杨酸及其衍生物的配合物的合成及抗真菌性能

水杨酸是被医药和农业等领域广泛使用的抗真菌物质。为了提高水杨酸抗菌性能,利用水杨酸分别与MnSO4·H2O、FeCl3·H2O、ZnSO4·H2O、NiCO32Ni（OH）2·4H2O合成金属配合物,采用最小抑菌浓度测定法、菌丝生长速率法、菌丝湿重法等方法对其进行抑菌活性研究。研究结果表明,在适宜浓度下,上述金属-水杨酸配合物的抑菌效果均比水杨酸的抑菌效果明显。其中FeCl3·H2O和NiCO32Ni（OH）2·4H2O与水杨酸的配合物抑菌效果最明显。     

产广谱乳酸菌素菌株的选育、鉴定及其发酵特性研究

在传统发酵食品中分离得到产酸茵株50株,从中筛选出一株产广谱乳酸菌素菌株,经鉴定是植物乳杆菌。实验对该菌株产乳酸菌素发酵培养基的优化结果为:牛肉膏2%,酵母粉0.75%,蔗糖2.5%,柠檬酸三铵0.2%,乙酸钠0.5%,K_2HPO_40.4%,MgSO_4·7H_2O 0.058%,MnSO_4·4H_2O 0.025%;最佳发酵条件为:35℃,初始pH值6.0,添加2%的吐温80。在此条件下,菌株的抑菌圈直径可达3.15 cm。     

低浓度微囊藻毒素MC-LR对梭鱼草幼苗根系NH_4~+和H_2PO_4~-吸收特性的影响

运用营养液培养法和常规耗竭法,对低浓度(2和10μg·L~(-1))微囊藻毒素MC-LR分别处理6和12 d后梭鱼草(Pontederia cordata Linn.)幼苗根系对不同浓度NH_4~+(0.05~1.50 mmol·L~(-1))和H_2PO_4~-(0.01~0.50mmol·L~(-1))的吸收速率和吸收动力学参数的变化进行了研究。结果显示:随培养液中NH_4~+和H_2PO_4~-浓度的提高,各处理组幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率均逐渐增大,但增幅则因MC-LR处理浓度和处理时间而异。经2和10μg·L~(-1)MC-LR短期(6 d)处理后,幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率总体上均显著高于CK(对照,0μg·L~(-1)MC-LR)组;经长期(12 d)处理后,2μg·L~(-1)MC-LR处理组幼苗根系的H_2PO_4~-和较高浓度NH_4~+吸收速率均显著高于CK组,而10μg·L~(-1)MC-LR处理组幼苗根系的NH_4~+吸收速率降低,但其较高浓度H_2PO_4~-吸收速率仍显著高于CK组。梭鱼草幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率与底物浓度的函数关系均符合双倒数曲线,拟合关系均在α=0.001水平上显著,但最大吸收速率(V_(max))和表观米氏常数(K_m)变化规律不同。经2和10μg·L~(-1)MC-LR处理6和12 d后,幼苗根系NH_4~+吸收的V_(max)和K_m值均高于CK组;经2μg·L~(-1)MC-LR处理6和12 d后,幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值高于CK组、K_m值低于CK组;经10μg·L~(-1)MC-LR处理6 d后幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值高于CK组、K_m值与CK组无差异,但经10μg·L~(-1)MC-LR处理12 d后幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值略高于CK组、K_m值明显高于CK组。说明随处理时间延长,经2μg·L~(-1)MC-LR处理后幼苗根系的NH_4~+吸收潜力提高、NH_4~+亲和力略有降低,而H_2PO_4~-吸收潜力略有降低、H_2PO_4~-亲和力略有提高;经10μg·L~(-1)MC-LR处理后幼苗根系的NH_4~+吸收潜力略有提高、NH_4~+亲和力降低,而H_2PO_4~-吸收潜力和亲和力均降低。综合分析结果表明:2和10μg·L~(-1)MC-LR处理均能够提升梭鱼草幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收潜力,其中,2μg·L~(-1)MC-LR处理对其根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收均具有明显的促进作用,而10μg·L~(-1)MC-LR短期处理对其根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收也具有一定的促进作用。     

问题解答

问:高中课本第9页中说:“糖类的分子式可以用通式C_n(H_2O)_m来表示(n和m可以相同,也可以不同)”请将n和m相同与不同的举例说明。答:糖类化合物是指具有多羟基醛或多羟基酮结构的一大类化合物。糖由碳、氢、氧三种元素组成。其中氢和氧的比例为2:1,就象氢和氧在水分子中的比例一样。所以糖的通式可写成C_n(H_2O)_m,并因此被称为碳水化合物。如赤藓糖的分子式为C_4H_8O_4,可写成C_4(H_2O)_4;核糖的分子式为C_5H_(10)O_5,可写成C_5(H_2O)_5;葡萄糖的分子式为C_6H_(12)O_6,可写成C_6(H_2O)_6等。     

简讯

无锡轻工业学院与常州武进生物化工厂协作,从枯草杆菌209出发选出高产α-淀粉酶变异菌株B·S796。该菌在麦芽糖6％、豆饼水解液6—7％、Na_2HPO_4·12H_2O0.8％、(NH_4)_2SO_4 0.4％、CaCl_20.2％、NH_4Cl 0.15％、pH_5—7.0的麦     

微量ATP的荧光素酶分析方法的研究

利用荧光素酶发光系统、测定ATP及有关的代谢物和酶的方法首先为McElvoy和Strechler报道。荧光素酶系统的发光机制可归纳为二步反应:LH_2(荧光素) ATP AMP·LH_2 P-P (1)LH_2·AMP 1/2 O_2→L·AMP~* H_2O→L·AMP hγ H_2O (2) 由于这一反应系统简单、快速、灵敏、专一性强,因此,不仅在生命科学研究中有重要的用途,而且在工农医生产中,也得到日趋广泛的应用。本文旨在说明:1.自己装置的测量仪器灵敏度     

被孢霉菌发酵产生花生四烯酸的研究

研究了温度、培养基初始pH、碳源、氮源对被孢霉(Mortierella sp.)产生花生四烯酸的影响。正交试验结果表明,Mortierella sp.M10最佳培养基组成为(g/L):葡萄糖100,酵母膏10,KNO_3 4.0,KH_2PO_4 2.0,CaCl_2·2H_2O 0.1,MgSO_4·7H_2O 0.5,FeCl_3·6H_2O0.015,ZnSO_4·7H_2O 0.0075,CuSO_4·5H_2O 0.0005。采用最佳培养基及发酵条件,细胞干重和花生四烯酸产量分别为33.51g/L和0.827g/L。同时对摇瓶发酵过程进行了分析。     

夏秋季丹霞梧桐叶片光合特性日变化特征比较

利用便携式光合蒸腾仪于夏季、秋季各测定了国家重点保护植物丹霞梧桐(Firmiana danxiaensis Huse et H.S.Kiu)叶片的光合特性及生态因子,以期为了解该植物的生态适应性提供基础数据。结果表明:夏季测定日的气温、大气相对湿度、CO_2浓度、光合有效辐射、叶片SPAD值、净光合速率、蒸腾速率及气孔导度等光合特性等指标均高于秋季测定日的相应值,但叶片水分利用效率、各因子之间的相关性则夏季低于秋季。夏季在测定日平均气温近37.37℃高温下,大气相对湿度65.66%,丹霞梧桐叶片净光合速率平均为14.35μmol CO_2/m~2·s,蒸腾速率4.28 mmol H_2O/m~2·s,气孔导度184.33 mol H_2O/m~2·s;秋季测定日气温平均33.78℃,大气相对湿度41.97%,叶片净光合速率8.70μmol CO_2/m~2·s,蒸腾速率2.75 mmol H_2O/m~2·s,气孔导度85.19 mol H_2O/m~2·s;可见,丹霞梧桐在夏季以高的净光合速率、蒸腾速率和气孔导度,表现出对丹霞地貌高温高湿环境的高度适应性。     

暹罗芽胞杆菌FJAT-45551用于农业生物防治的优化培养

以具有防病促长且抑菌谱广的暹罗芽胞杆菌(Bacillus siamensis)FJAT-45551为出发菌株,分别以生物量和发酵液的青枯雷尔氏菌和尖孢镰刀菌抑菌活性为指标,通过单因子和正交试验对其培养基成分和发酵培养条件进行优化,从而提高其抑菌活性。结果表明,优化后的培养基配方为:麸皮20 g/L,蛋白胨25 g/L,MgSO_4·H_2O 0. 2 g/L,CaCl_20. 1 g/L,FeSO_4·7H_2O 0. 1 g/L,NaH_2PO_4·H_2O 0. 5 g/L,K_2HPO_40. 5 g/L;最适发酵培养条件为:接种量1%、摇床转速130 r/min、温度20℃、装液量50 mL(250 mL的摇瓶装液50 mL)、初始pH值为6. 0。在优化的发酵条件下,FJAT-45551发酵液对番茄青枯病菌(Ralstorinia solanacearum)FJAT-91的抑菌圈直径达30. 82 mm,较优化前的抑菌圈直径增加了9. 09 mm,抑菌活性提高了41. 83%。     

桤木根瘤共生固氮研究技术与观测

本文介绍光学显微镜和电子显微镜技术在研究桤木根瘤共生关系中的应用,并报道桤木的培养与有关结瘤的新技术。 寄主植物的培养 欧洲桤木种子经自来水冲洗后,用漂白粉溶液(NaOCl 5.25％v/v)表面消毒10—15分钟,再用无菌蒸馏水洗涤三次,移入S/P种子—包装生长袋(大小为16×18厘米,由高压聚酯薄膜制成),每袋放2—6粒种子,并加20毫升无氮Crone溶液。 无氮Crone溶液的母液制备如下:KCl,75;CaSO_4·2H_2O,50;MgSO_4·7H_2O,     

促进柠檬酸增产的方法

1、钡盐能促进柠檬酸增产以甘蔗糖蜜为原料,以G23—4生产菌发酵时,加入钡盐能促进产酸,降低残糖并能提高糖酸转化率。例如在250毫升三角瓶(装液53毫升)的摇瓶试验中加BaCl_2一2H_2O 0.0426克,比对照组可提高产