人胎肝造血干细胞增殖刺激物的分离及鉴定

经过超滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ多步分离纯化,从人胎肝细胞原代培养上清中分离到一分了阳为３５ｋＤ的单一活性组分,真有造血干细胞增殖刺激活性,定义为ＦＬＳ－４,ＦＬＳ－４可能是一种新型造血干细胞增殖刺激因子,与具有这类活性的ＩＬ－３,ＩＬ－６,ＧＭ－ＣＳＦ,ＦＬＴ３配基和ＳＣＦ等在理化特性或生物学性质上均有所差异,在胎肝造血活跃时期,是启动     

人胎肝造血干细胞增殖刺激物的分离及鉴定

经过超滤、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ多步分离纯化,从人胎肝细胞原代培养上清中分离到一分子量为３５ｋＤ的单一活性组分,具有造血干细胞增殖刺激活性,定义为ＦＬＳ－４。ＦＬＳ－４可能是一种新型造血干细胞增殖刺激因子,与具有这类活性的ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＬＴ３配基和ＳＣＦ等在理化特性或生物学性质上均有所差异,在胎肝造血活跃时期,是启动早期造血干细胞从Ｇ＿０期进入Ｓ期的主要候选活性物质。     

肝再生的调控及原癌基因表达

肝脏再生过程中受到多种体液因素的调控。肝细胞生长因子（ＨＧＦ）、肝刺激因子（ＨＳＳ）等对肝细胞有促分裂作用;转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）等则具有抑制作用。此外,肝再生还需要去甲肾上腺素（ＮＥ）、胰岛素等辅助分裂原的存在,共同调节肝再生。肝细胞分裂增殖与原癌基因表达密切相关。肝细胞从静息期进入细胞周期,以及在整个细胞周期中,某些原癌基因有特征性的表达。     

肝大部切除后肝再生调节的研究

肝再生调节因子主要有促使肝细胞增殖的刺激因子和抑制因子两大类。前者如ＥＧＦ、ＩＧＦ－α、ＨＳＳ、ＨＰＴＢ、ＨＰＴＡ／ＨＧＦ等,它们是肝细胞增殖的完全促分裂原;后者主要有肝抑素、ＴＧＦ－β等,它们对肝细胞增殖具有负性调节作用。本实验室已提取纯化了大鼠肝抑素并证明了它的生物效应。肝大部切除后的动物在上述两类因子的调控下,肝细胞增殖迅速而有规律,肝再生完成后肝细胞增殖趋于停止。     

胎肝细胞输注与全胚注射液治疗再生障碍性贫血的机理探讨

本文对胎肝细胞输注或全胚注射液治疗再生障碍性贫血的可能机理作了一些实验性探讨。研究结果表明: 1.胎肝细胞在培养或解体过程中释放某些刺激红系造血的因子,有利于已经损伤的造血功能的恢复。 2.对正常小鼠注射无细胞胎肝制剂或全胚注射液后,骨髓红系细胞的分裂指数明显升高,骨髓中粒/红比值趋于降低,反映了骨髓中红系细胞增生活跃的状态。 3.对正常小鼠注射无细胞胎肝制剂或全胚注射液后,外周血网织红细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬指数趋于平行增高,其增高程度和持续时间随注射次数的增加而加强。 小鼠注射无细胞胎肝制剂或全胚注射液后,巨噬细胞吞噬指数的增加,反映了巨噬细胞激活,这种作用除了提高机体的非特异性免疫功能,增强机体的抵抗力外,还可能通过巨噬细胞的活化,直接或间接地调控机体红系细胞的增殖,因而,对巨噬细胞在造血调控中的作用以及它在再生障碍性贫血发病机理研究中的意义提出了讨论。     

肝细胞生长因子的生物学功能与应用

肝细胞生长因子 (ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＨＧＦ)又称扩散因子 (Ｓｃａｔｔｅｒｆａｃａｔｏｒ,ＳＦ) ,最初是从血浆和血小板中纯化获得并认为是一种刺激肝细胞生长增生的有丝分裂原 ,对肝切除或化学损伤后的肝再生起重要作用[1] 。 1984年 ,Ｎａｋａｍｕｒａ等从部分肝切除的大鼠血清中分离到一种能刺激原代培养的肝细胞生长和合成的肝源性因子 ,并首次将它命名为肝细胞生长因子[2 ] 。自从ＨＧＦ的发现至今 ,国内外对其作了许多研究 ,对它的来源、结构、功能乃至基因序列都已有了较为全面、透彻的了解。目前已知Ｈ…     

肝刺激因子对人肝癌细胞BEL—7402p21^ras表达的影响

从雄性初断乳ＳＤ大鼠肝匀浆中提取肝刺激因子（ＨＳＳ）并加以部分纯化,观察其促人肝癌细胞增殖活性及对ｐ２１＾ｒａｓ蛋白表达的影响。结果表明：⑴ＨＳＳ具有明显的促人肝癌细胞增殖活性,其分子量为１４－２０ｋＤ;⑵ＨＳＳ可提高ｐ２１＾ｒａｓ蛋白表达,具有时间－效应关系,并与ＥＧＦ呈协同作用;⑶ＨＳＳ调节ｐ２１＾ｒａｓ蛋白表达具有剂量－效应关系,且呈现出饱和性。鉴于我们已报道ＨＳＳ上调ＥＧＦ受体蛋白和基因表     

肝刺激因子对肝癌细胞增殖的调节作用

初断乳雄性ＳＤ大鼠的肝匀浆以超速离心和柱层析法分离纯化肝刺激因子（ＨＳＳ）,观察其对肝癌细胞增殖、细胞表皮生长因子（ＥＧＦ）受体表达及受体磷酸化的影响。结果表明,ＨＳＳ具有明显的促肝癌细胞分裂增殖能力,提高细胞周期中Ｓ期细胞所占比例。ＨＳＳ促肝癌细胞增殖作用与其促ＥＧＦ受体表达有关,表现为：（１）ＨＳＳ上调７０ｋＤ ＥＧＦ受体蛋白表达,此作用与ＥＧＦ合用后明显加强,即呈协同效应;（２）ＨＳＳ上调Ｅ     

胞源性肝细胞生长因子研究进展

胞源性肝细胞生长因子;多肽,分子量１１－１７．５ｋＤ,基因表达产物,其组织来源,理化性质,生物性能均不同于体液或血小板来源的ＨＧＦ和其它已知因子,存在于新生动物和胎儿肝脏以及肝部分切除后的再生肝中,能特异刺激肝细胞增殖、能有效治疗重症肝炎等多种肝病,其作用具组织特异性而无种属特异性。     

丹参对鼠缺血后残肝酶组织化学的影响

研究观察鼠缺血后肝再生时酶组织化学的变化。结果表明缺血后肝再生时肝细胞ＳＤＨ、Ｇ６Ｐａｓｅ和Ｍｇ２＋ＡＴＰａｓｅ活性及ＰＡＳ反应均在不同程度上低于对照组,而ＬＤＨ、ＡＣＰ活性较对照组有不同程度升高。丹参组酶活性及ＰＡＳ反应基本处于缺血组与对照之间,说明丹参对保护某些酶活性,促进肝再生有一定的作用     

广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝、肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究

采用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法,以３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针,检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝、肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带,表明ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态。胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。     

广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝,肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究

要用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法,以＾３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针,检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝,肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带,表明的ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态,胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。     

同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

血中同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ,ＨＣＹ）浓度的升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子．为进一步阐明ＨＣＹ促进血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ,ＶＳＭＣｓ）增殖,从而引起动脉粥样硬化发生的机理．本实验采用细胞计数、３Ｈ－ＴｄＲ参入、细胞周期分析、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法证明,一定剂量的ＨＣＹ可促进离体培养的ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞增殖,使其ＤＮＡ合成增加,细胞周期中Ｓ期细胞所占比例增加４３％,并促进ｃ－ｍｙｃ与ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ表达增加．提示ＨＣＹ可能通过促进ＶＳＭＣｓ增殖而诱发动脉粥样硬化     

肝源性肝细胞再生刺激因子(HSS)的制备及鉴定

本文采用新鲜乳牛肝脏作为原料。经酸处理、超滤、分离得到肝源性肝细胞再生刺激因子（ＨＳＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＨＳＳ的蛋白质分子量为１２,０００～１５,０００Ｄａ。经动物试验和生物学活性鉴定,表明本法制备的ＨＳＳ符合《中国生物制品规程》（１９９５版）的有关要求,且工艺简便、有效     

川芎嗪与秋水仙碱抗肝纤维化的实验研究

实验ＳＤ大鼠随机分为正常组、ＣＣｌ４组、川芎嗪组和秋水仙碱组。实验结果显示：与ＣＣｌ４组比较,川芎嗪组血清ＡＬＴ、丙二醛（ＭＤＡ）、Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）、透明质酸（ＨＡ）及肝组织ＭＤＡ明显减低,肝组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性显著提高,胶原纤维增生程度显著减轻,结蛋白（Ｄｅｓｍｉｎ）阳性细胞显著减少。两治疗组之间,血清ＰＣⅢ、ＨＡ及肝组织Ｄｅｓｍｉｎ阳性细胞数和胶原纤维增生程度无显著差异。表明川芎嗪有明显保护肝细胞、抗脂质过氧化和肝纤维化作用。秋火仙碱抗肝纤维化效应与之相似,但无抗脂质过氧化和保护肝细胞作用。     

人肝刺激因子对大鼠实验性慢性肝损伤的保护作用

从健康孕妇水囊引产４─６个月龄的胎儿取肝,采用ＬａＢｒｅｃｑｕｅ方法提取人肝刺激因子（ｈＨＳＳ）。经３Ｈ－胸腺嘧啶核苷参入肝ＤＮＡ法测定其生物活性。表明此ｈＨＳＳ可刺激肝细胞ＤＮＡ合成。采用皮下注射ＣＣｌ４和饮用１０％乙醇来制备慢性肝损伤动物模型,观察了ｈＨＳＳ的保护肝脏作用。结果表明：ｈＨＳＳ可使ＣＣｌ４－乙醇所致慢性肝损伤大鼠的死亡率、血清谷丙转氨酶水平、肝组织中羟脯氨酸含量的升高以及肝组织中丙二醛的含量降低。肝组织切片表明：ｈＨＳＳ能减轻肝组织的损伤程度,促进肝细胞再生,并能明显防止肝纤维化的形成和发展。可见,ｈＨＳＳ对ＣＣｌ４－乙醇所致的慢性肝损伤大鼠有明显的保护作用,其机制可能与促进肝细胞再生及抑制肝细胞膜的脂质过氧化有关。     

重组人肝细胞生成素的生物学性能

利用ＭＴＳ及３ＨＴｄＲ掺入法,首次观察了重组人肝细胞生成素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｐｏｉｅｔｉｎ,ｒｈＨＰＯ）在体外对原代培养大鼠肝细胞及肝癌细胞增殖的正向调控作用。结果表明ｒｈＨＰＯ是一种重要的肝细胞增殖刺激因子,可望成为临床治疗肝病的新药物。同时也观察到ｒｈＨＰＯ可以在体外抑制肺癌细胞ＤＮＡ的合成,为探究其作用机理提供了有益的提示。     

丙肝病毒抗原在肝细胞癌组织中的定位——共聚焦激光扫描显微镜观察

应用共聚焦激光扫描显微镜（ＣｏｎｆｏｃａｌＬａｓｅｒＳｃａｎｎｉｎｇＭｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＣＬＳＭ）观察免疫荧光标记的丙型肝炎病毒核心抗原（ＨＣＶＣＰ－１０）在肝癌组织中的表达,与免疫组化普通光镜观察结果比较,显示ＨＣＶＣＰ－１０抗原在肝细胞癌和癌周肝组织的定位特点,介绍ＣＬＳＭ在病理学中的应用。研究结果表明：ＨＣＶＣＰ－１０抗原大部分存在于胞浆,少部分存在于胞核,ＨＣＶ的表达有核内过程;ＨＣＶＣＰ－１０抗原在癌周肝组织的表达明显强于癌组织;ＣＬＳＭ比普通光镜在确定抗原定位上有更大的优越性     

HBsAg分子生物学与HBV疫苗研究进展

通过对ＨＢｓＡｇ的免疫原性、肝细胞嗜性及其与ＨＢＶ免疫病理的关系等研究,阐述了ｐｒｅＳ多肽对ＨＢＶ感染免疫应答的作用及其与肝细胞膜的相互作用。基于ｐｒｅＳ多肽在乙肝免疫中的重要性,使得乙肝疫苗的研究随着重组ＤＮＡ技术的发展从第一代血源乙肝疫苗到第二代基因工程疫苗特别是多肽或亚单位疫苗在产量、质量、免疫原性、安全性等方面的研究取得了长足的进展。     

小鼠胎肝细胞透明质酸3D培养体系的建立

为了利用透明质酸建立小鼠胎肝细胞3D培养体系,分离获得胚胎12~14d胎肝细胞,利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养,并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系.胎肝细胞在2D体系中呈现克隆状生长.分离培养获得的肝干/祖细胞,克隆在透明质酸建立的3D培养体系保持增殖活性,并进一步获得肝细胞功能特性,表现为3D培养上清中白蛋白合成和尿素水平显著增加.定量PCR结果显示,随着3D培养时间的延长,其肝细胞干性标志如AFP、CK19、Ep CAM、Prox1等表达水平都大幅度降低且接近成年小鼠肝脏表达水平.本研究成功建立基于透明质酸的小鼠胎肝细胞的3D无血清培养体系,并可促进小鼠胎肝细胞的肝细胞功能进一步成熟.