蚯蚓GSH-Px提取与纯化的研究

以蚯蚓为原材料提取纯化了GSH-Px,通过比较超声波提取法、组织匀浆法和闪式提取法,得出闪式提取法提取效果最佳.通过正交实验优选得到蚯蚓GSH-Px的最佳闪式提取条件为:料液比1:6(m/V)、提取液pH值8.0、提取时间1min.在最佳条件下锝到的粗提液经硫酸铵沉淀、选择性酸碱变性、DEAE-cellulose和Sephadex-G100柱层析,最终得到纯化的GSH-Px,比活达到157.08 U/mg,活性回收率达到12.32％.产物在SDS-PAGE上为单一条带,其亚基分子量约为26 kD.     

蚯蚓体内超氧化物歧化酶分析

蚯蚓体内SOD含量甚高,35℃饲养的蚯蚓其SOD比活最高,因此,纯化前将蚯蚓在35℃养殖4周以上.采用硫酸铵分级沉淀和柱层析的方法,从蚯蚓体内分离得到纯的铜锌超氧化物歧化酶.每100g组织得到SOD制品总活力为17,190 U,比活7995 U/mg,回收率为35%.该酶呈淡蓝绿色,最大紫外吸收波长为270nm.该酶分子量为33,000,亚基分子量为16,500.该酶亚基含156个氨基酸残基,不含酪氨酸.N-末端为丙氨酸,等电聚焦为三条谱带,等电点分别为5.30 、5.59和6.22.     

蚯蚓葡萄糖氧化酶的提取纯化研究

本研究采用闪式提取技术提取蚯蚓葡萄糖氧化酶(GOD)。利用正交设计优化实验条件,得到最优条件为:固液比1∶4.5(g/m L),闪提时间45 s,超声时间30 min。通过酸沉淀,羧甲基纤维素CM-22离子交换层析和DEAE离子交换层析实现了GOD的纯化,回收率达到了60.8%,比活达到了2684.2 m U/mg,纯化倍数达到37.2倍。     

蚯蚓谷胱甘肽转硫酶分离纯化的初步研究

本研究利用闪提技术,通过连续两次硫酸铵沉淀与柱层析的方法从蚯蚓中提取了谷胱甘肽转硫酶(GST),对提取条件和GST性质进行了初步探究。结果表明,GST的提取条件为:p H值7.0,闪提时间30 s,料液比1∶8,连续两次硫酸铵沉淀选取最佳饱和度分别为40%和80%。提取的GST比活力达到了1.236 U/mg Pr,纯化倍数达到了14倍,收率17.7%。利用SDS-PAGE电泳,得到GST亚基分子量约为25 k Da,GST分子量约为50 k Da。GST保持稳定的p H和温度的范围分别为p H 5.0~9.0和温度0~40℃。     

羊血铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)的分离纯化

目的:对羊血进行提取SOD。方法:采用有机溶剂去除血红蛋白、热变性、丙酮沉淀、DEAE-32离子交换柱层析的方法,对羊红细胞Cu,Zn-SOD进行分离纯化。利用非变性凝胶电泳NBT活性染色鉴定SOD,SDS-PAGE测定分子量。结果:表明1 000ml羊血中得到SOD干粉1 257mg,总活力为79 453U,比活力为3 871.4U/mg。活性染色结果证明羊血SOD有2条带,表明已达到电泳纯。SDS-PAGE测得SOD亚基分子量分别为16.71kDa、15.97kDa。H2O2对羊血CuZn-SOD活性有抑制作用,通过紫外光谱扫描,羊血SOD在231nm处有最大吸收峰。     

蚯蚓谷胱甘肽还原酶分离提取的研究北大核心CSCD

本研究利用闪式提取与超声提取相结合的方法从蚯蚓中提取纯化了谷胱甘肽还原酶(GR),利用正交试验对提取条件进行了优化,并对GR的酶学性质进行了研究。结果表明,GR的最佳提取条件为:p H值7.5,料液比1∶5,闪提时间45 s,超声时间15 min。提取的GR比活力达到655.9 U/mg pr.,纯化了32.3倍,回收率为58.4%。利用SDS-PAGE电泳测得蚯蚓GR的分子量为110 k Da。GR的最适p H值和温度分别为8.0和50℃。     

蚯蚓谷胱甘肽还原酶分离提取的研究

本研究利用闪式提取与超声提取相结合的方法从蚯蚓中提取纯化了谷胱甘肽还原酶(GR),利用正交试验对提取条件进行了优化,并对GR的酶学性质进行了研究。结果表明,GR的最佳提取条件为:p H值7.5,料液比1∶5,闪提时间45 s,超声时间15 min。提取的GR比活力达到655.9 U/mg pr.,纯化了32.3倍,回收率为58.4%。利用SDS-PAGE电泳测得蚯蚓GR的分子量为110 k Da。GR的最适p H值和温度分别为8.0和50℃。     

从酵母菌中分离纯化超氧化物岐化酶

超氧化物岐化酶(SOD)由于具有消除氧自由基的功能,在医药、保健品中具有重要应用价值。我国目前SOD产品主要是从牲畜血液中提取,这个方法所用原料有限,SOD质量不稳定。80年代后,美国和日本先后开发了用发酵法生产SOD,大大地降低了生产成本。但由于SOD为胞内蛋白,因而发酵法产生SOD后提取工艺极为复杂,至少需要六步,一般经过细胞破碎、离心、盐析、透析、离子交换层析(2～3次)和凝胶层析等才能达到比活>3000u/mg。由于细胞破碎主要为机械法(如球磨和超声波法),胞内所有蛋白都释放出来,SOD比活只有10～30u/mg,因而后续SOD纯化     

猪血超氧化物歧化酶分离纯化工艺改进及其抗氧化活性研究

以新鲜猪血为原料,首次利用改进的新工艺提取分离超氧化物歧化酶,经过溶血,热变,丙酮沉淀,超滤浓缩,SephadexG-75凝胶过滤层析和DEAE-sepharose-fast flow离子交换层析纯化,冷冻干燥等步骤,得到高纯度酶,并对酶的相关性能进行研究。试验结果显示产品粗酶活性在3 000 U/mg左右,分别经SephadexG-75和DEAE-sepharose-fast flow层析纯化后,酶活分别达到5 585 U/mg和6 148 U/mg产品得率分别为13.4%和10.32%,SDS-PAGE凝胶电泳显示为单一条带达到电泳纯,其分子量在31 kD附近,其临苯三酚抗氧化活性明显。     

高产SOD大蒜悬浮细胞系的选育

筛选获得了高产 SOD大蒜悬浮细胞系 ,培养 1 8d后达到最大生物量及最大 SOD总酶活分别为2 2 .1 2 g.DW/ L及 1 0 .81× 1 0 4 U/ L,最大单位细胞酶活为 679.67U/ g.FW,SOD最大比活力可达 85 .98U/mg Pro,具有较强的 SOD合成能力。