余甘子提取物调控LINC01772/miR-153对肺癌细胞A549生物学行为的影响

摘要 目的：探讨余甘子提取物对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法：体外培养A549细胞,分为对照组、不同剂量（低、中、高剂量）余甘子提取物组、si-NC组、si-LINC01772组、高剂量余甘子提取物+pcDNA组和高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,嵌入式细胞共培养法（Transwell）检测细胞侵袭,免疫印迹法（Western Blot）检测细胞中上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LINC01772和miR-153表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01772和miR-153调控关系。结果：与对照组相比,不同剂量余甘子提取物组A549细胞中LINC01772表达降低,且光密度值（OD值）、克隆形成数、迁移以及侵袭细胞数减少（P<0.05）,而miR-153含量与E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）。LINC01772在A549细胞中负调控miR-153表达。与si-NC组相比,si-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力受到抑制（P<0.05）。与高剂量余甘子提取物+pcDNA组相比,高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力增强（P<0.05）。结论：余甘子提取物可能通过调控LINC01772/miR-153轴抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其可能通过下调LINC01772进而上调miR-153表达发挥作用,具有开发为治疗肺癌药物的潜在价值。     

EdU体外标记毛囊外根鞘干细胞的实验研究

摘要 目的：探寻一种简单有效的追踪定位毛囊干细胞的分裂增殖标记的方法,为后期毛囊干细胞增殖分化迁移机制的研究打下基础。方法：体外无菌条件下获取昆明乳鼠触须毛囊外根鞘,以5 % FCS+MEM作为基础培养液,添加4种不同浓度EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）细胞标记物,进行毛囊外根鞘再生培养,冰冻切片,H.E染色,使用KeyFluor488对EdU所标记的再生细胞进行检测。结果：H.E染色和EdU标记染色结果发现EdU细胞标记物浓度越高,毛囊外根鞘再生形态越差,同时当EdU浓度为20 μ mol/L时,毛囊外根鞘增殖细胞标记效果是最好的。结论：EdU细胞标记物对毛囊外根鞘中的干细胞增殖活性具有一定的毒副作用,可能会影响细胞的正常生理代谢功能,浓度为20 μ mol/L EdU可以有效的标记毛囊干细胞增殖,并对毛囊再生结构影响较小。     

KEAP1基因及其突变位点对非小细胞肺癌细胞株作用的实验初步研究

摘要 目的：研究KEAP1基因及KEAP1基因突变位点对肺癌细胞株的作用。方法：通过Western blot 方法,比较携带KEAP1 基因突变的肺癌细胞株（A549,NCI-H460,NCI-H838）与KEAP1 基因野生型的肺癌细胞株（NCI-H292, NCI-H1299, 95D, SPC-A1）之间,NRF2基因与NRF2下游基因HO-1的蛋白表达水平,检测并比较两组细胞的活性氧（ROS）含量;以新发现的非小细胞肺癌（NSCLC）病人的 KEAP1 体细胞突变作为模板构建 KEAP1 突变质粒,对自身存在 KEAP1 突变的肺癌细胞株A549,通过改造的 pMSCV 逆病毒转染体系,分别构建过表达空载,野生型及突变型 KEAP1 的 A549 稳定细胞株,比较过表达不同质粒的细胞间丙二醛（MDA）含量及 NRF2 下游抗氧化等相关基因的表达水平;通过克隆形成实验检测细胞增殖情况。结果：KEAP1基因突变组肺癌细胞株与KEAP1基因无突变的对照组细胞株相比,NRF2和HO-1蛋白表达显著增高,活性氧水平显著降低（P<0.01）;过表达野生型KEAP1 与过表达空载的 A549细胞相比,NRF2 及其下游基因转录水平表达显著下降（P<0.01）,蛋白水平表达下降,细胞内丙二醛水平显著增高（P<0.01）,克隆形成率显著降低（P<0.01）,而过表达突变型 KEAP1 与过表达空载的 A549细胞相比,NRF2 及其下游基因表达、细胞内丙二醛水平、克隆形成率均无显著差异（P>0.05）。结论：KEAP1基因具有抑癌作用,其突变为失活型突变,突变后KEAP1/NRF2通路激活,KEAP1基因突变可能通过改变细胞的氧化应激水平,促进肺癌的发生发展。     

HPVm16E7刺激树突状细胞SOCS1基因沉默后对宫颈癌小鼠模型免疫效应的影响

摘要 目的：在宫颈癌细胞TC-1的荷瘤小鼠模型中探讨树突状细胞（DCs）的细胞因子信号抑制物1（SOCS1）基因沉默后对宫颈癌细胞免疫效应的影响。方法：构建宫颈癌细胞系TC-1的荷瘤小鼠模型,将含有SOCS1沉默基因的慢病毒载体感染DCs细胞,对荷瘤小鼠进行细胞免疫后监测小鼠体内肿瘤生长、小鼠存活率,并检测小鼠脾细胞对TC-1细胞的体外裂解率以及γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-12（IL-12）表达等指标。结果：DCs SOCS1基因沉默后可延长小鼠存活期,增强DCs对小鼠体内肿瘤生长的抑制作用,增强小鼠脾细胞对TC-1细胞的体外裂解率(P<0.05),增加小鼠血清IL-12因子表达(P<0.05)和小鼠脾细胞IFN-γ表达(P<0.05),但对小鼠脾内效应细胞的数量没有影响(P>0.05)。结论：小鼠体内实验初步证实,DCs SOCS1基因沉默后可一定程度上增强小鼠体内效应细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。     

肝细胞癌组织中OATP1B3的表达及其作用的初步研究

摘要 目的：探讨有机阴离子转运多肽1B3（OATP1B3）在肝细胞癌（肝癌）组织中的表达及作用。方法：通过免疫组化实验和免疫印迹试验（Western blot）检测肝癌组织及其癌旁组织中OATP1B3情况,并分析其与患者临床病理特征的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测OATP1B3在多株肝癌细胞中的表达情况,选择表达量相对较低的人肝癌细胞（HepG2和Huh7）细胞进行过表达实验,细胞毒实验（MTT）和流式细胞术分别检测OATP1B3对细胞增殖及凋亡的影响。结果：肝癌组织中OATP1B3表达水平明显低于癌旁组织（P<0.05）,且与患者恶性肿瘤国际临床病期分类（TNM分期）、肿瘤分化程度、有无肿瘤复发显著相关（P<0.05）。过表达OATP1B3可抑制HepG2和Huh7细胞增殖,促进细胞凋亡。结论：OATP1B3在肝癌组织中低表达,上调其表达可抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。OATP1B3可能是肝癌的抑癌基因,对肝癌的发生、发展具有重要作用。     

PARP2表达对肝细胞癌模型小鼠肿瘤生长及化疗敏感性影响及其机制研究

摘要 目的：研究聚[ADP-核糖]聚合酶2（Poly[ADP-ribose]polymerase 2, PAPR2）表达对干细胞癌模型小鼠肿瘤生长和对化疗药物敏感性的影响。方法：未转染的（对照组）、空载质粒转染（空载组）和si-PARP2转染（si-PARP2组）的Huh7细胞作为研究对象,比较体外化疗药物对不同Huh7细胞克隆形成数目和凋亡率。通过腋下皮下注射不同Huh7建立肝细胞癌模型小鼠,采用结晶紫染色观察并计数克隆形成数目;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测Huh7细胞凋亡率;排水法测定肿瘤组织体积;免疫印迹法检测PARP2, B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl2）和Bcl-2-Associated X蛋白（Bcl-2-Associated X, Bax）蛋白表达。结果：在体内外,转染si-PARP2均显著降低肝癌细胞中PARP2蛋白表达（P<0.05）。在体外,对照组和空载组Huh7细胞形成的细胞克隆数目和化疗药物诱导的凋亡率比较无显著差异（P>0.05）;si-PARP2组Huh7细胞形成的细胞克隆数目显著低于对照组和空载组（P<0.05）,而化疗药物引起的细胞凋亡率显著高于空白组和对照组（P<0.05）。在体内,si-PARP2组小鼠肝癌移植瘤重量和体积均显著低于对照组和空载组（P<0.05）。此外,与对照组和空载组相比,肝癌移植瘤组织内细胞经阿霉素治疗后细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3蛋白表达水平显著增加（P<0.05）,而Bcl2蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：PAPR2基因敲低可以显著抑制肝癌模型肿瘤生长和增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与PAPR2基因敲低促进肝癌细胞凋亡有关。     

HOXD9促进肺癌发生发展的生物学作用及初步机制

摘要 目的：探究同源盒基因HOXD9在H3255、H2170肺癌细胞株中的生物学作用及作用机制。方法：构建HOXD9过表达稳转H3255、H2170肺癌细胞株,通过CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验检测HOXD9对肺癌细胞增殖的影响;利用transwell、基质胶实验检测HOXD9对肺癌细胞迁移及侵袭的影响;采用彗星实验、磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）免疫荧光染色检测HOXD9对肺癌细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测HOXD9对肺癌细胞凋亡的影响;通过qRT-PCR、western blot、luciferase、ChIP、rescue实验探究HOXD9在肺癌中促癌的作用机制。结果：CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验显示HOXD9可促进肺癌细胞增殖;transwell实验表明HOXD9可促进肺癌细胞迁移;基质胶实验显示HOXD9可促进肺癌细胞侵袭;彗星实验与γH2AX免疫荧光染色提示HOXD9可抑制肺癌细胞DNA损伤;流式细胞术显示HOXD9可抑制肺癌细胞凋亡。HOXD9可通过转录上调肺癌细胞中增殖细胞核抗原PCNA的表达水平。结论：HOXD9可通过促进PCNA的转录介导肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制肺癌细胞DNA损伤及凋亡。     

顺铂联合VEGF抗体对食管癌移植瘤小鼠免疫调节以及癌细胞增殖和肺转移的影响

摘要 目的：研究顺铂联合血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）治疗对食管癌移植瘤小鼠免疫功能、癌细胞增殖以及肺转移的影响。方法：30只BALB/c小鼠通过皮下注射食管癌移植瘤模型。一周后,30只食管癌移植瘤模型小鼠被随机均分为3组,即模型组、顺铂组和联合组。模型组不进行治疗,顺铂组腹腔注顺铂治疗,联合组腹腔注射顺铂联合尾静脉注射VEGF抗体进行治疗,共治疗7周。比较各组小鼠体重,食管癌移植瘤体积和重量,卵巢癌细胞肺组织转移结节数、癌细胞转移面积和转移病灶总数,以及食管癌移植瘤外周血CD4⁺、CD8⁺以及CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞比例。结果：（1）顺博组和联合组小鼠体重均显著高于对照组,而联合组小鼠体重显著高于顺铂组（P<0.05）;（2）顺铂组和联合组小鼠CD4+和CD8+细胞比例均显著低于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著高于对照组（P<0.05）;（3）联合组小鼠CD4⁺和CD8⁺细胞比例均显著高于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著低于顺铂组（P<0.05）;（4）顺铂组和联合组小鼠食管癌肿瘤组织体积和重量,肺转移结节数、转移面积和转移病灶数均显著低于对照组（P<0.05）,而联合组小鼠显著低于顺铂组（P<0.05）。结论：VEGF抗体可以显著增强顺铂在体内对食管癌的抗癌特性,并有助于增强食管癌移植瘤小鼠免疫功能、抑制癌细胞体内增殖和肺部转移。     

两种免疫磁珠分离法分选小鼠骨髓粒-单核祖细胞的效率比较

摘要 目的：提取小鼠骨髓细胞（bone marrow cell, BMC）,用两种不同的免疫磁珠分离（magnetic activated cell sorting, MACS）试剂盒从小鼠BMC中分选提纯粒-单核祖细胞（granulocyte-monocyte progenitor, GMP）,比较这两种免疫磁珠的分选效率。方法：从小鼠股骨和胫骨中提取BMC,通过两种不同的MACS试剂盒,即Lineage阳性细胞清除试剂盒和CD117阳性细胞分选试剂盒,分别得到Lineage-细胞群和CD117⁺细胞群,用代表GMP细胞表面标志物的荧光抗体标记,孵育后通过流式细胞荧光分选技术得到GMP细胞,并且对比得到GMP细胞的效率。结果：每2只野生型C57BL/6J小鼠可共收集骨髓细胞（7.02±1.24）×10⁷个,细胞活力为（91.86±5.24）%。经过Lineage阳性细胞清除试剂盒得到的细胞数量为（5.71±2.86）×10⁶个;经过CD117阳性细胞分选试剂盒得到的细胞数量为（2.70±0.56）×10⁶个。Lineage磁珠分选纯化得到的GMP细胞数占总细胞数的比例为（10.90±1.37）%,CD117磁珠分选纯化得到的GMP细胞数占总细胞数的比例为（4.83±2.08）%。结论：Lineage阳性细胞清除试剂盒能更有效分选小鼠骨髓细胞中的粒-单核祖细胞。     

活性维生素D缺乏诱发与衰老相关的特发性肺纤维化

摘要 目的：研究活性维生素D缺乏致小鼠肺纤维化的作用与机制。方法：取7周龄同窝野生型（Wild Type, WT）小鼠,维生素D缺乏（1α(OH)ase^-/-）小鼠置于肺功能检测仪器中,对其吸气时间,最大吸气流速、呼出50%气量时对应的呼气流速、潮气量、分钟通气量,呼吸频率等指标进行分析。培养小鼠原代肺成纤维细胞,按基因型分为对照组、活性维生素D缺乏组,之后分组检测细胞SA-β-gal阳性率。另外取小鼠肺组织样本多聚甲醛固定后脱水浸蜡以制作石蜡组织切片, 对各组切片进行HE、Masson染色以观察肺的组织学形态的变化,使用免疫组织化学观察肺组织中的衰老相关蛋白（p16、p53）的表达量差异。结果：相较于同窝WT小鼠,1α(OH)ase^-/-小鼠通气功能显著减弱,肺成纤维细胞衰老程度和肺组织纤维化程度均有不同程度增加,且免疫组化结果显示肺组织中与衰老相关的p53及p16阳性的细胞也显著增加。结论：活性维生素D的缺乏能够诱发与衰老相关的特发性肺纤维化,可能的机制是通过激活p53/p16信号引发肺成纤维细胞提前衰老,继而引起肺组织异常纤维化。     

体细胞重编程逆转为干细胞的研究进展

目前细胞和发育生物学上的研究成果为生物医学研究提供了广泛的前景.将完全分化的细胞重编程,不经过胚胎逆转为多能干细胞状态,这点燃了再生医学应用的新希望,这一成果从法律、道德、伦理等不同方面被人们所接受.通过体细胞克隆胚胎获得干细胞所面临的破坏胚胎的伦理限制,促使研究者去寻求将分化细胞重编程逆转为干细胞的新方法.主要论述了体细胞重编程的原理、过程及不经过胚胎逆转为多能干细胞的方法.     

Dendritic Cells and Regulatory T Cells in Atherosclerosis

Although macrophages and other immune system cells, especially T cells, have been shown to play disease-promoting roles in atherosclerosis, less is known about the role of antigen presenting cells. Functional, immune stimulating dendritic cells (DCs) have recently been detected in aortic intima, the site of origin of atherosclerosis. We had compared DCs with macrophages in mice with experimental atherosclerosis, to clearly define cell types by developmental and functional criteria. This review summarizes recent advances in studies of DCs in humans and in mouse models of atherosclerosis, as well as providing a simple strategy to measure regulatory T (Treg) cells in the mouse aorta.     

Cells in space

How does one treat in a seriously injured astronaut in outer space or even another planet? To answer such a question, the US National Aeronautical Space Administration (NASA) has embarked on a program of growing tissues--and possibly whole organs--in space. NASA has developed a unique rotating bioreactor that allow cells to be grown in a microgravity environment that eliminates almost all shear forces placed upon a cell culture system while entering space. Back on earth, this novel bioreactor has led to exciting discoveries and applications by scientists trying to get cells to differentiate and form their natural three-dimensional tissue matrices--the holy grail of tissue engineers. NASA's bioreactor has allowed various labs to culture cells and even viruses previously impossible to grow using traditional methods. These successes are attributed to the bioreactor's ability to provide an unique environment that closely resembles tissue differentiation during embryogenesis, and thus allowing cellular expression of surface epitopes similar to that of intact tissues. It also appears that cells grown in a microgravity, low-shear environment allows for greater chemical signaling, probably as a result of more surface contact between cells. Realizing the bioreactor's commercial potential, Santa Monica, California-based VivoRx licensed exclusive rights from NASA for both therapeutic and diagnostic commercial applications. VivoRx has, in the past, successfully transplanted encapsulated islet cells from cadavers and porcine pancreas into insulin-dependent diabetics, perhaps a major breakthrough in the treatment of diabetes. However, pancreas from cadavers are in very short supply. The bioreactor may be the answer; VivoRx hopes the bioreactor will allow them to propagate enough human islet cells to use their cell-based approach to treat a large diabetic population. The company has already successfully grown islet cells generated from the bioreactors, and is beginning FDA-approved Phase I/II clinical trials.     

脂肪来源间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展

脂肪来源的间充质干细胞具有较强的体外增殖能力,因具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件低等优势已引起各国学者的关注。脂肪间充质干细胞凭借其多向分化潜能,是人体干细胞库潜在的重要来源之一。目前,研究人员已成功地在体外将其诱导为内皮细胞,成骨细胞、成软骨细胞、脂肪前体细胞、平滑肌细胞,心肌细胞、神经样细胞等。就脂肪来源的间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展作一综述。     

体细胞重编程为多能干细胞的研究进展

胚胎干细胞不仅是研究哺乳动物早期胚胎发育、细胞分化、基因表达调控等发育生物学问题的有力工具,还可用于新药评价、细胞治疗等方面的研究.然而,为科学研究而捐献的人类卵子并不能够轻易获得,限制了人类胚胎干细胞相关研究的进展,解决这个问题的理想办法就是找到能够替代胚胎干细胞的其他成体多能细胞.综述了将哺乳动物体细胞诱导为多能干细胞的方法,重点介绍了利用特定的转录因子将体细胞诱导为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)的最新进展,详细阐述了转录因子在诱导细胞重编程过程中发挥的作用,以及iPS细胞筛选与鉴定的方法,并展望了iPS细胞的应用前景.     

Calponin in Non-Muscle Cells

Calponin is an actin filament-associated regulatory protein expressed in smooth muscle and non-muscle cells. Calponin is an inhibitor of the actin-activated myosin ATPase. Three isoforms of calponin have been found in the vertebrates. Whereas the role of calponin in regulating smooth muscle contractility has been extensively investigated, the function and regulation of calponin in non-muscle cells is much less understood. Based on recent progresses in the field, this review focuses on the studies of calponin in non-muscle cells, especially its regulation by cytoskeleton tension and function in cell motility. The ongoing research has demonstrated that calponin plays a regulatory role in non-muscle cell motility. Therefore, non-muscle calponin is an attractive target for the control of cell proliferation, migration and phagocytosis, and the treatment of cancer metastasis.     

Neuregulins in Glial Cells

The role of growth factors in controlling the development of glial cells in both the peripheral and central nervous systems has been investigated for a number of years. The recent discovery of a new family of growth factors termed the neuregulins (NRGs) has led to an explosion of information concerning the putative role of these growth factors in the development of Schwann cells (SC), oligodendrocytes (OLG), and astrocytes. Many of these previous studies have focused on the effects of exogenous NRGs on glial cell development and differentiation. We now review the evidence that these glial cells themselves produce NRGs and discuss the major implications of these findings with respect to glial cell development and diseases which affect glial cell function. We also discuss the potential role of endogenous NRGs following neural injury.