蝴蝶兰原球茎液体增殖培养的研究

以茎尖诱导形成的原球茎为外殖体,采用液体培养方式探讨了不同浓度的激素配比、蔗糖浓度和添加不同量的新鲜液汁对蝴蝶兰原球茎增殖的影响,并比较了液体和固体两种培养方式的原球茎增殖特征.结果表明:不同浓度的外源激素及其配比对蝴蝶兰原球茎增殖影响不明显,但对原球茎生长影响较大,6-BA 2.0 mg/L+Ad 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的激素浓度组合比较适合蝴蝶兰原球茎增殖,蔗糖浓度对蝴蝶兰原球茎增殖和生长影响较大,适合蝴蝶兰PLBs增殖的蔗糖浓度为20 g/L,添加10 % ～40 %的新鲜椰汁对蝴蝶兰原球茎增殖生长有明显促进作用;原球茎液体增殖培养的时间不宜超过4周,5周内连续培养增殖曲线呈倒"V"字形;液体增殖培养的原球茎分化成苗的时间相对较晚.     

大花蕙兰组培快繁技术研究

选用大花蕙兰杂交新品种1053为外植体,采用1/2MS为基本培养基进行大花蕙兰组培快繁技术研究,结果表明：类原球茎诱导的最佳外植体为大花蕙兰鳞茎,培养基最佳激素浓度配比为0.5 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L NAA;类原球茎增殖与分化芽最佳激素浓度配比为1.0 mg/L 6-BA＋0.3 mg/L NAA;幼芽增殖的最佳激素浓度配比为2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA,最佳有机添加物为150 ml/L椰汁,幼芽增殖正交试验得出影响因素主次顺序：6-BA〉椰汁添加物〉NAA,优组合为2 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA、添加物椰汁150 ml/L;诱导生根的最佳激素浓度配比为0.3 mg/L IBA＋0.2 mg/L NAA,添加香蕉泥100 g/L对幼苗根生长有显著的促进作用。优化后的大花蕙兰组培快繁技术参数,可为大规模工厂化生产提供参考。     

文心兰花梗茎段植株再生培养的影响因子研究

应用正交试验设计法研究基本培养基、植物生长调节剂种类及浓度对文心兰花梗茎段芽再生丛生芽诱导、增殖和生根培养的影响。筛选出最佳基本培养基为1/2 MS;最佳诱导培养基为1/2 MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L;最佳增殖培养基为1/2 MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.05 mg/L+NAA 0.3 mg/L+香蕉泥100 g/L+蔗糖20 g/L。     

不同添加物对文心兰原球茎增殖及试管苗生长的影响

以文心兰切花品种‘南茜’原球茎(PLB)及试管苗为材料,在培养基MS＋6-BA 2 mg/L＋Ad 1 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋蔗糖30 g/L基础上,利用增殖系数及不同形态指标加权分析研究马铃薯、芋头、南瓜、香蕉及活性炭(AC)5种培养基添加物及其组合对‘南茜’PLB增殖及试管苗生长的影响。结果表明,适宜文心兰PLB增殖培养的添加物为马铃薯泥50 g/L,培养45 d后,PLB增殖系数是对照的3.64倍;适宜无菌小苗(约1.5 cm)增殖及生长的添加物为香蕉泥50 g/L＋AC 1 g/L,加权总分是对照的1.53 倍;适宜无菌中苗(约2.5 cm)增殖及生长的添加物为马铃薯泥25 g/L＋香蕉泥25 g/L,加权总分是对照的1.55倍。     

离体鸡蛋参不定芽增殖条件筛选

以MS培养基为基本培养基,附加NAA 0.05 mg/L和不同浓度的6-BA、KT、ZT,并以食用白砂糖代替分析纯蔗糖,以自来水代替蒸馏水对鸡蛋参进行增殖培养,比较生长状况.结果表明,6-BA、KT、ZT均能促进鸡蛋参单芽茎段的增殖,其中以ZT的效果最好;最适增殖培养基为MS 蔗糖30 mg/L 琼脂5.5 g/L ZT 1.0 mg/L NAA 0.05 mg/L;可以以食用白砂糖代替分析纯蔗糖,以自来水代替蒸馏水对鸡蛋参进行增殖培养.     

文心兰试管苗丛生芽高效增殖体系的建立

分别采用细胞分裂素6-BA和Ad对文心兰试管苗增殖的作用进行研究,结果表明：在与0．2mg／L的NAA配合使用时,6-BA含量在2．0～4．0mg／L水平下的培养基较适合试管苗的增殖,最大增殖系数可达7．27,苗生长健壮,叶色鲜绿,适合进一步生根移栽;Ad在1．0～6．0mg／L的范围内增殖系数较小,苗生长缓慢、矮小。但有形成丛生苗的倾向;以2．0mg／L的6～BA和1．0mg／L的Ad组合使用,易形成丛生芽苗且苗体相对较小,增殖系数也较高;接种单株小苗较大苗易形成丛生芽苗;接种连体小芽苗,全部能形成丛生芽苗,增殖系数可达10．07,适合于进一步增殖使用。6-BA与Ad配合使用结合接种连体小芽苗可建立高效的丛生芽苗增殖体系,培养基最佳激素组合为MS 6-BA2．0mg／L Ad1．0mg／L NAA0．2mg／L 3％蔗糖 0．4％琼脂粉。     

墨兰的无菌播种和植株再生

墨兰的无菌播种结果发现,在不添加细胞分裂素的培养基上,种子可以发芽,但只有原球茎和根状茎产生;不可能进一步分化成苗,只有在含有不同激素成分的MS或KnudsonC培养基上,才有可能诱导芽的分化,其中以附加6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.1mg/L诱导效果最佳,在附加6-BA 2.0mg/L+NAA 0.4mg/L的MS培养基中,能加速芽的增殖,根状茎转入含有相同激素成分的液体增殖培养基中振荡培养,可大大提高芽的分化速率。添加0.5%活性炭对芽的分化有明显增效作用。在附加NAA 0.2mg/L的MS培养基中;幼苗的生根效果最佳。     

彩色马蹄莲的组织培养

以彩色马蹄莲芽眼为外植体,在添加不同激素配比的MS培养基上进行培养.结果表明:(1)较适宜诱导愈伤组织的激素组合是1.5 mg/L Zt+0.1 mg/L NAA、3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA或0.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,出愈率分别为94.12%、100%和86.67%;较适宜诱导不定芽的激素组合是2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,芽丛诱导率可达87.3%;芽增殖较适宜的激素组合是2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA或2.0 mg/L KT+1.0 mg/L NAA,而且在继代培养中,交替使用这两种激素组合,繁殖系数可达4倍以上;生根培养基以1/2 MS+0.3 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA较为适宜,生根率达95%以上.(2)彩色马蹄莲小块茎形成的主要影响因素是培养基中的蔗糖浓度,最适宜蔗糖浓度为10%;10 mg/L多效唑和8 mg/L NAA对小块茎的形成有明显的促进作用,而分裂素则表现出较强的抑制作用.     

淡黄花百合的组织培养与快速繁殖

以淡黄花百合的鳞片为外植体进行试管培养,筛选出各培养阶段适宜的培养基分别为:(1)丛生芽诱导,MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.2 mg/L 蔗糖3%;(2)继代增殖,MS 6-BA 1.5 mg/L NAA 0.1 mg/L 蔗糖3%;(3)生根及小鳞茎生长,1/2 MS NAA 0.5～1.0 mg/L 蔗糖3% 活性碳0.1%,1/2 MS NAA 0.5 mg/L 蔗糖6% 活性碳0.1%.     

结球甘蓝自交不亲和系组织快繁体系研究

对结球甘蓝自交不亲和系进行快繁,以探讨不同外植体、激素配比及浓度、定植方式等因素对结球甘蓝不定芽、不定根发生能力等的影响.结果表明:当激素浓度组合为5 mg/L 6-BA+0.25 mg/L NAA时不定芽分化率最高,腋芽和下胚轴分别为87.5%和85%;当组合为2 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA和3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA时最易诱导产生不定芽,增殖系数达到4以上;适合生根培养基为2/3 MS+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA,平均每株生根数是7～8条,生根率80.3%.移栽到穴盘的试管苗成活率高达100%,生长健壮;直接栽在大田的成活率为84.7%,长势较差.起始培养时腋芽比种子增殖速度快,后期增殖及生长二者无显著差异.     

唐古特大黄组织培养技术的研究

试验选用唐古特大黄(Rheum tunguticum Maxim．ex Regel．)种了萌发的无菌苗及无菌苗子叶、下胚轴、胚根和幼根作为材料,研究唐古特大黄不同外植体的离体培养技术。结果表明,唐古特大黄的无菌苗和无菌苗子叶、下胚轴、胚根和幼根都可以作为离体培养的良好外植体。唐古特大黄的最适分化培养基足：B5 NAA0．1mg／L 6-BA3mg／L;最适乍根培养素是：1／2MS NAA1mg／L 3%蔗糖或1／2MS NAA0．5mg／L 3％蔗糖;愈伤组织诱导培养基是：MS 2,1-D 1mg／L NAA1mg/L 6BA1mg／L。     

蓝莓离体叶片胚状体高效发生及其组织学观察

以高灌蓝莓试管苗叶片为外植体、以改良WPM为基本培养基,研究了外源激素TDZ、ZT及其组合对离体叶片胚状体发生的影响,同时也探讨了蔗糖浓度、水解酪蛋白、椰汁等对胚状体发生、丛芽形成的影响.结果表明:不同浓度的外源激素TDZ、ZT及其组合对胚状体的发生频率、丛芽的形成和生长起重要作用;蔗糖浓度对胚状体的发生及丛芽的生长影响较大,而添加有机质则对胚状体的发生及丛芽的生长没有明显影响.适合高灌蓝莓叶片胚状体发生及成苗的培养基为WPM TDZ 0.04 mg/L ZT 0.25～2.0 mg/L 蔗糖20～40 g/L,而培养基WPM ZT 0.5～1.0 mg/L 蔗糖20 g/L适合于丛芽继代生长.组织学观察表明,蓝莓叶片胚状体发生主要起源于叶上表皮细胞和部分叶肉细胞,可能为多细胞起源,历经多细胞原胚、原球胚、梨形胚、心形胚、子叶胚等发育阶段,并能直接发育成苗.     

墨兰及其杂种的组织培养与快速繁殖

针对墨兰及其杂种常规分株繁殖慢、种子在自然状况下极难萌发的情况,以仙殿白墨及其它与象牙白、西藏虎头兰杂交所得的杂种的胚,仙殿白墨与其杂种Ｆ１代的茎尖、花芽、幼叶、根进行离体培养。结果表明,胚培养以１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋１０％椰子汁培养基萌发效果较好,发育到一定时期的早期胚即能萌发;茎尖、花芽培养在ＭＳ＋６－ＢＡ０５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ＋０５％活性炭培养基上诱导原球茎比较适合,根与幼叶离体培养未诱导出原球茎;根状茎增殖在以花宝一号、花宝二号、蛋白胨等为主要原料并附加０５％活性炭的自制Ｇ３培养基上长得粗壮且繁殖速度快;根状茎出芽诱导在Ｂ５＋６－ＢＡ２～３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０２ｍｇ／Ｌ＋０５％活性炭培养基上效果最好;生根壮苗以１／２ＭＳ＋ＮＡＡ２０ｍｇ／Ｌ＋１０％苹果汁＋１０％香蕉汁＋１０％活性炭培养基能达到较理想的效果;蔗糖浓度生根培养时以２％较佳,其它培养以３％较好。仙殿白墨杂交种的胚萌发率比仙殿白墨略低,萌发期略长;但其花芽与茎尖的原球茎诱导、根状体增殖、根状茎出芽、生根壮苗培养、生长势、抗逆性等方面均具有杂种优势。     

紫花三叉白芨快繁技术研究

为建立白芨(Bletilla striata)高效实用的组织培养快繁体系,以紫花三叉白芨成熟未开裂的蒴果、块茎、叶片为外植体,筛选最佳外植体材料,并研究不同生长调节剂浓度培养基对原球茎萌发、丛生芽诱导以及生根影响。结果表明,白芨种子为最佳外植体材料;培养基KC + NAA 0.5 mg·L–1有利于白芨原球茎丛生芽诱导;培养基MS + 6-BA 2.0 mg·L–1 + NAA 0.2 mg·L–1 + 10%椰汁有利于丛生芽增殖及成苗;将2 cm高幼苗转入生根培养基1/2MS + NAA 0.5 mg?L–1中,其生根效果最好,生根率达98.67%。     

骆驼蓬的组织培养及植株再生

以骆驼蓬(Peganum harmala L)无菌苗下胚轴切段为材料,在不同的培养基上进行愈伤组织的诱导,发现在MS基本培养基附加2．0mg/L 2,4—D、0．5mg／L 6—BA和3％蔗糖时,可100％的诱导出愈伤组织。愈伤组织在附加2．0mg／L 6—BA、0．5mg／L NAA、500mg／L CH和3％蔗糖的MS培养基上诱导出丛生芽,进而发育成苗,苗的分化频率在30％左右。分化苗或其茎切断在附加0．2mg／L IBA、0．2mg/L NAA和3％蔗糖的l／2MS培养基上出现根的分化,分化频率在90％以上。再生植株经炼苗后移栽成活,成活率在80％以上。     

甘蓝型油菜与芝麻菜体的细胞杂交

为拓宽油菜育种的基因资源库, 改良油菜品种, 以甘蓝型油菜(Brassica napus)花油3号下胚轴和芝麻菜(Eruca sativa)下胚轴为材料分离制备原生质体; 然后采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合, 当PEG浓度为35%, 原生质体融合密度为5×105个/mL时, 融合25 min时, 融合率可达18.2%。融合后在培养密度为1×105个/mL时, 以附加1.0 mg/L 2,4-D +0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+ 200 mg/L肌醇+300 mg/L水解酪蛋白的改良的KM8p为融合体培养基, 以0.1 mol/L 蔗糖+0.2 mol/L葡萄糖+0.2 mol/L甘露醇作渗透稳定剂进行液体浅层培养, 效果较好, 愈伤组织再生率最高为6.8%。将融合体再生的小愈伤组织转移至培养基(B5无机盐+0.087 mol/L蔗糖+0.2 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+ 0.5% Agar, pH 5.8)上增殖培养, 待愈伤组织长至直径为3~5 mm时, 及时将其转至分化培养基(MS无机盐+0.087 mol/L 蔗糖+0.1 mg/L IAA+0.8 mg/L 6-BA+0.8% Agar, pH 5.8)中诱导不定芽再生, 芽分化率为35.7%。当不定芽长为2~3 cm时, 将其切下转入附加0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L 6-BA的1/2MS生根培养基中诱导生根, 14 d左右即可形成再生植株, 生根率可达88%。同时, 以紫外线(60 μW/cm2)照射芝麻菜原生质体, 进行不对称融合, 照射2 min的获得了愈伤组织和再生植株, 照射4 min的只获得愈伤组织, 而照射5 min以上的没有获得愈伤组织, 但其愈伤组织再生、增殖及植株再生均不如对称融合。从细胞学鉴定的21块杂种愈伤组织上再生出16株杂种植株。     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

甘蓝型油菜与芝麻菜体的细胞杂交

为拓宽油菜育种的基因资源库, 改良油菜品种, 以甘蓝型油菜(Brassica napus)花油3号下胚轴和芝麻菜(Eruca sativa)下胚轴为材料分离制备原生质体; 然后采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合, 当PEG浓度为35%, 原生质体融合密度为5×105个/mL时, 融合25 min时, 融合率可达18.2%。融合后在培养密度为1×105个/mL时, 以附加1.0 mg/L 2,4-D +0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+ 200 mg/L肌醇+300 mg/L水解酪蛋白的改良的KM8p为融合体培养基, 以0.1 mol/L 蔗糖+0.2 mol/L葡萄糖+0.2 mol/L甘露醇作渗透稳定剂进行液体浅层培养, 效果较好, 愈伤组织再生率最高为6.8%。将融合体再生的小愈伤组织转移至培养基(B5无机盐+0.087 mol/L蔗糖+0.2 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+ 0.5% Agar, pH 5.8)上增殖培养, 待愈伤组织长至直径为3~5 mm时, 及时将其转至分化培养基(MS无机盐+0.087 mol/L 蔗糖+0.1 mg/L IAA+0.8 mg/L 6-BA+0.8% Agar, pH 5.8)中诱导不定芽再生, 芽分化率为35.7%。当不定芽长为2~3 cm时, 将其切下转入附加0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L 6-BA的1/2MS生根培养基中诱导生根, 14 d左右即可形成再生植株, 生根率可达88%。同时, 以紫外线(60 μW/cm2)照射芝麻菜原生质体, 进行不对称融合, 照射2 min的获得了愈伤组织和再生植株, 照射4 min的只获得愈伤组织, 而照射5 min以上的没有获得愈伤组织, 但其愈伤组织再生、增殖及植株再生均不如对称融合。从细胞学鉴定的21块杂种愈伤组织上再生出16株杂种植株。     

农杆菌介导的大豆高频遗传转化

大豆(Glycine max(L.)Merrill)遗传转化目前常用的两种方法为农杆菌介导的子叶节转化系统和基因枪介导的体细胞胚转化,但这两种转化系统都存在转化频率低、难于重复及依赖于特定的基因型等问题.为了提高农杆菌介导的大豆子叶节的转化频率,采用了一种基于bar基因作为筛选标记基因的固体-液体筛选系统,与农杆菌共培养3d的大豆子叶节在MS添加2 mg/L 6-BA和5 mg/L的glufosinate的筛选培养基培养2周后,再转到含有0.01 mg/L TDZ和2mg/L glufosinate的液体培养基中筛选,并每周更换一次培养液.得到的再生芽首先经GUS分析为阳性后再转入生根培养基得到完整转化植株,然后通过Southern杂交分析证实外源基因整合到大豆基因组,转化植物含有1～2个基因拷贝数.该转化系统具有转化频率高、转化周期短以及不依赖于大豆基因型等优点,对影响该转化系统的一些因子进行了讨论.     

土人参的组织和单细胞培养及试管苗开花结实

以土人参的花梗、茎和叶片为外植体在ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织,诱导率为７５％－９０％。愈伤组织经分化和生根培养再生了完整植株。由组织培养再生苗的幼茎诱导的愈伤组织建立悬浮系。由悬浮系分离的单细胞在２／３ＭＳ液体培养基中振荡培养或振荡培养３周后转入双层培养均再生了愈伤组织,再生率分别为０．２８％和０．４１％。愈伤组织在含有较低浓度６－ＢＡ的培养基上分化出苗。幼苗生长迅速,每３周扩增６．７倍,再生植株