注射促黄体素释放激素类似物和地欧酮诱导大鳍■和长吻■排卵的研究

对于性成熟的大鳍Ｍｙｓｔｕｓｍａｃｒｏｐｔｅｒｕｓ（Ｂｌｅｅｋｅｒ）野生鱼,单独注射多巴胺的抑制剂地欧酮（ＤＯＭ）不能影响血清促性腺激素（ＧＴＨ）水平,也不能诱导排卵;单独注射类似物ＬＨＲＨ－Ａ,虽能使血清ＧＴＨ水平显著升高,但仅产生较低的排卵率;而当ＤＯＭ与ＬＨＲＨ－Ａ结合注射却显著增强ＬＨＲＨ－Ａ促进血清ＧＴＨ水平升高的作用,并诱导出较高的排卵率。对性成熟的长吻ＬｅｉｏｃａｓｉｓｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓＧｕｎｔｈｅｒ野生鱼,使用ＬＨＲＨ－Ａ＋ＤＯＭ作２次注射诱导排卵的效果也与注射ＬＨＲＨ－Ａ加脑垂体这一传统诱导排卵方法相似。Ｌｉｎｐｅ方法（ＬＨＲＨ－Ａ＋ＤＯＭ,作１次或２次注射）避免了采集、保存脑垂体不便给生产带来的麻烦,在科鱼类的人工繁殖中,具有较高的推广价值。     

注射促黄体素释放激素类似物和地欧酮诱导大鳍Hu和长吻Wei排卵？…

对于性成熟的大鳍ＨｕＭｙｓｔｕｓ ｍａｃｒｏｐｔｅｒｕｓ 野生鱼,单独注射多巴胺的抑制剂地欧酮不能影响血清促性腺激素水平,也不能诱导排卵;单独注射类似物ＬＨＲＨ－Ａ,虽能使血清ＧＴＨ水平显著升高,但仅产生较低的排卵率;而当ＤＯＭ与ＬＨＲＨ－Ａ结合注射却显著增强ＬＨＲＨ－Ａ促进血清ＧＴＨ水平升高的作用,并诱导出较高的排卵率。     

诱导大鳍Hu和长吻Wei排卵过程中血清GTH水平的变化

繁殖期从嘉陵江收集性成熟的大鳍Hu和长吻Wei野生亲鱼,用Linpe方法（即LHRH－A加多巴胺D2受体拮抗剂地欧酮）或传统的LHRH－A加脑垂体的方法进行催产,定时取血样,用放射免疫方法测定催产过程中血清GTH水平的变化,进一步证实鲇形目鱼类GTH的分泌受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素GnRH和多巴胺的以重调节;排卵和产卵也是以血清TGH的急剧升高为先导的,而最终能否排卵还有赖于血清GTH峰是否超过“排卵阈值”,尽管催产后的大鳍Hu和长吻Wei雄鱼血清GTH水平也有一个高峰出现,但血清GTH水平升高幅度都大大低于雌鱼,这种现象在硬骨鱼类可能具有普遍性。     

鳗鲡繁殖生物学研究Ⅳ．人工催熟过程中下海鳗鲡的GtH分泌活动、性腺发育状况和脑垂体GtH细胞的超显微结构

雌二醇通过正反馈作用能促进脑垂体促性腺激素(GtH)细胞的合成活动,使脑垂体GtH水平显著升高。促黄体素释放激素的类似物(LHRH-A)和利血平(reserpine,RES)能促进脑垂体GtH细胞的分泌活动,使血液中GtH含量显著升高。鲤垂体、人体绒毛膜促性腺激素(HCG)和LHRH—A三种激素混合进行多次注射能诱导雌雄鳗鲡性腺发育成熟,其催熟效果明显优于它们的分别单独多次注射或者鲤鱼脑垂体和HCG的多次注射,表明外源的和内源的促性腺激素对于诱导鳗鲡性腺发育成熟都是重要的。鳗鲡脑垂体GtH细胞超显微结构的观察证实它们在激素诱导性腺发育成熟过程中处于活跃的合成与分泌状态。     

利血平和丘脑下部促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)对大鳞副泥鳅促性腺激素细胞的分泌活动和排卵的促进作用

利血平能使神经分泌细胞的儿茶酚胺贮存量减少甚至消耗殆尽,导致多巴胺作为GRIF的作用减弱,从而显著增强LHRH-A促进GtH分泌和诱导排卵的效应。对大鳞副泥鳅,利血平和LHRH-A同时注射或者利血平比LHRH-A提前3小时注射,都能激活GtH细胞,显著增强其分泌活动并诱导排卵。利血平的最低有效剂量为1—5微克/克体重。利血平(25微克/克体重) LHRH-A(0.05微克/克体重)的催产效果和多巴胺拮抗物pimozide(1微克/克体重) LHRH-A(0.05微克/克体重)的催产效果一样,排卵率都达到了100％。     

诱导大鳍鱯和长吻鮠排卵过程中血清GTH水平的变化

繁殖期从嘉陵江收集性成熟的大鳍■ 和长吻 野生亲鱼,用Ｌｉｎｐｅ方法（即ＬＨＲＨ－Ａ加多巴胺Ｄ２受体拮抗剂地欧酮）或传统的ＬＨＲＨ—Ａ加脑垂体的方法进行催产,定时取血样,用放射免疫方法测定催产过程中血清ＧＴＨ水平的变化,进一步证实鲇形目鱼类ＧＴＨ的分泌受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素ＧｎＲＨ和多巴胺的双重调节;排卵和产卵也是以血清ＧＴＨ的急剧升高为先导的,而最终能否排卵还有赖于血清ＧＴＨ峰是否超过“排卵阈值”。尽管催产后的大鳍 和长吻 雄鱼血清ＧＴＨ水平也有一个高峰出现,但血清ＧＴＨ水平升高幅度都大大低于雌鱼,这种现象在硬骨鱼类可能具有普遍性。     

LHRH-A对尼罗罗非鱼生长及生长轴相关基因表达的影响

促性腺激素释放激素(GnRH)的主要作用是刺激脑垂体促性激素(GtH)的释放, 亦可促进鱼类生长激素(GH)的释放。促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)是哺乳类GnRH的类似物, 为了分析LHRH-A对尼罗罗非鱼生长调节的作用, 设计了长期和短期2个实验, 采用腹腔注射(剂量0.1 μg/g体重)方法, 分析LHRH-A对尼罗罗非鱼绝对生长率、特定生长率、肝体系数和肥满度的影响, 并应用荧光实时定量PCR方法检测在注射LHRH-A后不同时段(6h、12h、24h、2周)尼罗罗非鱼垂体GH、肝脏GHR和肝脏IGF-I基因的表达变化。结果表明, LHRH-A组尼罗罗非鱼的绝对生长率、特定生长率、肝体系数、肥满度均显著高于对照组(P<0.05); 注射LHRH-A后12h、24h垂体GH mRNA表达水平均显著升高(P<0.05), 2周后恢复到对照组水平; 注射LHRH-A后24h和2周肝脏GHR mRNA表达水平显著上升(P<0.05); 注射LHRH-A后6h肝脏IGF-I mRNA表达水平显著升高(P<0.05), 12h、24h和2周恢复到对照组水平。以上结果提示, LHRH-A可显著上调尼罗罗非鱼生长轴相关基因的表达, 从而促进鱼类的生长。     

多巴胺拮抗物PIM增强丘脑下部促黄体素释放激素类似物诱导大鳞副泥鳅排卵效应的研究

在注射低剂量LRH-A的同时注射多巴胺拮抗物pimozide(PIM),能显著增强LRH-A诱导的排卵效应,排卵率达到100％。 LRH-A+PIM能促进脑垂体GtH细胞的合成和分泌,而注射多巴胺能抑制LRH-A诱导的GtH释放活动。     

多巴胺拮抗物PIM增强丘脑下部促黄体素释放激素类似物诱导大鳞副泥鳅排卵效应的研究

在注射低剂量LRH—A的同时注射多巴胺拮抗物pimozide(PIM),能显著增强LRH-A诱导的排卵效应,排卵率达到100％。LRH—A PIM能促进脑垂体GtH细胞的合成和分泌,而注射多巴胺能抑制LRH—A诱导的GtH释放活动。     

促性腺激素释放激素类似物对长臀(鱼危)脑垂体促性腺激素分泌的影响

采用离体灌流孵育技术和促性腺激素的放射免疫测定方法,对长臀(鱼危)(Cranoglanis bouderius)脑垂体碎片促性腺激素的分泌进行了研究.结果表明:持续的促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)能显著刺激退化期的长臀(鱼危)离体脑垂体碎片促性腺激素(GTH)的分泌,并且长臀(鱼危)脑垂体碎片对持续的GnRH-A刺激未表现出脱敏性,该结果与胡子鲇和鲇鱼相似,而与金鱼和鲤科鱼类不同;重复脉冲GnRH-A刺激对长臀(鱼危)脑垂体碎片GTH分泌具有促进作用,而且存在剂量依存关系,与鲇鱼和鲤科鱼类相类似.上述结果表明在长臀(鱼危)的人工繁殖中可以用持续高浓度GnRH-A刺激对长臀(鱼危)进行催熟和催产.     

IGF—ImRNA在不同年龄鲤表达的差异和LHRH—A对IGF—ImRNA表达的影响

利用RNA酶保护法对7月龄性未成熟幼鲤和2龄性成熟鲤组织胰岛素样生长因子-I（IGF-I）mRNA的表达水平进行测定,结果表明成鱼肝和肾脏组织IGF-ImRNA的丰度显著高于幼鱼,对鲤成鱼和幼鱼腹腔注射促性腺激素释放激素类似物（LHRH-A,D-Ala^6-Pro^9-NEt-LHRH)使血清生长激素（GH）水平和肝组织IGF-ImRNA水平都显著升高,而成鱼生殖腺IGF-ImRNA的丰度比对照组显著增加,研究结果提示鲤在不同发育阶段肝组织IGF-ImRNA的丰度比对照组显著增加,研究结果提示鲤在不同发育阶段肝组织IGF-ImRNA的表达存在差别,其中2龄成鱼大于7月龄幼鱼;LHRH-A可能通过刺激垂体GH的释放间接促进肝组织IGF-ImRNA的表达,亦可能通过某种未知途径刺激生殖腺IGF-ImRNA的表达。     

鳗鲡繁殖生物学研究:Ⅵ.鳗鲡 17α,20β-双羟孕酮的生成和作用

研究了鳗鲡卵泡１７α,２０β－双羟孕酮的民它对卵母细胞胚泡破裂的影响。结果表明,注射锂鱼脑垂体奖浆液和人绒毛膜促性腺激素可诱导性腺发育成熟鳗鲡１７α,２０β－地酮的生成并导致排卵,但两者单独或结合使用对鳗鲡７００－９００μｍ离体卵泡１７α,２０β－双羟孕酮的生成没有作用,鳗鲡脑垂体匀浆液则能显著刺激７００－９００μｍ离体卵泡生成１７α,２０β－双羟孕酮。１７α－羟孕酮能显著增加鳗鲡７００－９００－     

注射LHRHa对泥鳅血清性类固醇激素变化研究

研究了注射促黄体激素类似物(LHRHa)后,泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)血清性类同醇激素的变化规律,并探讨在泥鳅繁殖季节时.孕酮(P)、睾酮(T)和雌二醇(E2)对性腺发育的作用及调节机制.实验共分两组,对照组和实验组;对照组只注射生理盐水;实验组注射LHRHa,雌鱼0.2 μg/g,雄鱼减半.注射前尾静脉采血,作为血液样本分析基础水平(Oh),注射药物后分别在7、24、48、72和96h尾静脉采血.测定雌鱼睾酮、雌二醇和孕酮,雄鱼孕酮和睾酬血清浓度.实验结果表明:注射LHRHa,雌鱼血清睾酮和雌二醇浓度显著高于对照组,雄鱼血清睾酮和孕酮显著高于对照组(P<0.05);24h浓度较高.雌鱼孕酬、睾酮和雌二醇分别为(0.710±0.082)ng/mL、(9.00±0.57)ng/mL和(696.4±26.2)pg/mL,雄鱼孕酮和睾酮分别为(0.527±0.121)ng/mL和(9.62±0.62)ng/mL.实验组雌鱼孕酮变化基本规律为,基础水平(0-7h)-逐渐升至最高(7-24h)-逐渐降至基础水平(24-48h)-维持基础水平(48-96h).实验组雌鱼睾酮和雌二醇与雄鱼孕酮和睾酮变化规律基本相似,其规律为,逐渐上升至最高(0-24h)-逐渐降至基础水平(24-72h)-维持基础水(72-96h).24h对照组雌鱼睾酮和雌二醇显著升高,浓度分别为:睾酮(2.20±0.18)ng/mL,雌二醇(269.1±36.6)pg/mL.对照组雄鱼血清孕酮和睾酮浓度实验期间均无显著变化.研究认为:LHRHa能够刺激泥鳅性类同醇激素分泌,特别是睾酮的分泌,显著提高雌鱼性腺指数(GSI).但刺激P的分泌调控能力有限,实验期间处于较低水平,诱导排卵效果差,泥鳅的性类固醇激素可能有特殊的调节机制.雌二醇和睾酮对性腺成熟有重要作用,孕酮对介导卵细胞最终成熟和排卵可能起重要作用,而雌二醇和睾酮无明显效果.     

鲑鱼促性腺激素释放激素类似物和Domperidone诱导几种养殖鱼GtH分泌和排卵的研究

鲑鱼GnRH的一种类似物:(D-Arg~6,Trp~7,Leu~8,Pro~9NET)-LHRH(sGnRH—A)和多巴胺拮抗物domperidone对诱导鱼类GtH分泌和排卵具有非常高的活性。sGnRH-A和DOM同时一次注射能促使大鳞副泥鳅和鲤鱼的GtH大量迅速释放,并有效地诱导它们以及草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲮鱼等排卵或产卵。     

鲤鱼(Cyprinus carpio L.)血清促性腺激素的放射免疫测定

本文报道用鲤、鲢等鲤科鱼混合垂体经乙醇抽提、DEAE-纤维素层析及葡聚糖凝胶过滤来纯化促性腺激素(GTH)的方法。所得GTH初步纯化品(SG-II-1)的产卵有效剂量为1微克/1克泥鳅体重。其最终纯化品(SG-II-2)在聚丙烯酰胺电泳谱中呈示为一条带,可供作放射免疫测定系统中的标记抗原。GTH放射免疫测定法的检测范围为0.1～16毫微克。在鲤鱼产卵季节,用放射免疫测定血清中GTH含量的变化,表明雌雄鱼在配组后血清中GTH含量逐渐上升,特别是雌鱼,在发情产卵时出现显著的高峰,随产卵活动的停止而下降,呈现出明显的产卵前后血清中GTH含量变化规律。这为研究鱼类生殖生理提供一些新的资料。     

鲤鱼(Cyprinus carpio L.)血清促性腺激素的放射免疫测定

本文报道用鲤、鲢等鲤科鱼混合垂体经乙醇抽提、DEAE-纤维素层析及葡聚糖凝胶过滤来纯化促性腺激素(GTH)的方法。所得GTH初步纯化品(SG-Ⅱ-1)的产卵有效剂量为1微克/1克泥鳅体重。其最终纯化品(SG-Ⅱ-2)在聚丙烯酰胺电泳谱中呈示为一条带,可供作放射免疫测定系统中的标记抗原。GTH放射免疫测定法的检测范围为0.1～16毫微克。在鲤鱼产卵季节,用放射免疫测定血清中GTH含量的变化,表明雌雄鱼在配组后血清中GTH含量逐渐上升,特别是雌鱼,在发情产卵时出现显著的高峰,随产卵活动的停止而下降,呈现出明显的产卵前后血清中GTH含量变化规律。这为研究鱼类生殖生理提供一些新的资料。     

SP-A、CRP和PCT在新生儿肺炎中的变化及诊断意义

为了考察肺泡表面活性物质蛋白A (SP-A)、血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)在新生儿肺炎中的变化及诊断意义,本研究检测了80例肺炎新生儿和40例健康新生儿血清SP-A、CRP和PCT水平。然后建立了肺炎克雷伯菌诱导的肺炎小鼠模型,每天按照200 mg/kg的剂量对小鼠腹腔注射SP-A蛋白溶液,共注射3 d。研究显示,肺炎新生儿血清中SP-A水平显著低于健康新生儿,而CRP和PCT水平均显著高于健康新生儿(p0.05)。肺炎新生儿血清SP-A与CRP和PCT水平显著负相关(p0.05),CRP和PCT水平显著正相关(p0.05)。SP-A、CRP和PCT联合诊断的敏感度、特异性和曲线下面积依次为0.864、0.829和0.845,均高于单独指标诊断。SP-A处理可显著减轻肺炎小鼠肺组织的病理改变,并显著升高肺组织和血清中的SP-A水平,降低血清CRP和PCT水平。本研究表明,肺炎新生儿血清SP-A水平明显降低,而CRP和PCT水平明显升高。SP-A、CRP和PCT联合检测对新生儿肺炎的诊断价值高于单独指标诊断。通过腹腔注射SP-A蛋白溶液可显著抑制小鼠肺组织病变,并降低血清CRP和PCT水平,从而抑制炎症反应。     

Reserpine和Domperidone对LHRH-A诱导黄鳝排卵的影响

本文研究 DA 的拮抗物(Domperidone)和消竭剂(Reserpine)对 LHRH-A 诱导黄鳝排卵产生的影响,为进一步探索 DA 在黄鳝下丘脑的作用提供资料、依据。       

LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组（高、低剂量组和对照组）,各25尾。高剂量组埋植促黄体生成索释放激素类似物（LHRH—A）缓释剂,剂量为300μg／kg体重,低剂量组为100μg／kg体重,对照组埋植不含LHRH—A的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素（E2、T）;解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10-30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1．055％,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末（核偏位）;低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1．858％,低剂量组为0．987％;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRH—A缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRH—A缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素（E2、T）只与卵黄生成有关,与排卵无关。     

多马胺能药物对鲇鱼促性腺激素（GtH）分泌活动的影响

以珠江流域鲇鱼（silurus asotus)为实验材料,研究了多巴胺（DA）能药物（DA及其D－2型受体拮抗物 ,DOM）对鲇鱼促性腺激素（GtH)释放的影响,结果表明,在性腺发育的各个时期,单独注射DOM（5ug/g)均不能显著提高鲇鱼血液基础GtH水平,当DOM与LHRH－A联合注射时能显著增强LHRH－A刺激GtH释放的作用;DA只能抑制GnRH诱导的GtH释放,对基础GtH释放无抑制作用,这种生殖内分泌调节方式与鲇形目的革胡子鲇（Clarias gariepinus)和大鳍Hu（Mystus macropterus)相似,而与鲤形目的鲁科（Cyrpindiae)鱼类不同。