表达内皮抑素的rCHO细胞的微囊化培养

微囊化重组基因细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤基因治疗方法,如果将此技术应用到临床研究,就需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊。种子细胞是生物微胶囊治疗作用的执行者, 是构建微囊微反应器的基本元素。如何获得大量高活性的种子细胞已经成为规模化制备生物微胶囊所面临的最关键的限制因素。本实验考察了搅拌式生物反应器内扩增的重组CHO细胞进行包囊及微囊化细胞在生物反应器内规模化培养的可行性。实验结果显示:重组CHO细胞在生物反应器内可以快速生长,并且对数期细胞包囊,微囊化细胞活性良好。制备的微囊化细胞可以在生物反应器内培养,与培养板培养比较细胞生长较快、内皮抑素表达量较高。应用生物反应器培养技术能够在体外快速、大量扩增重组CHO细胞,满足微囊化细胞制备对种子细胞量与质的要求,微囊化细胞可以在生物反应器内培养。     

体外培养和冷冻保存对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响

微囊化基因工程细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤治疗方法,如果将此技术应用到临床研究,就需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊。体外培养和冷冻保存是生物微胶囊制备过程中两个重要的环节,因此需要考察体外培养和冷冻保存对微囊化重组基因细胞生长和蛋白表达的影响。以重组CHO细胞为模型,考察了体外培养时间和冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长和内皮抑素表达的影响及体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存的影响。结果表明:体外培养时间对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性具有较大的影响,体外不培养和培养4d的微囊化细胞在小鼠腹腔内生长良好、内皮抑素表达量高,并且微囊稳定性好,而体外培养8d的微囊化细胞在移植后的第26天破裂。体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存也具有较大的影响,体外培养4d和8d的微囊化细胞在液氮中冷冻保存40d,复苏后细胞生长良好、内皮抑素表达量高,而冻存前未经过体外培养的微囊化细胞,复苏后细胞几乎全部死亡。综上所述,生物微胶囊在体外比较适宜的培养时间为4d。并且冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性没有显著的影响。     

粒径对微胶囊成膜及微囊化细胞生长代谢的影响

目的:考察粒径对微胶囊强度及微囊化细胞生长代谢的影响,为制备性能优良的生物微胶囊提供实验依据。方法:制备不同粒径的凝胶珠,测定其在相同成膜条件下的球磨强度,进而用台盘蓝拒染法测定微囊化细胞的增殖及活率。结果:小粒径的微胶囊具有更厚的微囊膜及更高的球磨强度,另外小粒径微胶囊培养细胞能够获得更多的细胞数(350μm,570μm和900μm微囊内的细胞数量分别为:5.67×107、4.71×107和3.89×107/mL microcapsule,P<0.05)及更高的细胞活率(350μm、570μm和900μm微胶囊的细胞活率分别为:83.70%、67.64%和75.73%,P<0.05)。结论:粒径能影响微胶囊的强度及微囊化细胞的生长、代谢。     

微囊化重组CHO细胞制备和培养条件的优化

微囊化重组基因细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤基因治疗方法,然而由于目前微囊化细胞规模化制备和培养技术还不成熟,阻碍了其在临床治疗中的推广与应用。以重组CHO细胞为模型,考察了不同的微囊制备和培养条件对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响。实验表明,种子细胞所处的生长阶段和细胞接种密度对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响较大,对数生长期的细胞进行包囊并且细胞接种密度为1×106~2×106cells/mL微囊时微囊内细胞生长良好、内皮抑素表达量高。微囊制备时间对细胞活性和内皮抑素表达也有较大的影响,制备时间延长对细胞的损伤增大,因此制备时间应控制在5h以内。生物微胶囊在制备过程中会造成细胞损伤,而体外培养是恢复细胞活性的良好方法,在培养过程中微囊接种量为5%时对细胞生长和内皮抑素表达有利。     

微囊化干细胞及其应用研究进展

干细胞极强的自我更新能力和多向分化潜能使其可以成为绝佳的种子细胞来源,用于各种疑难疾病的治疗。微胶囊不仅可以为细胞提供三维生长微环境,而且具有良好的免疫隔离性能和生物相容性。微囊化干细胞技术为干细胞大规模、高活性体外培养及长期保存提供了新的技术支持,为细胞移植疗法开辟了新途径。以下首先简述了微囊化技术的发展情况,然后介绍了目前用于微囊化干细胞的材料、制备方法及其免疫隔离作用,重点阐述了近年来微囊化各种不同类型干细胞的研究和应用进展。最后,提出目前微胶囊化干细胞的问题所在并对此技术进行展望。     

保加利亚乳杆菌微胶囊化工艺研究

目的制备保加利亚乳杆菌微胶囊,提高菌株的酸、热耐受性及降低菌体的分离成本。方法以保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)为研究对象,海藻酸钠(SA)为壳材、CaCl2为固化剂,制备保加利亚乳杆菌微胶囊;包埋率、颗粒平均化程度、机械强度等为考核指标,研究保加利亚乳杆菌微胶囊化的工艺。结果当海藻酸钠浓度为0.75%、CaCl2浓度为3%、电压为600V、泵速为1.96mL/min、震动频率为80Hz时,微胶囊化包埋效果最佳,经固定化后的菌微胶囊保持了良好的保加利亚乳杆菌的活性,微囊化保加利亚乳杆菌经过2次连续发酵后的产酸量分别达到59.4g/L和55.8g/L。结论本研究为工业化生产乳酸提供了一条具有经济价值的途径。     

乳酸菌微囊化工艺的初步研究

目的 对保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的微囊化工艺进行摸索。方法 采用喷雾干燥方法。结果 以Ｃ胶（１３．３ｍｌ）＋Ｂ胶（２０ｇ）微囊化对乳酸菌的保护效果较好,菌体存活率达３４．６％,而Ｃ胶（７５ｍｌ）＋Ａ胶（５０ｇ）微囊化对乳酸菌的保护效果最佳,菌体存活率７８％,冷冻干燥工艺结合微囊化技术,可获得较高存活率的乳酸菌活性。结论 微囊化技术可提高菌体的抗热性。     

微囊化杂交瘤细胞培养的基础应用研究

本文探讨了海藻酸钠的结构组分对微囊强度的重要作用。提出了微囊化批量生产中估算活细胞的方法以及影响满囊比的主要因素等a制备微囊的成功率达到95％以上,满载率可达95％。微囊化杂交瘤细胞在静态培养6—10天后,细胞浓度为8．8×10⁶～2．1×10⁷ceIl／ml微囊。单抗浓度为379μg／m1微囊。微囊化产物经SDS电泳呈现一条或两条蛋白带,表明单抗纯度较高。     

双歧联菌株微胶囊制剂的改进

目的：提高微胶囊制剂的安全性。方法：采用ESM2为囊材,代替原用的ESM1。同时以95％乙醇代替丙酮作为囊材溶剂。结果：经实验确定了ESM2微囊化的最佳浓度为8％,并进一步确定了复合囊材中各种辅料的添加量以及微囊化操作条件。结论：在上述优化条件制备的双歧联菌株微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性。     

茶多酚微胶囊化工艺及其缓释研究

本文利用单因素与正交实验,对影响茶多酚微胶囊化包埋效果的因素进行了分析,确定了茶多酚微胶囊化的最佳工艺条件。结果表明:茶多酚微囊化包埋的最佳工艺条件为:采用3%的海藻酸钠(海藻酸钠:茶多酚=3:1),1%的壳聚糖和4%的氯化钙体系,用一步法可制备茶多酚微胶囊,该微胶囊在体外模拟胃、肠液中约2 h中达到茶多酚释放峰值,表现出较好的缓释效果。     

微囊化K562细胞生长周期及代谢特性的研究

以K562细胞为模型,分别进行微囊化和游离培养,运用流式细胞术考察两种培养体系下细胞周期和生长代谢变化;建立数学模型,模拟了两种培养体系下细胞的生长活性和代谢特性。实验发现：微囊化培养过程中的K562细胞处于DNA合成期（S期）的百分含量显著高于游离培养,并且细胞保持较高的增殖活性。模型计算表明,所建模型动力学参数能够很好地描述微囊化和游离两种培养体系下细胞的代谢情况;对细胞活性的理论计算表明,微囊化的细胞具有较高的增殖和代谢活性,同时细胞能够较长时间保持此活性;模型参数表明,两种培养体系下,葡萄糖对细胞生长的影响无显著差别 (k^Free_L≈k^APA_L),乳酸对游离培养细胞的生长具有明显抑制作用,但对微囊化培养细胞抑制作用较小(kFreeL>≈kAPAL)。     

微囊化细胞培养过程的物质传递机理和细胞生长特性

综述了用于描述微囊化细胞培养过程中物质传递机理和细胞生长特性的数学模型,分析了这些模型在应用于微囊化细胞培养系统时所存在的问题,为建立能精确描述微囊化细胞培养过程中的物质传递机理和细胞生长特性的数学模型提供必要的参考,以有效推动微囊化技术在生物医学工程领域的应用。     

微囊化不可繁殖型尿酸氧化酶工程菌的制备

目的：制备微囊化不可繁殖型尿酸氧化酶工程菌,以期研制一种降低血尿酸的口服药物,用于治疗高尿酸血症及痛风。方法：用甲醛灭活尿酸氧化酶工程菌,使其不可繁殖并保持酶活性;以壳聚糖和海藻酸钠为囊材,采用气流喷雾法制备微囊;用试剂盒体外评价微囊降解尿酸的效果。结果：经甲醛灭活后,工程菌繁殖活性丧失,其降解尿酸的能力降低85%;制备的微囊粒径呈正态分布于20～220μm,包封率达到99%以上;体外试验表明其具有降尿酸活性。结论：获得了具有降解尿酸活性的微囊化不可繁殖型工程菌。     

基于海藻酸钠羟基改性的MPEG原位共价修饰微胶囊及抗蛋白性能

目的:通过对海藻酸钠链段羟基位点改性制备甲氧基聚乙二醇(MPEG)原位共价修饰的海藻酸钠/壳聚糖(AC)微胶囊,在保证MPEG修饰微胶囊机械强度不受影响的基础上,有效提高表面MPEG修饰密度,实现兼具良好机械稳定性及抗蛋白性能的微胶囊制备方法。方法:利用溴化氰对海藻酸钠羟基进行活化并将末端氨基的点击化学linker(BAT)接枝在主链上进而制备MPEG原位共价修饰微囊A_(B(OH))CP_N,用球磨法表征微囊机械强度,用Ig G和Fgn为模型考察微囊表面抗蛋白吸附性能,以L929细胞在其二维模拟平板膜上的黏附情况作为衡量指标,考察MPEG修饰微胶囊表面细胞粘附情况,并最终通过体内移植考察MPEG修饰微囊的生物相容性。结果:基于海藻酸钠羟基位点的MPEG原位共价修饰微胶囊能够实现与常规条件制备的微胶囊接近的机械强度;同时与对照组相比Ig G吸附量降低87.4%,Fgn吸附量降低75.5%,实现了良好的抗蛋白吸附性能;二维模拟平板膜表面L929细胞粘附情况显著改善,细胞粘附数与对照组相比降低了76.9%;体内移植结果证明MPEG修饰微囊细胞粘附极少,微囊与纤维层分离明显。结论:基于海藻酸钠羟基位点的MPEG原位修饰能够实现兼具良好机械稳定性及抗蛋白吸附性能的微胶囊。     

克雷伯氏杆菌的固定化及其在微胶囊中生长状况的研究

采用注滴法制备载克雷伯氏杆菌的海藻酸盐微胶囊,对微胶囊制备条件进行优化,并考察了各种因素对克雷伯氏杆菌微囊化的影响。实验结果表明：控制海藻酸钠溶液的质量分数为2%、氯化钙溶液的质量分数为4.5%、凝胶反应4 h以及菌体与海藻酸钠溶液体积比为1：30,所制备的微胶囊及微囊内菌体的生长效果最好。还初步探讨了壳聚糖对海藻酸盐微胶囊的影响,发现微胶囊表面复合一层壳聚糖半透膜,可以提高微胶囊的强度,但弹性有所降低。另外进行了微胶囊中克雷伯氏菌代谢途径的探索。     

泊洛沙姆（Poloxamer）在脂溶性化感物质生物检测中的应用

在脂溶性化感物质的生物检测中,常规方法是使用有机溶剂对化感物质进行助溶,此法本身会对受体植物产生为害,并且不能准确定量.本研究结合药剂学理论,将动物和细胞实验中常用的增溶剂泊洛沙姆(F-68)应用于脂溶性化感物质的生物检测,用泊洛沙姆对香草醛和阿魏酸两种化感物质进行增溶,以乙醇助溶为对照,比较两种方法的化感物质活性.结果表明,化感物质用泊洛沙姆增溶后,形成的溶液是一个稳定的体系,试验过程中浓度不会发生变化,可准确定量考察化感物质的活性,同时泊洛沙姆对受体植物不产生影响.乙醇助溶处理中,或由于乙醇不易完全挥发,因乙醇的存在而对受体植物产生影响,表现为化感物质活性的加强;或随乙醇的挥发,化感物质以晶体析出,表现为化感物质活性的减弱,不能准确定量考察化感物质的活性.     

杀虫剂微胶囊Ⅱ型的杀虫效能

<正> 我们曾报告复凝聚法杀虫剂微胶囊(Ⅰ型)的研制及其缓释长效、安全、减臭的特性。1981年我们又研制成界面聚合法缩脲囊壁的新型杀虫剂微胶囊,称为杀虫剂微胶囊Ⅱ型(简称Ⅱ型微囊)。现将其杀虫效能的材料整理如下。 一、Ⅱ型微囊的研制 以聚甲基聚苯基异氰酸酯、甲苯二异氰酸酯为囊壁材料。先使杀虫剂原油在水相中分散成微滴,在一定温度下,囊壁材料在水与油的界面聚合而成囊壁,将原油微滴包裹在内。在囊壁材料的用量、保护胶的品种与用量、制备干     

海藻酸钠漂浮微囊的制备以及载药应用研究

目的:本文研究了一种海藻酸钠漂浮微囊的制备方法用以实现胃部持续给药。方法:采用微胶囊发生器制备海藻酸钠漂浮微囊,壁材为海藻酸钠,芯材为食用油的漂浮微囊,衡量不同的制备参数对微囊的理化特性影响;采用克拉霉素作为模型脂溶性药物,测量漂浮药物递送系统的控制释放性质、以及微囊载药特性和小鼠体内漂浮验证。结果:成功制备出了具有漂浮特性的海藻酸钠微囊,其中泵送速度对微囊性质的影响最大。制备出的微囊具有低细胞毒性,可以实现90%的药物包埋率。此外,微囊可以在小鼠的胃中保存超过6小时,具有良好的漂浮特性。结论:海藻酸钠漂浮微囊是一种有效的胃部药物递送系统,可明显延长药物在胃部的滞留时间。     

小麦化感作用研究进展

小麦是世界第一大粮食作物,在农业生产中占有重要地位．然而,由于人们为保证小麦产量往往施用大量的除草剂和杀菌剂,对环境造成了极大的危害．小麦化感作用是利用小麦活体或残体向环境中释放次生代谢物质对自身或其他生物产生作用,它克服了除草剂和杀菌剂等引起的环境污染问题,具有抑制杂草控制病害的潜力．本文对已有的小麦化感作用的研究进展情况进行了综合评述．其中小麦对杂草、虫害及病害产生防御功能的主要化感物质为异羟肟酸和酚酸类物质．小麦化感物质活性的发挥除了取决于化感物质的种类外,还由小麦自身的遗传因素、环境因素和生物因素的共同作用所决定．小麦化感物质在根际土壤中的滞留、迁移和转化过程、小麦化感作用与土壤生物的关系以及相关的作用机理是小麦化感作用研究的薄弱环节。其研究方法还需进一步探索改进．小麦化感作用在植物保护、环境保护以及作物育种等方面具有广泛的应用前景,促进了小麦抗逆性的增强以及产量和品质的提高．     

海藻酸钠/壳聚糖微胶囊固定化大肠杆菌的研究

本文以大肠杆菌ＤＨ5α为模型体系 ,探索了大肠杆菌ＤＨ5α用海藻酸钠 壳聚糖 (ＡＣＡ)微胶囊培养的可行性 ,并观察了微囊化大肠杆菌ＤＨ5α细胞生长与物料渗透性能 ,通过将ＡＣＡ微胶囊移植到实验组小鼠体内 ,考察了ＡＣＡ微胶囊作为口服药物载体的可能性。1　材料和方法1.1　材料壳聚糖 ,本实验室改性所得 ;海藻酸钠 ,ＫｅｌｃｏＤｉｖｏｆＭｅｒ ｃｋＣｏ .Ｉｎｃ .ＵＳＡ ;其它试剂均为国产分析纯。大肠杆菌ＤＨ5α ,长春生物制品所 ;ＬＢ培养基 ,华美生物制品公司提供。昆明系小白鼠 18～ 2 0ｇ ,解放军大连高等医学专科学校实验动物中…