虎杖苷对老年小鼠术后认知功能障碍及海马氧化应激和神经炎症的影响

摘要 目的：探讨虎杖苷对老年小鼠术后认知功能障碍及海马氧化应激和神经炎症的影响。方法：C57BL/6J雄性老年小鼠,18月龄,体重24~28 g,随机分为4组：假手术组（Sham组）、术后认知功能障碍组（POCD组）、低剂量虎杖苷组（PD1组）、高剂量虎杖苷组（PD2组）。Sham组老年小鼠仅接受水合氯醛麻醉,不行外科手术;POCD组老年小鼠接受腹部手术以制备POCD老年动物模型;PD1组小鼠制备POCD模型,并于术后即刻、24 h和48 h分别腹腔注射低剂量虎杖苷25 mg/kg;PD2组小鼠制备POCD模型,并于术后即刻、24 h和48 h分别腹腔注射高剂量虎杖苷50 mg/kg。使用Morris水迷宫行为学实验评估老年小鼠术后认知功能,使用Western blot法检测术后小鼠海马Nrf2、HO-1、HMGB1、Iba-1蛋白水平,检测海马活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量以反映术后海马氧化应激水平。结果：（1）与Sham组比较,POCD组老年小鼠术后逃离潜伏期显著增加（P<0.05）,穿越平台次数和目标象限停留时间下降（P<0.05）,海马Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,氧化应激产物ROS和MDA含量增加（P<0.05）,抗氧化酶SOD活性降低（P<0.05）,Iba-1和HMGB1蛋白表达水平增加（P<0.05）;（2）与POCD组比较,PD1组和PD2组小鼠术后逃离潜伏期缩短（P<0.05）,穿越平台次数和目标象限停留时间增多（P<0.05）,海马Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高（P<0.05）,ROS和MDA含量减少（P<0.05）,SOD活性增加（P<0.05）,Iba-1和HMGB1蛋白表达减少（P<0.05）。结论：虎杖苷可减轻老年小鼠术后认知功能损伤,缓解术后海马氧化应激和神经炎症,其机制可能与促进Nrf2/HO-1信号通路有关。     

不同剂量乳化异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

摘要 目的：探究不同剂量乳化异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法：将48只成年雄性大鼠随机分为六组：假手术组、缺血对照组、脂肪乳组、低剂量乳化异氟醚组、中剂量乳化异氟醚组和高剂量乳化异氟醚组,每组8只。检测血清中酶的含量,观察肝细胞损伤程度,直观的反应乳化异氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤的影响。结果：不同组别大鼠肝脏再灌注后ALT、AST、LDH和MDA含量,SOD活性和肝细胞坏死比例均具有显著差异,随着再灌注时间的延长,各组大鼠血清ALT、AST和LDH含量均明显增加（均P＜0.05）。再灌注后1 h、2 h和4 h中剂量乳化异氟醚组大鼠血清ALT、AST和LDH含量均显著低于缺血对照组、低剂量乳化异氟醚组和高剂量乳化异氟醚组（均P＜0.05）。中剂量乳化异氟醚组大鼠肝组织匀浆中MDA含量和肝细胞坏死比例均显著低于缺血对照组、低剂量乳化异氟醚组和高剂量乳化异氟醚组,SOD活性显著高于缺血对照组、低剂量乳化异氟醚组和高剂量乳化异氟醚组（均P＜0.05）。结论：中等剂量乳化异氟醚预处理组中血清中酶含量最低,肝组织匀浆中MDA含量最低,SOD活性水平最高,肝细胞损伤程度最轻,对大鼠肝脏缺血再灌注的保护作用最好。     

高压氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对其海马BDNF和GDNF基因表达的影响

目的:探讨高压氧预处理(Hyperbaric oxygen preconditioning, HBO-PC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对其海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)基因表达的影响。方法:将32只SD雄性大鼠随机分为对照组(Sham组)、高压氧对照组(HBO组)、模型组(MCAO组)、高压氧预处理+模型组(HBO+MCAO组),对HBO组和HBO+MCAO组连续给予高压氧预处理5天,随后对MCAO组和HBO+MCAO组进行右侧颈内动脉栓线术,建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,其他两组行假手术,于术后第7天对各组大鼠进行Morris水迷宫行为学检测和神经功能评分,检测结束后处死大鼠,进行神经功能缺损评分及氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色;通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠海马组织BDNF和GDNF的基因表达情况。结果:(1)神经功能评分提示:Sham组和HBO组均未出现神经功能障碍,MCAO组大鼠出现明显的神经功能障碍,MCAO+HBO组神经功能评分明显高于MCAO组(P0.05)。(2)TTC检测提示:Sham组和HBO组脑组织损伤一侧均未出现梗死灶,MCAO组出现较大的梗死面积比(25.45±8.75)%,MCAO+HBO组的梗死面积比(18.84±10.55)显著小于MCAO组,差异具有统计学意义(P 0.05)。(3)Western Blot检测显示:MCAO组BDNF与GDNF基因表达水平显著低于Sham组和HBO组,差异具有统计学意义(P 0.05),而MCAO+HBO组可以逆转这一效应,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论:高压氧预处理可以通过调节BDNF、GDNF基因表达,改善MCAO模型大鼠神经功能和认知水平,发挥神经保护作用。     

七氟醚对脑缺血再灌注损伤大鼠认知功能及海马S100β及PGRN表达的影响

摘要 目的：探索用七氟醚预处理后脑缺血再灌注损伤大鼠的认知功能变化情况以及海马细胞内钙结合蛋白（S100β）及颗粒蛋白前体（Progranulin,,PGRN）的表达水平。方法：选取SPF级雄性大鼠36只,按照随机数字表法分为假手术组（A组）、脑缺血再灌注损伤组（B组）、七氟醚预处理组（C组）,每组12只。B组和C组大鼠采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h,再灌注24 h,假手术组仅切开不插入线栓。术前七氟醚预处理组大鼠吸入体积分数3 %七氟醚和氧流量为2 L/min的混合气体,持续1 h,假手术组和脑缺血再灌注损伤组单纯吸入2 L /min的氧气。建模完成后采用大鼠神经功能缺损评分（modified neurological severity score,mNSS）评估大鼠的神经功能状况;Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习认知功能;Western Blot检测各组大鼠S100β和PGRN的表达情况。结果：（1）B、C组大鼠mNSS评分显著高于A组,C组评分较B组有明显降低（P＜0.05）;（2）与A组相比B、C两组逃逸潜伏期明显延长,C组与B组相比逃逸潜伏期显著缩短（P＜0.05）;（3）B、C组大鼠海马S100β和PGRN的表达较A组有显著上调,其中C组S100β表达较B组显著降低,PGRN表达显著升高（P＜0.05）。结论：本文通过观察七氟醚预处理对CIRI大鼠认知功能及海马S100β和PGRN蛋白表达水平的影响,发现七氟醚预处理对CIRI大鼠认知功能有显著提高,其作用机制与海马S100β和PGRN的表达密切相关,为进一步探索其作用机制提供参考证据。     

七氟醚通过影响外周血miR-340水平逆转脓毒症大鼠巨噬细胞吞噬功能抑制状态的机制

摘要 目的：探究七氟醚通过影响外周血miR-340水平逆转脓毒症大鼠巨噬细胞吞噬功能抑制状态的机制。方法：60只雄性Sprague-Dawley大鼠根据研究目的将大鼠分为对照组、脓毒症组和七氟醚组。通过RT-PCR分析各组大鼠外周血miR-340以及促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。统计各实验组大鼠的存活率。通过血琼脂平板对各组大鼠腹腔液和血液中的细菌进行计数。通过使用荧光显微镜测量吞噬率和吞噬指数。通过蛋白印迹分析p65和NF-κB的蛋白表达。结果：脓毒症组miR-340水平较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组miR-340水平较脓毒症组降低（P<0.05）。三组不同时间点存活率相比差异无统计学意义（P＞0.05）;第4 d、8 d脓毒症组大鼠存活率较对照组大鼠降低（P<0.05）,七氟醚组大鼠存活率较脓毒症组升高（P<0.05）。脓毒症组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达较脓毒症组降低（P<0.05）。脓毒症组腹腔液和血液中的细菌数量较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组腹腔液和血液中的细菌数量较脓毒症组减少（P<0.05）。血琼脂平板对各组大鼠腹腔液和血液中的细菌进行计数,脓毒症组腹腔液和血液中的细菌数量较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组腹腔液和血液中的细菌数量较脓毒症组减少（P<0.05）。脓毒症组p65和NF-κB的蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组p65和NF-κB的蛋白表达较脓毒症组降低（P<0.05）。结论：miR-340参与了脓毒症大鼠巨噬细胞吞噬功能调节,七氟醚通过降低外周血miR-340水平减少内毒素诱导的大鼠促炎细胞因子的释放,并恢复巨噬细胞吞噬功能。     

七氟醚预处理介导AMPKα1通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

摘要 目的：探讨七氟醚预处理介导腺苷酸环化激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）α1通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury, MIRI）的保护作用。方法：将清洁级雄性SD大鼠60只随机平分为三组：模型组、地佐辛组与七氟醚组,三组均建立MIRI模型。地佐辛组与模型组都在建模前24 h腹腔注射地佐辛40 μg/kg与等剂量生理盐水,七氟醚组吸入2.5 %七氟醚15 min。结果：所有大鼠在建模过程中均存活,无大鼠因严重并发症而舍弃。地佐辛组与七氟醚组再灌注后24 h与48 h的左心室收缩压、左心室舒张末期压、心肌梗死面积百分比、血清去甲肾上腺素含量、心脏组织AMPKα1和皮质激素调节激酶-1（glucocorticoid-regulated kinase-1,GK1）蛋白相对表达水平都低于模型组（P<0.05）,七氟醚组低于地佐辛组（P<0.05）。结论：七氟醚预处理可通过抑制大鼠MIRI的AMPKα1通路的激活和血清去甲肾上腺素释放,从而减少大鼠心肌梗死面积,并进一步促进心功能恢复正常。     

麻醉诱导前不同剂量盐酸戊乙奎醚对老年腹腔镜胆囊切除术患者氧化应激和血清S100β、NSE、BDNF的影响

摘要 目的：探讨麻醉诱导前不同剂量盐酸戊乙奎醚对老年腹腔镜胆囊切除术（LC）患者氧化应激和血清S100β、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、脑源性神经营养因子（BDNF）的影响。方法：根据随机数字表法将2019年1月~2022年12月期间在我院择期行LC的150例老年患者分为高剂量组（盐酸戊乙奎醚0.015 mg/kg）、中剂量组（盐酸戊乙奎醚0.01 mg/kg）和低剂量组（盐酸戊乙奎醚0.005 mg/kg）,每组各50例。对比三组血流动力学指标[心率（HR）、平均动脉压（MAP）]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和总抗氧化能力（T-AOC）]和血清S100β、NSE、BDNF水平、术后认知功能障碍（POCD）发生率及不良反应发生率。结果：中剂量组喉罩置入后5 min（T1）~停止气腹10 min后（T4）HR、MAP低于低剂量组、高剂量组（P<0.05）。中剂量组术后1d MDA低于低剂量组、高剂量组,SOD、T-AOC高于低剂量组、高剂量组（P<0.05）。中剂量组术后1d S100β、NSE低于低剂量组、高剂量组,BDNF高于低剂量组、高剂量组（P<0.05）。三组不良反应发生率对比未见统计学差异（P>0.05）。中剂量组POCD发生率低于低剂量组、高剂量组（P<0.05）。结论：老年LC患者麻醉诱导前应用0.01 mg/kg盐酸戊乙奎醚,可有效维持血流动力学稳定,减轻氧化应激和脑损伤程度。     

七氟醚对血管痴呆性大鼠海马区细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响及相关机制研究

摘要 目的：探讨与研究七氟醚对血管性痴呆（Vascular dementia,VaD）大鼠海马区细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达的影响及相关机制。方法：60只老年雄性SD大鼠随机平分为两组-七氟醚与对照组,两组大鼠都采用双侧颈动脉缺血再灌注法制作VaD模型,七氟醚组与对照组在建模前分别吸入0.11 %七氟醚与空气各45 min,分别于建模后7 d、14 d与21 d进行Morris水迷宫实验检测大鼠的逃避潜伏期;建模后21 d,采用TUNEL法测定各组大鼠海马组织细胞凋亡情况,采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定血清超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性与丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白相对表达水平。结果：两组各有26只大鼠顺利建立VaD模型,建模后7 d、14 d与21 d,七氟醚组的逃避潜伏期均显著少于对照组(P<0.05);建模后21 d,七氟醚组大鼠海马组织神经元细胞凋亡指数显著低于对照组(P<0.05);建模后21 d,七氟醚组大鼠血清SOD活性显著高于对照组,而MDA含量则显著低于对照组(P<0.05);建模后21 d,七氟醚组大鼠海马组织Bax、Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论：七氟醚干预可通过促进VaD大鼠海马组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达抑制细胞凋亡,并可平衡大鼠的氧化应激反应水平,从而促进大鼠记忆功能恢复正常。     

异氟醚麻醉通过导致神经干细胞的丢失降低幼鼠的神经发生和认知发育的实验研究

摘要 目的：探讨异氟醚麻醉通过导致神经干细胞的丢失降低幼鼠的神经发生和认知发育。方法：SPF级雄性Sprague Dawley(SD)幼年大鼠(30只)平分为两组-对照组与异氟醚组,对照组吸入30 %氧气,异氟醚组吸入1.5最低肺泡有效浓度(minimum alveolar concentration,MAC)异氟烷,检测两组神经干细胞丢失降低与幼鼠的神经发生、认知发育情况。结果：两组建模后6 h的逃避潜伏期、Longa评分对比差异无统计学意义(P>0.05),异氟醚组建模后12 h、24 h的逃避潜伏期、Longa评分高于对照组(P<0.05)。两组建模后6 h、12 h、24 h的下肢动脉血氧饱和度在组内与组间对比差异都无统计学意义(P>0.05)。异氟醚组建模后14 d的海马组织葡萄糖调节蛋白8(GRP8)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白相对表达水平都低于对照组(P<0.05)。结论：异氟醚麻醉可通过导致神经干细胞的丢失,抑制血清GRP8、GSK-3β的释放,从而影响幼鼠的神经发生和认知发育。     

沉默信息调节因子2在瑞芬太尼诱发的大鼠切口痛觉过敏中的作用及其机制研究

摘要 目的：探讨沉默信息调节因子2（Sirt2）在瑞芬太尼诱发的大鼠切口痛觉过敏中的作用及其机制。方法：18只SD大鼠采用随机数字表法分为I组（切口组,n=6）,RI组（瑞芬太尼+切口组,n=6）和RI+Sirt2过表达组（瑞芬太尼+切口+Sirt2过表达组,n=6）。I组在大鼠足底制作切口痛模型的同时在腹部注射等容量生理盐水30 min,RI组和RI+Sirt2过表达组在足底进行切口痛模型制作的同时并泵注瑞芬太尼30 min,RI+Sirt2过表达组在脊髓水平提前1周注射Sirt2过表达慢病毒处理。各组大鼠分别于泵注瑞芬太尼或生理盐水术前24 h,泵注结束后2 h、6 h、24 h和48 h测定机械刺激缩足反应阈值（MWT）及热缩足潜伏期（TWL）。行为学测试结束后处死大鼠,取L_3-5脊髓节段,采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Sirt2表达,超氧化物歧化酶2（SOD2）活性采用酶联免疫吸附法（ELISA）法测定,超氧阴离子水平和NADPH氧化酶活性采用化学发光法测定。结果：各组大鼠MWT和TWL的时间效应（F=683.602,624.033,均P<0.001）和组别×时间交互效应显著（F=9.142,4.550,均P<0.001）,说明MWT和TWL有随时间变化的趋势并且时间因素的作用有随组别的不同而不同,组间比较差异有统计学意义（F=93.157,25.176,均P<0.001）。与I组比较,RI组T_1-4时MWT降低,TWL缩短（P<0.05）;RI+Sirt2过表达组T₂、T₄时间点MWT降低,T_2-4时间点TWL缩短（P<0.05）。与RI组比较,RI+Sirt2过表达组T_3-4时间点MWT升高,T_2-4时间点TWL延长（P<0.05）。三组大鼠Sirt2蛋白表达比较差异有统计学意义（F=265.643,P<0.001）;与I组比较,RI组和RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织Sirt2表达水平减少（P<0.05）;与RI组比较,RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织Sirt2表达水平增加（P<0.05）。三组大鼠脊髓组织SOD2活性、NADPH氧化酶活性、超氧化物阴离子表达比较差异有统计学意义（F=13.543,14.813,19.675,均P<0.001）;与I组比较,RI组和RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织SOD2活性水平降低,NADPH氧化酶活性和超氧化物阴离子水平增加（P<0.05）;与RI组比较,RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织SOD2活性水平增加,NADPH氧化酶活性和超氧化物阴离子减低（P<0.05）。结论：Sirt2通过调节氧化应激水平参与瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏过程。     

亚麻木酚素对2型糖尿病小鼠学习记忆的影响及其机制初探

目的:研究亚麻木酚素(Flax ligands,FL)对2型糖尿病模型小鼠空间学习记忆的影响及其初步机制。方法:雄性C57小鼠随机分为对照组(Con)、糖尿病模型组(DM)及亚麻木酚素治疗组(DM+FL),DM与DM+FL组给予高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导2型糖尿病模型,之后DM+FL组灌胃给予FL 10 mg/kg,每日一次,连续14天,Con与DM组给予等量生理盐水。通过新物体识别试验、Morris水迷宫试验检测小鼠的学习记忆能力,利用Western blot技术测定小鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)及谷酰胺AMPA受体845位磷酸化(pGluA1-Ser845)蛋白表达水平。结果:与Con组比较,DM组小鼠新物体识别指数显著下降(P<0.01),在Morris水迷宫中逃避潜伏期延长(P<0.05),在目的象限内徘徊时间减少(P<0.01);小鼠海马区BDNF和pGluA1-Ser845的蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。与DM组相比,DM+FL组小鼠新物体识别指数显著提高(P<0.01),在Morris水迷宫中逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),目的象限徘徊时间显著增多(P<0.05);小鼠海马区BDNF和pGluA1-Ser845的蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论:亚麻木酚素对2型糖尿病小鼠学习记忆有明确改善作用,增加海马BDNF和pGlu-A1-Ser845的表达可能是其潜在作用机制。     

不同剂量异氟醚对中年小鼠认知功能及海马MBP和pNF-H表达的影响

目的:探讨异氟醚对中年小鼠认知功能及海马髓磷脂碱性蛋白(MBP, myelin basic protein)和磷酸化神经丝重亚单位(pNF-H,phosphorylated neurofilament heavy chain)表达的影响。方法:给予中年小鼠不同浓度的异氟醚处理,实验分为对照组和异氟醚处理组(0.5ISO,1.0ISO,1.5ISO),其中异氟醚组小鼠细胞分别给予0.5 MAC,1.0 MAC和1.5 MAC三个浓度的异氟醚处理4小时,对照组给予O_2处理4小时,随后通过水迷宫测试检测其学习记忆能力变化,通过免疫荧光检测海马形态结构及髓鞘相关蛋白MBP和pNF-H表达变化。结果:与对照组相比,(1)类临床浓度的异氟醚处理不影响中年小鼠的自发运动能力(总运动距离:sham:7275.17±1732.58; 0.5ISO:8057.58±1732.58; 1.0ISO:7540.98±1401.61; 1.5ISO:8243.79±1257.65;运动速度:sham:116.75±22.35; 0.5ISO:135.45±32.84; 1.0ISO:130.16±21.38; 1.5ISO:142.31±20.58),但1.0 MAC和1.5 MAC的异氟醚处理明显降低了中年小鼠在水迷宫目标象限的活动时间百分比(sham:58.62±13.70; 0.5ISO:48.92±7.22; 1.0ISO:31.23±13.16; 1.5ISO:30.29±15.76)(P 0.05),且高浓度异氟醚作用强于低浓度异氟醚;(2) 1.0 MAC和1.5 MAC的异氟醚处理明显下调了海马的MBP和p NF-H表达(MBP:sham:60.48±8.20; 0.5ISO:56.69±7.86; 1.0ISO:40.15±4.50; 1.5ISO:31.66±5.46; pNF-H:sham:62.23±9.45; 0.5ISO:55.47±6.98; 1.0ISO:40.16±6.97; 1.5ISO:30.94±5.89)(P 0.05),造成了小鼠海马髓鞘结构损伤,且高浓度损伤强于低浓度。结论:异氟醚可能通过下调中年小鼠海马MBP和pNF-H表达,破坏海马髓鞘完整性而损伤小鼠的学习认知能力。     

异氟烷对小鼠星型胶质细胞Sirt1和MAO-A基因表达的影响

目的:探讨异氟烷对小鼠星形胶质细胞Sirt1和MAO-A基因表达的影响。方法:给予体外培养的新生小鼠原代星形胶质细胞不同浓度异氟烷处理,实验分为对照组和异氟烷处理组(0.5ISO、1.0ISO、1.5ISO),其中异氟烷组细胞分别给予0.5 MAC、1.0MAC和1.5 MAC三个浓度的异氟烷处理2小时,对照组给予O_2处理2小时,然后提取细胞RNA和蛋白检测Sirt1和MAO-A的mRNA和蛋白表达变化。结果:与对照组相比,异氟烷下调小鼠星形胶质细胞的Sirt1和MAO-A mRNA和蛋白水平,异氟烷浓度越大下调越明显。结论:异氟烷可抑制小鼠星形胶质细胞的Sirt1和MAO-A基因表达。     

骨髓基质干细胞移植改善慢性酒精中毒大鼠脑损害的相关机制研究

目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stormal cells, BMSCs)静脉移植对慢性酒精中毒大鼠脑保护作用的相关机制。方法:体外分离、培养、扩增SD大鼠BMSCs。成年雄性SD大鼠随机分为慢性酒精中毒组、BMSCs回输组、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)回输组和对照组,每组7只。前三组用酒精灌胃8周建立慢性酒精中毒动物模型,对照组不造模(给予蔗糖灌胃),BMSCs回输组和PBS回输组于造模7周时一次性经尾静脉回输BMSCs或PBS。免疫印迹法检测海马Bcl-2、Bax、NGF、BDNF以及信号转导分子p-Akt的表达;反转录PCR检测海马神经生长因子(nerve growth factor, NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)。结果:BMSCs回输组海马抗凋亡蛋白Bcl-2表达高于其余三组(P0.05);促凋亡蛋白Bax表达低于慢性酒精中毒组(P0.01),与对照组无统计学差异(P=0.989)。BMSCs回输组鼠海马内NGF和BDNF m RNA和蛋白表达、p-Akt蛋白表达均高于其余三组(P0.05)。结论:静脉移植BMSCs能够明显改善慢性酒精中毒大鼠海马的细胞凋亡;其可能与自或旁分泌BDNF和NGF营养因子有关,且可能部分是通过激活PI3K/Akt通路实现。     

咖啡因预防阿尔兹海默病作用机制的研究

目的:探究咖啡因对阿尔茨海默病(AD)的预防作用。方法:乙醇提取茶叶中咖啡因;颈部皮下注射5%D-半乳糖生理盐水溶液,建立小鼠衰老模型;随机分为实验组(高、低剂量咖啡因)、阳性对照组、阴性对照组;另设正常对照组,连续给药4周。检测超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)的水平,取鼠脑海马组织以western blotting检测脑源性神经营养因子(BDNF)和胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)表达量,同时制作病理切片,行HE染色。结果:Western blot检测脑海马组织BDNF和p-ERK1/2的表达,阴性对照组的BDNF表达水平明显低于正常组、低剂量组和阳性对照组(P0.01);注射D-半乳糖的各组小鼠p-ERK1/2的表达明显低于正常组,阴性对照组与正常组比较,差异显著(P0.05)。模型组SOD活力明显低于正常对照组、高、低剂量咖啡因组和阳性对照组(P0.01),但MDA含量则相反。结论:咖啡因能提高衰老模型小鼠SOD活力,促进BDNF和p-ERK1/2的表达,延缓衰老进程,对阿尔茨海默病(AD)有预防作用。     

乌灵菌粉水提物对MCAO小鼠海马结构及BDNF,GABA水平的影响

目的:探讨乌灵菌粉(xylaria nigripes,XN)水提物对脑缺血再灌注模型小鼠海马形态和高分子量神经丝蛋白(neurofilament high molecular weight,NF-H)表达以及脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和γ氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的影响。方法:将32只昆明小鼠随机分为对照组(sham)、模型组(MCAO)和乌灵菌粉水提物低、高剂量组,即XN(L)和XN(H)。sham组进行假手术(皮肤切开,分离颈动脉),模型组(MCAO)及乌灵菌粉组进行大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO),sham组和MCAO组术后即刻腹腔注射生理盐水,乌灵菌粉组则注射不同剂量的乌灵菌粉水提物(0.3 g/kg和0.6 g/kg),术后24 h,通过尼氏染色、免疫组化染色和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa)分别观察海马结构和NF-H的表达情况以及BDNF和GABA水平。结果:(1)模型组小鼠海马出现大量的空洞样改变,细胞排列不整齐,XN(H)组空洞样改变减少;(2)模型组NF-H染色的积分光密度显著低于对照组和XN(H)组,差异具有统计学意义(P0.05);(3)Elisa检测显示,模型组海马BDNF和GABA水平显著低于对照组和XN(H)组,差异具有统计学意义(P0.01),而且模型组与XN(L)组的GABA水平之间也存在显著性差异(P0.05)。结论:乌灵菌粉水提物对MCAO模型小鼠海马结构具有保护作用,这一作用可能与其调节GABA和BDNF水平有关。     

天麻素对CUS大鼠抑郁样行为和海马BDNF/GDNF水平的影响

目的:探讨天麻素对慢性不可预见应激(CUS)大鼠抑郁样行为的改善作用及对海马脑源性神经营养因子(BDNF)及胶质原纤维酸性蛋白(GDNF)表达的影响。方法:将64只SD大鼠随机分为对照组(Sham),Sham+天麻素低、中、高剂量组,模型组(CUS),模型(CUS)+天麻素低、中、高剂量组,每组8只。对照组每天腹腔注射生理盐水(1 m L/kg),连续14天;Sham+天麻素低、中、高剂量组每天腹腔注射不同剂量的天麻素(50、100或者200 mg/kg),连续14天;模型组接受CUS造模,并且在造模结束后每天腹腔注射生理盐水(1 m L/kg),连续14天;模型+天麻素低、中、高剂量组在CUS造模结束后每天腹腔注射不同剂量的天麻素(50、100或者200 mg/kg),持续14天。随后,通过糖水偏好实验和强迫游泳实验检测各组大鼠的抑郁样行为,在行为学检测结束后处死大鼠,通过Elisa检测海马GFAP和BDNF的表达情况。结果:(1)慢性不可预见应激(CUS)可以导致明显的抑郁样行为,包括糖水偏好减少(P0.05)和强迫游泳不动时间增加(P0.01),CUS组大鼠海马GFAP和BDNF水平下降(P0.01)。(2)一定剂量(100和200 mg/Kg)天麻素干预可以缓解CUS大鼠的抑郁行为,CUS与CUS+GAS(M)组(P0.05)以及CUS与CUS+GAS(H)组之间(P0.01)存在显著性差异。(3)中高剂量的天麻素可以恢复CUS大鼠海马的BDNF和GDNF水平,CUS与CUS+GAS(M)组(P0.05)以及CUS与CUS+GAS(H)组之间(P0.05)的BDNF和GDNF水平存在显著性差异。结论:天麻素可以缓解CUS模型大鼠抑郁样行为,恢复CUS模型大鼠海马的BDNF和GDNF水平。     

Necrostatin-1 Against Sevoflurane-Induced Cognitive Dysfunction Involves Activation of BDNF/TrkB Pathway and Inhibition of Necroptosis in Aged Rats

Postoperative cognitive dysfunction (POCD) induced by anesthesia or surgery has become a common complication in the aged population. Sevoflurane, a clinical inhalation anesthetic, could stimulate calcium overload and necroptosis to POCD. In addition, necroptosis inhibitor necrostatin-1 (Nec-1) alleviated cognitive impairment caused by multiple causes, including postoperative cognitive impairment. However, whether Nec-1 exerts a neuroprotective effect on POCD via calcium and necroptosis remains unclear. We anesthetized Sprague–Dawley rats with sevoflurane to construct the POCD model and to explore the mechanism underlying neuroprotective effects of Nec-1 in POCD. Rats were treated with Nec-1 (6.25 mg/kg) 1 h prior to anesthesia. Open field test and Morris water maze were employed to detect the cognitive function. In this study, rats exposed to sevoflurane displayed cognitive dysfunction without changes in spontaneous activity; however, the sevoflurane-induced POCD could be relieved by Nec-1 pretreatment. Nec-1 decreased sevoflurane-induced calcium overload and calpain activity in the hippocampus. In addition, Nec-1 alleviated the expression of p-RIPK1, RIPK1, p-RIPK3, RIPK3, p-MLKL and MLKL. Furthermore, Nec-1 remarkably increased BDNF and p-TrkB/TrkB expression in the hippocampus of aged rats. Ultimately, our research manifests evidence that Nec-1 may play a neuroprotective role against sevoflurane-induced cognitive impairment via the increase of BDNF/TrkB and suppression of necroptosis-related pathway.