放线菌素生物合成研究进展

放线菌素D是人类发现的第一个具有抗肿瘤活性的抗生素,但由于毒性太大,因而被限制用于几种恶性肿瘤治疗。本文概述了天然放线菌素的结构特点,重点介绍了放线菌素生物合成过程:犬尿氨酸途径,非核糖体肽合成途径和吩恶嗪酮发色团形成。对放线菌素生物合成途径的探索非常有利于开发新颖的低毒性的结构类似物。     

放线菌素与DNA分子结合的三维模型

放线菌素D是从土壤微生物获得的一种抗菌素,它对某些癌症有特殊疗效,但由于毒性较大,限制了它的广泛应用。分子生物学家对它感兴趣的原因是它能和DNA分子的双螺旋结构紧密结合,抑制蛋白质合成过程中从DNA分子上转录mRNA的步骤,并阻止tRNA和核糖体RNA的合成,从而使DNA分子上携带的遗传信息不能在蛋白质合成中体现,因此放线菌素D如何与DNA结合就成为长时间以来探讨的研究课     

放线菌素C对烟草花叶病毒增殖的抑制作用

已经报导过,在动物和细菌细胞中放线菌素可与DNA强烈结合,并抑制了取决于DNA的RNA的合成。本试验的结果证明,放线菌素C抑制烟草(Nicottana tabacum)正常叶组织中RNA的合成。在30微克／毫升的放线菌素c中培养时,P北向RNA中的参入降低50％。30一60微克／毫升的放线菌素c显著的抑制烟草花叶病毒在寄主体内的合成,病毒浓度降低到对照的28—64％。放线苗秦c对TMV合成的抑制作用可因外加小牛胸腺DNA而抵消     

放线菌素D对小麦花粉胚胎发生的影响

在小麦花药培养初期,用低浓度(10微克/毫升)的放线菌素D处理花药1—2天,可以显著地促进花粉胚胎的发生,花粉诱导物(愈伤组织和胚状体)的产量比对照增加1.13倍。细胞学的观察表明,花粉细胞的发育变慢,较长时间地滞留在单核时期,细胞分裂推迟,但分裂开始后,非配子体途径发育的细胞显著增多。     

放线菌素D诱导植物离体细胞染色体变异

用放线菌素D处理辣椒愈伤组织,明显抑制愈伤组织细胞的离体增殖,并诱发染色体数量与结构变异。细胞核DNA荧光染色测定,表明放线菌素D干扰了DNA合成复制,是导致离体细胞染色体变异的直接原因。     

抗肿瘤药物的研究——Ⅻ.放线菌素K对Ehrlich腹水癌细胞核酸含量及P~(32)渗入的影响

小白鼠接种Ehrlich腹水癌細胞后第8天,腹腔注射生理盐水(对照組)或放线菌素K,6小时后解剖,研究放綫菌素K对癌細胞核酸等含量的影响。当放綫菌素K的剂量为50微克/公斤体重(治疗剂量)时,6小时后每毫克干重癌細胞中酸溶磷、脂溶磷、RNA和DNA的含量都沒有变化。增高剂量为400微克/公斤时,每毫克干重癌細胞中酸溶磷、无机磷、脂溶磷、核蛋白氮以及DNA的含量仍沒有明显改变,但RNA含量則降低。以細胞为单位作比較,結果也一致。若于接种后第3天开始給药,剂量为50微克/公斤/天,共5天,停药后6小时解剖。每单位細胞的干重稍有減低,但經t测驗比較,相差不显著。每单位癌細胞中酸溶磷、脂溶磷和DNA沒有明显影响,RNA則下降更甚而核蛋白氮也开始減少。若以干重为单位比較,RNA仍有很大降低,核蛋白氮相差不明显而DNA反有显著升高。于一次注射药物后2小时,皮下注射Na_2HP~(32)O_41微居里/克体重,再隔4小时后解剖,比較对照組和給药組癌細胞中酸溶磷、无机磷和RNA的比放射強度(脉冲数/分钟/微克磷)。发現給药組酸溶磷和无机磷的比放射強度,不論剂量为50或400微克/公斤,都不变。RNA的比放射強度則下降:50微克/公斤組降低40%,400微克/公斤組降低52%。     

微波诱变结合抗性突变筛选放线菌素D高产菌株

采用微波结合链霉素抗性筛选法选育放线菌素D的高产菌株。通过考察链霉素对Streptomyces rubiginosohelvolus FIM-N31菌株孢子生长情况的影响确定链霉素致死浓度,出发菌株FIM-N31的孢子经微波辐照处理后,涂布在含链霉素致死浓度（50 μg/mL）的培养基平板上培养,获得了大量的链霉素抗性基因突变株。摇瓶发酵筛选突变株,结果获得一株遗传性状稳定的放线菌素D高产菌Str186,其产放线菌素D的能力比出发菌株提高了8倍以上。     

用放线菌素D法在植物染色体上显示高分辨带

本文探索了植物染色体高分辨显带中的放线菌素 D(actinomycin D 简称 AM D)法,并报道了该方法在一粒小麦、圆锥小麦、大麦、玉米、黑麦等植物染色体上进行高分辨显带的结果。AMD 法的流程主要包括:放线菌素 D 和秋水仙素共同预处理植物种子根尖,Ohnuki′s液低渗,纤维素酶和果胶酶酶解,3:1的甲醇冰乙酸固定液固定,涂片法制片和 Wright-Giemsa 染色。该方法在多数实验植物的染色体上均显示出丰富的高分辨带纹。在早中期,多数染色体可显示出10条左右的清晰带纹。文章还分析了植物染色体较难显示高分辨带或 G带的原因,并讨论了放线菌素 D 在显带中的应用。     

放线菌素23-21微生物检定法及HPLC法比较

采用微生物检定法测定放线菌素２３－２１的抗菌活性,检定菌为枯草芽孢杆菌。当放线菌素２３－２１的浓度为０．９１～４．３７μｇ／ｍｌ时,其抑菌圈直径与反应剂量有线性关系。经生物学统计分析,实验结果可靠。并与高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行对照检测,实验结果基本吻合。     

聚合物纳米微球分离纯化放线菌素D的研究（英文）

本实验考察从链霉菌发酵产生的放线菌素D粗提物中分离制备高纯度放线菌素D的工艺,以聚合物纳米微球为固相载体,对聚合物纳米微球型号、洗脱条件进行优化。最终确立放线菌素D的分离纯化工艺为:采用PS40-300(以聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物为基质,粒径40μm,孔径300)纳米微球作为层析填料;以链霉菌发酵产生的放线菌素D粗提物为上样样品,用适量95%乙醇(V/V)充分溶解,上样量为0.5 g/100 m L,控制洗脱速度为5.0 m L/min,以65%乙醇水(V/V)洗脱,收集纯度95%以上的洗脱液,真空浓缩得到高纯度的放线菌素D。结果表明该分离纯化工艺,纯度与收率都较高,流程简单、可行,为该产品产业化开发奠定基础。     

放线菌素D对烟草花叶病毒RNA在离体烟叶中复制的影响

本文报道放线菌素D(AMD)在离体烟叶中对烟草花叶病毒(TMV)的增殖及其核酸(TMV-RNA)复制的影响。按每克叶片用40μgAMD处理,能抑制70％以上叶组织总RNA的合成,在此剂量下AMD对病毒增殖及其核酸复制的影响与用药的时间有密切关系。在接种病毒前5小时或于接种同时给药对病毒增殖和病毒RNA复制都有强烈的抑制作用,可抑制90％以上;而接种后8小时用药就不再表现抑制作用了;接种后24小时用药不但不表现抑制作用,相反对病毒增殖和TMV—RNA的复制都有一定的刺激作用。AMD对TMV增殖和对TMV-RNA复制的影响完全一致。     

HSP70在放线菌素D所致肺腺癌细胞增殖抑制和凋亡中的作用

为探讨热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)在肺腺癌中的表达及其作用,首先采用免疫印迹检测经临床支纤镜确诊并行手术切除的肺腺癌组织标本中HSP70的表达,结果显示在癌旁正常组织中HSP70的表达量显著低于其在癌组织中的表达量.其次,采用HSP70反义寡核苷酸阻断A549细胞中HSP70表达后,经MTT和Hoechst33258检测发现,HSP70下调能显著促进放线菌素D(actinomycinD,ActD)所致的A549细胞增殖抑制及凋亡,反义寡核苷酸处理组与正义或随机寡核苷酸处理组比较P值均小于0.05.进一步构建HSP70真核重组质粒并瞬时转染A549细胞后,能显著增加A549细胞中HSP70表达,同时采用MTT和流式细胞术及基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测发现,HSP70过表达能显著抵消ActD所致细胞增殖抑制及凋亡,转染HSP70重组质粒组与转染空载体组相比P值小于0.05.上述结果提示,HSP70在肺腺癌组织中高表达,高表达的HSP70在降低肺腺癌细胞对ActD的敏感性及促进癌细胞增殖与抑制凋亡等方面发挥了重要作用.     

四倍体刺槐无性系K2和K3的组织培养

1997年,北京林业大学从韩国引进了具有速生和饲料用途的刺槐(Robinia pseudoacacia L.)四倍体优良无性系,目前已在全国各省区试推广.与普通刺槐相比,四倍体刺槐具有叶大、速生等优点,且较普通刺槐有更强的适应性,耐干旱、贫瘠、烟尘及盐碱能力强,成林快,是水土保持、防风固沙及退耕还林的良好树种,可作为西北地区造林的先锋树种.     

Ernst Küster

Ohne Zusammenfassung     

hnRNP K的结构及功能

核内不均一性核糖核蛋白K（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K）最早在hnRNA加工过程中被发现,属于hnRNP家族的一员。研究表明hnRNPK的主要功能结构为3个引导DNA—RNA连接的KH域和一个独特的KI域。hnRNP K不仅能够通过依赖CT元件的途径或不依赖CT元件的途径在转录水平上对基因表达进行调控,还能够通过自身的磷酸化,改变mRNA的翻译效率,以及调控基因翻译及转导胞内信号。此外,hnRNP K与肿瘤发生和转移的关系也是近年来的研究热点。hnRNP K被发现在许多肿瘤组织中高表达,主要通过调控与细胞增殖有关的基因表达而影响肿瘤的发生发展,同时它与肿瘤细胞的扩散转移也有关。