乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2 和TLR4的激活

目的　研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 在乙型肝炎病毒逃逸机体天然免疫中的作用。方法　 PMA诱导THP-1分化成巨噬样细胞,并与乙肝表面抗原（HBsAg）共培养作比较,在LPS （TLR4配体）和pam3csk4（TLR1,2配体）的刺激下,检测细胞上清液中细胞因子IL-10,IL-12的表达及胞内IL-10,IL-12 mRNA 的含量,并利用免疫荧光观察NF-κB p65入核和Western blotting检测IκB-α蛋白降解与ERK蛋白磷酸化水平来判定TLR信号通路活化程度。结果　HBsAg的胞外处理能以剂量依赖的方式干扰pam3csk4和LPS诱导的IL-10和IL-12的产生,同时HBsAg的存在明显干扰pam3csk4和LPS诱导的NF-κB p65入核和IκB-α降解及ERK蛋白磷酸化水平。结论　HBsAg抑制TLR2和TLR4的激活。     

TLR2和TLR4在抗病毒天然免疫应答中的新作用

越来越多的研究表明TLR2和TLR4参与宿主细胞抗病毒感染的天然免疫应答,为了进一步了解TLR2和TLR4的新作用,本文重点归纳TLR2和TLR4的细胞定位、活化的信号途径和介导的细胞因子反应及其共受体,详细总结TLR2和TLR4识别的病毒及介导的抗病毒天然免疫应答,指出TLR2与TLR4互作的新方式,旨在为宿主抗病毒感染的新机制提供新思路。     

TLR9与先天性免疫反应

TLR9（Toll-likereceptor9）是一种微生物病原相关分子结构模式识别受体,TLR9能够识别CpG—ODN（胞嘧啶磷酸鸟甘-寡聚脱氧核苷酸）,使病原相关受体在先天性免疫细胞上表达,并激活下游炎性通路。研究表明,TLR9在先天性免疫反应中产生了重要作用,如脓毒血症、自身免疫性疾病、刀豆体球蛋白A介导肝炎性肝脏损伤、炎性泡沫细胞形成、缺血再灌注损伤等,并且与多种致病因子相关联,如肝x受体、甲酰多肽受体、线粒体DNA等。     

牦牛不同组织TLR3、TLR5 mRNA转录水平相对定量研究

参考牦牛TLRs基因序列设计荧光定量PCR特异性引物,建立检测牦牛TLRs相对表达量的荧光定量PCR方法,分析TLR3及TLR5基因在牦牛不同器官组织中的转录水平。结果显示两基因具有不同的表达谱及表达量,其中TLR3基因除在乳腺组织外,在其它组织器官中均有转录,其中在心、大肠、胃和肌肉组织中表达量较高;TLR5基因则在心、肺、大肠、小肠、胃、肌肉、卵巢组织中具有较高的表达量。该试验结果表明,TLRs在不同组织器官转录水平差异较大,可能与其对病原体的识别有关;同一个基因在不同组织中存在差异性,这可能与基因作用机理相关。     

TLR9的特性及其介导的TLR9/CpG-DNA免疫信号通路

TLRs在天然免疫应答中发挥着重要作用,构成了机体抗感染的第一道防线,是沟通天然免疫和获得性免疫的桥梁。其中TLR9已经被证实能够识别细菌DNA中免疫刺激序列CpG,从而激活哺乳动物细胞的天然免疫机制,这一发现具有重要的生物学意义与应用价值。它不仅进一步推进了外源DNA激活哺乳动物抗感染天然免疫的进一步研究,更为CpG-DNA应用于抗感染、肿瘤和免疫缺陷疾病等的治疗提供新的思路,为改进DNA疫苗效果提供非常有益的帮助。     

TLR与足细胞损伤

TLRs（Toll—likereceptors）是一类重要的模式识别受体家族,主要调节灭然免疫反应。研究发现在。肾脏固有细胞及间质细胞都有TLR表达,其介导的炎性反应参与了许多肾脏疾病的发生。多种足细胞标志蛋白的发现加快了足细胞表面分子的研究进程。目前已发现足细胞表面有TLR的表达,且TLR的表达与足细胞的损伤有关。     

TLR家族及其功能研究进展

由于TLR能识别病原体,从而在病原体入侵机体的早期即启动天然免疫,提示其在抗感染中的重要作用。至今已发现的TLR家族中的TLR1～10,其中TLR～5的结构已经被确定,而对于TLR的功能,现今对TLR在细菌内毒素(LPS)作用下引起的免疫毒理学作用的研究较为深入,提示TLR对由病原体引起的免疫病理损伤有重要的作用。随着研究的深入,发现TLR在促进细胞因子的合成与释放,引发炎症反应;促进免疫细胞膜表面表达相关免疫分子,促进免疫细胞的成熟和功能化;抗病毒感染;调节免疫应答;诱导一氧化氮(NO)依赖性杀菌活性;介导全身免疫病理损伤以及其家族间的协同作用影响免疫应答等方面起到重要的作用。     

Microglia Induce Neurotoxic IL-17+ γδ T Cells Dependent on TLR2, TLR4, and TLR9 Activation

Background

Interleukin-17 (IL-17) acts as a key regulator in central nervous system (CNS) inflammation. γδ T cells are an important innate source of IL-17. Both IL-17+ γδ T cells and microglia, the major resident immune cells of the brain, are involved in various CNS disorders such as multiple sclerosis and stroke. Also, activation of Toll-like receptor (TLR) signaling pathways contributes to CNS damage. However, the mechanisms underlying the regulation and interaction of these cellular and molecular components remain unclear.

Objective

In this study, we investigated the crosstalk between γδ T cells and microglia activated by TLRs in the context of neuronal damage. To this end, co-cultures of IL-17+ γδ T cells, neurons, and microglia were analyzed by immunocytochemistry, flow cytometry, ELISA and multiplex immunoassays.

Results

We report here that IL-17+ γδ T cells but not naïve γδ T cells induce a dose- and time-dependent decrease of neuronal viability in vitro. While direct stimulation of γδ T cells with various TLR ligands did not result in up-regulation of CD69, CD25, or in IL-17 secretion, supernatants of microglia stimulated by ligands specific for TLR2, TLR4, TLR7, or TLR9 induced activation of γδ T cells through IL-1β and IL-23, as indicated by up-regulation of CD69 and CD25 and by secretion of vast amounts of IL-17. This effect was dependent on the TLR adaptor myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88) expressed by both γδ T cells and microglia, but did not require the expression of TLRs by γδ T cells. Similarly to cytokine-primed IL-17+ γδ T cells, IL-17+ γδ T cells induced by supernatants derived from TLR-activated microglia also caused neurotoxicity in vitro. While these neurotoxic effects required stimulation of TLR2, TLR4, or TLR9 in microglia, neuronal injury mediated by bone marrow-derived macrophages did not require TLR signaling. Neurotoxicity mediated by IL-17+ γδ T cells required a direct cell-cell contact between T cells and neurons.

Conclusion

Taken together, these results point to a crucial role for microglia activated through TLRs in polarization of γδ T cells towards neurotoxic IL-17+ γδ T cells.     

TLR4及其作用的研究进展

Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)因其积极的研究成果而成为近年来广受关注的一种病原体识别受体,TLRs分布相对比较广泛,不但在小肠上皮、呼吸上皮细胞表达,同时也在血管内皮细胞、树突状细胞[1]、大鼠脾及心肌细胞[2]等细胞中表达.研究证实,它属于模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs),病原相关分子模式(pathogen-associated molecule pattern,PAMPs)可被其辨别,然后引发一系列的信号转导,TLRs 是备受关注的一种PRRs.Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)是TLRs家族中极为重要的成员,是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体,在天然免疫反应中扮演着关键性作用.细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为一类受体,主要作用是介导信号跨膜转导,尤其对革兰氏阴性菌所引起的感染性炎症起着极为关键的作用.由于近年来对TLR4介导的信号转导及TLR4与疾病的关系研究成为热点,本文就TLR4的信号转导、TLR4与LPS的关系及TLR4信号通路调节进行综述如下.     

外周血TLR2和TLR9在小儿复发性单纯疱疹中的作用

目的:研究外周血Toll受体2(TLR2)和Toll受体9(TLR9)在小儿复发性单纯疱疹(RHS)中的作用。方法:选择从2014年1月至2016年12月在我院就诊的RHS患儿46例纳入本次研究,将其记为观察组。另选同期在我院进行健康体检的儿童45例作为对照组。对比两组外周血TLR2及TLR9水平,白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)及C反应蛋白(CRP)水平,采用Spearman相关性分析患儿外周血TLR2及TLR9水平与其炎症指标的相关性。结果:观察组外周血TLR2、TLR9和TLR2及TLR9双表达的水平均明显高于对照组(P0.05)。观察组的IL-2水平较对照组降低(P0.05),IL-4及CRP水平较对照组升高(P0.05)。Spearman相关性分析显示,患儿外周血TLR2及TLR9水平与其IL-2呈负相关(P0.05),与IL-4和CRP呈正相关(P0.05)。结论:TLR2和TLR9在RHS患儿外周血中均具有较高表达,且与机体炎症因子IL-2、IL-4及CRP间具有紧密联系,值得临床重视。     

Lymphotoxin β receptor activation on macrophages induces cross-tolerance to TLR4 and TLR9 ligands

Our previous studies indicated that lymphotoxin β receptor (LTβR) activation controls and downregulates inflammatory reactions. In this study, we report that LTβR activation on primary mouse macrophages results in induction of tripartite motif containing (TRIM) 30α, which negatively regulates NF-κB activation induced by TLR signaling. LTβR activation results in a downregulation of proinflammatory cytokine and mediator expression upon TLR restimulation, demonstrating that LTβR signaling is involved in the induction of TLR cross-tolerance. Specific knockdown experiments using TRIM30α-specific small interfering RNA abolished the LTβR-dependent induction of TRIM30α and LTβR-mediated TLR cross-tolerance. Concordantly, LTβR activation on bone marrow-derived macrophages induced cross-tolerance to TLR4 and TLR9 ligands in vitro. Furthermore, we have generated cell type-specific LTβR-deficient mice with ablation of LTβR expression on macrophages/neutrophils (LTβR(flox/flox) × LysM-Cre). In bone marrow-derived macrophages derived from these mice LTβR-induced cross-tolerance to TLR4 and TLR9 ligands was impaired. Additionally, mice with a conditional ablation of LTβR expression on macrophages (LTβR(flox/flox) × LysM-Cre) are resistant to LTβR-induced TLR4 tolerance in vivo. Collectively, our data indicate that LTβR activation on macrophages by T cell-derived lymphotoxin α(1)β(2) controls proinflammatory responses by activation of a TRIM30α-controlled, counterregulatory signaling pathway to protect against exacerbating inflammatory reactions.     

TLR9介导CpG激活免疫细胞

机体的天然免疫 (ｉｎｎａｔｅｉｍｍｎｕｎｉｔｙ)在抵抗微生物感染中发挥重要作用。然而机体天然 (非特异性 )免疫系统识别病原微生物的机制尚未完全阐明。近来关于Ｔｏｌｌ样受体(ＴＬＲ)的研究表明 :病原微生物通过呈现多种具有保守序列的分子格局 (ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔ ｔｅｒｎ)被机体免疫细胞表面的格局识别受体(ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｐａｔｔｅｒｎ)识别 ,从而诱导天然免疫应答。ＴＬＲ家族是在进化中由昆虫到人类均保守的格局识别受体[1] 。而新近发现的ＴＬＲ9可能是哺乳类细胞识别细菌ＤＮＡ中免疫刺激序…     

Can MMTV exploit TLR4?

The recognition of microbial pathogens based on their molecular patterns is essential for host defense. Recently, Toll-like receptors have been shown not only to recognize viruses as well as bacteria and fungi, but also to trigger an efficient immune response. A recent publication proposed that the retrovirus mouse mammary tumor virus exploits the pattern-recognition receptor Toll-like receptor 4 to achieve more efficient infection.     

TLR——天然免疫中的特异性受体

Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是天然免疫系统中特异的I-型跨膜受体及病原模式识别受体,在急性炎症反应、细胞信号转导和细胞凋亡中起重要作用。其结构、分布(基因、细胞、组织、种群层次)及相应配基都具有特异性;TLR的信号通路包括髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)依赖途径和MyD88非依赖途径。TLR在免疫防御上不仅有其积极的一面,也有其消极的一面;它的发现,无论在理论上还是在应用上都有着开创性的意义。     

TLR2和TLR4对新生儿免疫细胞中Th1/Th2细胞因子的影响

为了探讨TLR2和TLR4对新生儿免疫细胞中Th1/Th2细胞因子的影响,本研究采用LPS和PGN刺激新生儿脐带血单个核细胞、成人外周血单个核细胞和人肥大细胞,并用特异性信号分子抑制剂PD98059处理单核细胞和肥大细胞,测定不同处理组ERK的磷酸化强度、IL-6、IL-12、IL-13和RANTES细胞因子水平以及HMC-1细胞脱颗粒情况。研究显示,经过LPS或PGN刺激后,单核细胞和肥大细胞中ERK的磷酸化强度与对照组相比均显著升高(p0.05);通过LPS和PGN共同刺激后,脐带血单个核细胞中ERK的磷酸化高于单个配体刺激。在添加了ERK特异性抑制剂PD98059后,LPS和PGN共刺激的脐带血单个核细胞中IL-6、IL-12和IL-13浓度显著下降,而RANTES未显示明显抑制。经PGN刺激后HMC-1细胞的β-hexosaminidase释放率高于LPS,并且LPS+PGN共刺激的β-hexosaminidase释放率高于单一配体刺激。本研究表明,TLR2/TLR4与LPS/PGN结合后,通过激活ERK信号通路来调节新生儿免疫细胞中Th1/Th2细胞因子,LPS和PGN共刺激对调节新生儿免疫细胞中IL-6、IL-12和IL-13细胞因子具有协同作用。     

TLR3和TLR4基因多态性与EV71感染手足口病严重性及易感性的关系研究

手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)是5岁以下婴幼儿常见的病毒性肠道传染病,该病主要由人肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)型及柯萨奇A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)引起,但关于TLR3、TLR4基因多态性与EV71感染手足口病的报道较少。为探讨EV71感染手足口病患儿TLR3和TLR4基因多态性与EV71感染手足口病严重性及易感性的关系,本研究选择2016年8月至2017年8月就诊于安徽医科大学第一附属医院的EV71感染手足口病患儿166例,其中重症组76例,轻症组90例,并选择同期来院体检的健康者120例作为对照组。收集患者入院时的年龄、性别、发热天数等基线资料,采集血液检测白细胞计数(White blood cell count,WBC)、丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Glutamate transaminase,AST)、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清C反应蛋白(C reactive protein,CRP)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)水平;分离外周血单个核细胞提取DNA,琼脂糖凝胶电泳检测DNA情况;聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增TLR3c.1377C/T和TLR4-896A/G,限制性内切酶Tap I(TthHB8 I)、Nco I分别酶切TLR3、TLR4 PCR扩增产物,凝胶成像系统记录实验结果,对扩增产物进行测序,分析其基因多态性结果。结果显示,对照组与EV71感染组TLR3c.1377C/T位点的基因型分布与C、T等位基因频率均无显著统计学意义(P0.05);EV71感染组中重症组TT基因型较轻症组显著升高(P0.05);重症组T等位基因频率显著高于轻症组(P0.05),C等位基因频率显著低于轻症组(P0.05);EV71感染组中,TLR3c.1377C/T位点不同基因型患儿在年龄、性别及ALT、AST、CKMB水平上无显著差异(P0.05);TLR3c.1377C/T位点TT型患儿的发热时间及WBC、CRP水平显著高于CT和CC型,CT型患儿的发热时间及WBC、CRP水平显著高于CC型(P0.05);CC型患儿的IFN-γ水平显著高于CT和TT型(P0.05);TLR4-896A/G基因电泳条带为140bp的特异性扩增产物,为野生型Asp/Asp基因型,对照组和EV71感染组均未出现A→G的突变。本研究得出结论,TLR3c.1377C/T位点有CC、TT、CT三个基因型,且携带T等位基因EV71感染手足口病患儿进展为重症的风险较高;TLR4-896A/G基因无突变,与EV71感染手足口病患儿疾病严重性和易感性无关。     

内毒素耐受性与TLR4信号通路

内毒素(lipopolysaccharide,LPS)耐受性普遍存在,并与其他病原微生物致病因子(LAM、STF等)存在交叉耐受性。不同种类LPS产生耐受性的可能性与机制不同。TLR4作为LPS靶细胞膜上的跨膜受体,主要介导LPS信号的跨膜转导,TLR4结构与功能的改变,以及TLR4信号通路中各个环节(MD2、MyD88、IRAK、IκB、NF—κB、炎症因子)的功能缺陷,都将导致LPS耐受性的产生。     

TLR4信号转导通路在肿瘤中的作用

慢性炎症与恶性肿瘤密切相关,Toll样受体4（TLR4）在肿瘤中的广泛表达提示其在慢性炎症致瘤机制中发挥重要作用。活化肿瘤细胞TLR4不仅促进肿瘤的生成和转移,而且参与肿瘤的免疫逃逸。另一方面,免疫佐剂又通过激活免疫细胞的TLR4信号产生抗肿瘤免疫。因此,TLR4在肿瘤中起着双刃剑的作用。     

饲料中维生素D3的添加水平对黄颡鱼幼鱼生长和Toll样受体TLR18、TLR19和TLR21的影响

为了探讨饲料中维生素D₃添加水平对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)生长和Toll样受体的影响, 研究设计了5个不同浓度梯度的维生素D₃饲料(1120、2260、3950、8030和16600 IU/kg), 对体重为(5.0±0.2) g的黄颡鱼进行了为期12周的生长实验, 并在生长实验结束后进行鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)攻毒72h。于攻毒前(0)和攻毒后(72h)采样, 每个饲料组分别取6尾鱼的脾脏、头肾、肝脏和前肠四个组织, 检测不同浓度维生素D₃处理对攻毒前和攻毒后TLR18、TLR19和TLR21基因表达量的影响。同时另取6条新鲜黄颡鱼的肌肉、头肾、肾脏、皮肤、脑、鳃、脾脏、胃上皮、小肠和肝脏, 检测TLR18、TLR19和TLR21基因在黄颡鱼中的组织分布。结果表明: 不同的维生素D₃添加水平会显著影响黄颡鱼幼鱼的生长性能; TLR18、TLR19和TLR21基因在所检测的组织中均有表达, 但在脾脏中表达量最高; 饲料中不同维生素D₃含量在攻毒前后均会显著影响TLR18、TLR19和TLR21在头肾、脾脏、肝脏和前肠中的表达, 攻毒后基因的表达显著高于攻毒前; TLR18、TLR19和TLR21在不同组织中的表达和饲料中维生素D₃的浓度相关, 研究结果表明饲料中添加合适剂量的维生素D₃, 可以促进相关免疫基因的表达, 从而增强黄颡鱼对病原微生物的抵抗力。     

新疆地方绵羊TLR9基因多态性分析

通过分析TLR9基因的多态性,探究新疆不同绵羊品种抗病力的分子机制。以塔什库尔干羊、和田羊和多浪羊共107个样本为研究对象,采用PCR、测序法和生物信息学方法分析TLR9基因的SNP及氨基酸差异。发现7个SNP,其中3个位点为同义突变,4个位点为非同义突变,确定为12个等位基因,其中新发现6个等位基因。首次发现氨基酸G437R的突变。6个等位基因对应的TLR9蛋白3-D结构存在差异,可能影响机体对PAMP的识别。绵羊TLR9基因外显子2具有较高的多态性,导致LRR空间结构改变,进而影响机体对疾病的感受性。本研究为新疆南疆地区绵羊抗病育种提供基础数据。