基于流式细胞术快速检测人鼻黏膜组织淋巴细胞亚群的实验研究

目的：基于流式细胞术检测正常人的鼻黏膜组织中的淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T、NK、CD19+B)的比例,初步探讨 鼻局部黏膜免疫功能的意义,为鼻局部黏膜免疫性疾病的研究提供更多的参考。方法：用鼻黏膜刮匙获取21 例正常人的鼻黏膜 组织,并抽取其外周血2 mL。采用流式细胞术分别检测其鼻黏膜和外周血中的淋巴细胞亚群(包括CD3+T、CD4+T、CD8+T、NK、 CD19+B)分别所占的比例。结果：鼻黏膜和外周血的淋巴细胞亚群存在很大差异,与外周血相比,CD3+T 比例增加（t=15.34,P<0. 0001),CD4+T 比例降低(t=5.952,P<0.0001)、CD8+T 比例增加(t=12.44,P<0.0001)、NK 比例降低(t=4.865,P<0.0001)、CD19+B 比例降 低(t=15.56,P<0.0001),CD4+T/CD8+T 降低。结论：流式细胞术可以用来检测鼻黏膜的淋巴细胞亚群,鼻黏膜的淋巴细胞亚群和外 周血的淋巴细胞亚群存在很大差异,这种差异体现鼻黏膜组织独特的局部黏膜免疫功能,本方法为变应性鼻炎的研究提供了新 的研究途径。     

生殖器疱疹初发患者外周血淋巴细胞检测结果分析

目的检测生殖器疱疹初发患者（GH）外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞的表达水平,探讨其发病机制与细胞免疫功能之间的关系。方法应用流式细胞仪检测20例初发生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞的表达水平,并与60例复发性生殖器疱疹患者（RGH）、35例健康对照者外周血检测结果相比较。结果（1）初发组和对照组相比,除NK细胞降低差异有显著性外,其他差异无显著性;（2）初发组与复发组相比,初发组T细胞、CD4^＋细胞、CD4^＋／CD8^＋均高于复发组,CD8^＋细胞百分比低于后者,差异有显著性;B细胞、NK细胞比例差异无显著性;（3）复发组与对照组相比,外周血中T细胞、CD4^＋细胞、NK细胞所占比例,CD4^＋／CD8^＋均降低,差异有显著性;CD8^＋细胞百分比升高,差异有显著性;B细胞比例差异无显著性。结论生殖器疱疹初发患者存在细胞免疫功能异常。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T 细胞亚群与血清HBV DNA 载量 及HBeAg 滴度相关性分析

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血T细胞亚群与血清HBV DNA载量及HbeAg滴度的关系。方法:选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBV DNA载量及HbeAg滴度。结果:慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3+T、CD4+T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义(P<0.05或0.01;而CD8+T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义(P<0.05或0.01)。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8+T细胞亚群百分数呈正相关(r=0.567,P<0.01),与CD4+/CD8+T细胞亚群百分数比值呈负相关(r=-0.601,P<0.01),而与CD3+T、CD4+T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBV DNA水平及HbeAg滴度与CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞百分数及CD4+/CD8+T细胞百分数均无相关性(P>0.05)。结论:不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBV DNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

淋巴细胞亚群成员研究进展

淋巴细胞是人体重要的免疫细胞,占外周血白细胞总数的20﹪~45﹪,主要分为T细胞、B细胞和NK细胞三大类。根据细胞表面标志及功能特征,将淋巴细胞亚群分为CD3~+CD4~+辅助性T细胞、CD3~+CD8~+的细胞毒性T细胞、CD19~+B细胞、CD16~+CD56~+NK细胞。随着基础免疫学及免疫学技术的不断发展,临床和科研工作者不断地将淋巴细胞亚群细化并发现一些新的亚群,包括γδT细胞、Th1/Th2细胞、Th17细胞、Th9细胞、Tfh细胞、Treg细胞、Breg细胞、NKT细胞和NKB细胞等,淋巴细胞亚群的内容也随之被赋予了新的定义,现将近年来淋巴细胞亚群的研究进展进行综述。     

山西省健康成年人淋巴细胞亚群正常参考值范围

目的:建立山西省健康成人外周血淋巴细胞亚群的正常参考值范围,为机体免疫状态的分析和肿瘤患者的免疫评估提供理论依据。方法:选取山西省1 238例健康成人体检人群,采用流式细胞术测定外周血淋巴细胞亚群的绝对计数和相对计数。结果:确定了健康成人外周血淋巴细胞表达水平,并发现CD3~+T细胞相对计数和绝对计数、CD4~+T细胞相对计数、CD8~+T细胞相对计数和绝对计数、NK细胞相对计数和绝对计数、CD19细胞相对计数和绝对计数、CD4/CD8比值在不同年龄组间存在显著差异性(P0.05);不同性别之间CD8~+T细胞相对计数、CD4~+T细胞绝对计数和CD19细胞绝对计数无统计学意义,CD3~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞相对计数和绝对计数、CD4~+T细胞、CD19细胞相对计数均存在显著差异(P0.05)。结论:初步建立了山西省健康成年人外周血淋巴细胞亚群参考值范围,为机体免疫功能的评价和肿瘤免疫治疗、诊断提供了参考依据。     

多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群分析及与预后因子的相关性

目的通过对多发性骨髓瘤（MM）患者外周血淋巴细胞亚群的检测以评价MM患者机体的免疫功能状态。方法采用流式细胞术检测36例MM患者和25例健康志愿者外周血T、B淋巴细胞、NK细胞及CD4＋CD25＋T细胞的表达。结果与正常对照组相比,MM患者外周血的CD4、CD19细胞的表达显著下调,CD8细胞的表达显著上调,CD4/CD8比值则显著降低（P〈0.05或〈0.01）;MM患者外周血的CD4＋CD25＋T细胞占CD3＋T细胞的比例明显增高（P〈0.01）,且与血清中的β2-MG浓度成正相关（γ=0.56,P〈0.05）。结论 MM患者体内存在淋巴细胞亚群的异常表达、CD4＋CD25＋Treg细胞的异常扩增,可能是MM患者体内广泛存在免疫缺陷的一个主要原因。     

非小细胞肺癌患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者细胞化疗前后T淋巴细胞亚群的变化及其意义.方法:采用流式细胞术检测NSCLC患者及健康对照者外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞的比例.结果:与对照组比较,NSCLC患者化疗前及化疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞含量均显著降低(P＜0.01);化疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞比例与化疗前比较均显著升高(P＜0.05);化疗前后CD8+细胞比例无显著变化(P＞0.05).治疗后疾病控制组(DCR)患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞均显著高于治疗后进展(PD)组患者组(P＜0.05);CD8+细胞的比例无显著性变化(P＞0.05).结论:NSCLC患者细胞免疫功能低下,通过流式细胞术检测患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞的变化对评估患者的细胞免疫功能及肿瘤化疗疗效具有重要的临床意义.     

反复呼吸道感染儿童血清维生素A、维生素E水平与免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群、NK细胞及骨密度的关系分析

摘要 目的：探讨反复呼吸道感染（RRTI）儿童血清维生素A、维生素E水平与免疫球蛋白（Ig）、T淋巴细胞亚群、NK细胞及骨密度的关系。方法：选择2018年2月至2020年12月我院儿科收治的107例RRTI患儿（感染组）和83例同期于我院体检的健康儿童（对照组）为研究对象,检测两组血清维生素A、维生素E水平、Ig水平,外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞占比以及骨密度。分析维生素A、维生素E与Ig、T淋巴细胞亚群、NK细胞及骨密度的相关性。结果：感染组血清维生素A、维生素E、IgG、IgA、IgM及外周血CD3⁺T细胞百分比、CD4⁺T细胞百分比、CD3^-CD56⁺ NK细胞百分比、CD56brightNK细胞百分比、CD56dimNK细胞百分比、桡骨和胫骨骨密度均低于对照组（P＜0.05）,外周血CD8⁺T细胞百分比高于对照组（P＜0.05）。血清维生素A及维生素E水平与外周血CD8⁺T细胞百分比呈负相关（P＜0.05）,与IgG、IgA、IgM水平,外周血CD3⁺ T细胞百分比、CD4⁺T细胞百分比、CD3^-CD56⁺ NK细胞百分比、CD56brightNK细胞百分比、CD56dimNK细胞百分比、桡骨和胫骨骨密度呈正相关（P＜0.05）。结论：RRTI患儿血清维生素A、维生素E水平明显降低,且与免疫功能障碍和骨密度降低有关。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HBeAg滴度相关性分析

目的：探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HbeAg滴度的关系。方法：选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBVDNA载量及HbeAg滴度。结果：慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3可、CD4T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义（P〈0．05或0．01;而CD8＋T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义（P〈0．05或0．01）。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8T细胞亚群百分数呈正相关（r=0．567,P〈0．01）,与CD47CD8＋T细胞亚群百分数比值呈负相关（r=-0．601,P〈0．01）,而与CD3＋T、CD4＋T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBVDNA水平及HbeAg滴度与cD3＋1r、cD41、CD8叮细胞百分数及CD47CD8＋T细胞百分数均无相关性（P〉0．05）。结论：不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBVDNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

人类免疫缺陷病毒阴性隐球菌性脑膜炎患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的分析人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)阴性隐球菌性脑膜炎(Cryptococcal meningitis,CM)患者外周血淋巴细胞亚群改变特点,深化对隐球菌病发病机制的认识。方法筛选HIV阴性CM患者31例和健康献血员21例进行淋巴细胞亚群分析,CM患者根据是否存在免疫抑制基础疾病分为两个亚组,比较3组研究对象淋巴细胞亚群中B、NK、CD_4~+T、CD_8~+T细胞亚群,CD_4~+T及CD_8~+T细胞的第二信号受体CD28表达比例及CD_8~+T细胞激活标记物HLA-DR、CD38的表达水平。结果有基础病CM组B、NK、CD_4~+T和CD_8~+T 4种亚群中位数依次为56×10~6/L、86×10~6/L、218×10~6/L、164×10~6/L,显著低于健康对照组的223×10~6/L、280×10~6/L、695×10~6/L、521×10~6/L(P值均0.001),同时存在CD_8~+T细胞激活亚群比例较健康对照显著升高。无基础病CM患者上述4种细胞亚群中位数依次为128×10~6/L、128×10~6/L、567×10~6/L、527×10~6/L,除CD_8~+T细胞计数水平与健康对照相似以外,B(P=0.02)、NK(P=0.002)和CD_4~+T细胞(P=0.03)计数均低于健康对照,其CD_8~+T细胞激活亚群比例与健康对照组相似。CD_4~+T和CD_8~+T细胞的CD28表达水平在3组间未见显著差异。结论 HIV阴性CM患者,无论是否存在免疫抑制基础疾病,外周血B、NK及CD_4~+T 3种细胞计数可出现同时减少。     

化疗在中晚期非小细胞肺癌患者中对淋巴细胞亚群影响分析

目的:探讨化疗在中晚期非小细胞肺癌患者中对淋巴细胞亚群的影响。方法:随机抽取本院收治的60例中晚期非小细胞肺癌患者编为实验组进行化疗,另选取同期体检的50例健康志愿者作为对照组。随访12月-15月,采用流式细胞仪技术分别对两组外周血淋巴细胞亚群进行检测计数。结果:两组间相比,实验组患者的CD3+、CD4+、NK细胞的数量以及CD4+/CD8+比值均低于对照组(P<0.05),而CD8+细胞的比例却高于对照组。化疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均较化疗前升高(P<0.05),但CD8+不变(P>0.05)。结论:应用化疗治疗中晚期非小细胞肺癌,可明显改善患者的免疫功能。     

The distribution of the major peripheral blood T, B and NK cell subsets does not predict the clinical outcome of Graves' disease patients after methimazole therapy

Biological markers capable of predicting the clinical outcome of antithyroid drug therapy could be clinically useful in selecting the modality of treatment for Graves' disease, but at present they are unavailable. In the present study we prospectively explore the value of 22 different peripheral blood T, B and NK lymphocyte subsets to predict remission and relapse in a group of 42 Graves' disease patients. Eighteen patients were studied at diagnosis, before treatment, and 24 during antithyroid drug therapy. All cases were followed-up for at least one year after finishing an 18 month cycle of methimazole therapy. The combination of flow cytometry and 3- color immunofluorescence did not reveal significant differences in the distribution of the major peripheral blood T, B and NK cell subsets between the relapsed patients and those in remission, both in the groups studied at diagnosis and in those analyzed during the cycle of antithyroid drug therapy. In our search for a prognostic marker for relapse prediction we found that some lymphoid subpopulations such as total B cells, total NK and NK CD8+ cells showed high sensitivity (88-100%). In turn, other subsets such as TCD8+, total T and B cells expressing the CD25 antigen displayed high specificity (77-88%).     

肝癌患者体液免疫和细胞免疫的变化情况

目的:探讨肝癌患者体液免疫和细胞免疫功能状况。方法:选取2012年1月20日至2015年3月25日在西宁市第一人民医院就诊的126例肝癌患者和87名健康者作为研究对象,采用免疫透射比浊法测定血清IgA、IgG水平,采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+和CD4~+/CD8~+水平。结果:与健康对照组相比,肝癌组患者血清中IgA和IgG水平显著升高(P0.05),外周血中T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+和CD4~+/CD8~+显著降低(P0.05),CD8~+显著升高(P0.05)。结论:肝癌患者体液免疫功能增强,细胞免疫功能降低,外周血T细胞亚群和血清免疫球蛋白的检测对了解肝癌患者的病情、预后以及免疫治疗具有一定的临床指导意义。     

儿童传染性单核细胞增多症淋巴细胞亚群的变化及意义

目的 通过对儿童传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)外周血淋巴细胞亚群的检测,探讨其细胞免疫功能变化与疾病的关系.方法 采用流式细胞仪对35例IM患儿外周血T、B和NK淋巴细胞亚群进行检测,30例健康儿童作为对照组;对患儿中的7例进行治疗2周后细胞亚群的测定以观察动态变化;对患儿进行外周血异型淋巴细胞计数.结果 IM患儿CD3、CD8 T淋巴细胞水平明显升高,CD19、NK、CD4和CD4/CD8值水平明显降低,分别与正常对照组比较差异均有统计学意义.7例IM患儿治疗2周后T细胞亚群的测定值与入院时比较差异有统计学意义,治疗前CD4、CD4/CD8值低于治疗后,治疗前CD8高于治疗后.IM患儿急性期CD8、CD4/CD8水平与患儿外周血异型淋巴细胞百分率(≤10％和＞10％)的差异有统计学意义.结论 检测淋巴细胞亚群对评估IM患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值.     

Gender effect on in vitro lymphocyte subset levels of healthy individuals

Differences in gender immune response have resulted in differences in immune protection and susceptibility to inflammatory diseases. Cultured peripheral blood mononuclear cells (PBMC) are widely used in immunomodulation studies, yet the influence of gender is usually not considered. We examined the effect of in vitro culture and phytohaemagglutinin (PHA) stimulation on PBMC lymphocyte subsets using flowcytometry. Full blood counts of whole blood showed higher levels of lymphocyte in male subjects. Lymphocyte subsets enumeration revealed higher NK cell counts in males and higher B cells in females. Cultured PBMC resulted in significant increases in B and total T cell percentages among females and NK cells among males. PHA stimulated significantly increased percentages of NK and total T cells in males and total activated T cells (CD69+) in females. Our results showed significant gender differences in lymphocyte subsets in cultured conditions. This may affect experimental outcome.     

OKT-3/cyclophosphamide up-regulation of peripheral blood killer-lymphocyte subsets in human cancer patients.

We have initiated a clinical trial in 7 patients using low-dose OKT-3 monoclonal antibody, 50 mcg, followed 24 hours later by low-dose cyclophosphamide, 300 mg/m2. Complete data in 5 patients indicate a significant up-regulation of the number of peripheral blood lymphocytes. Before treatment, the mean (+/- standard deviation) total lymphocyte count was 524 (+/- 364)/mm3. After 4 weeks the value rose 64% to 860 (+/- 243)/mm3, (P less than .025, Student's t test). Similar changes were observed for the CD3+, CD4+, CD8+, and CD16+ (NK) lymphocyte subsets. The mean CD3+ population rose from 372 (+/- 325)/mm3 to 593 (+/- 300)/mm3 (P less than .025), the mean CD4+ group rose from 209 (+/- 142)/mm3 to 321 (+/- 104)/mm3 (P less than .05), the CD8+ cells rose from 218 (+/- 205)/mm3 to 341 (+/- 197)/mm3 (P less than .05), and the CD16+ (NK cells) rose from 80 (+/- 37)/mm3 to 157 (+/- 63)/mm3 (P less than .025). Statistically significant up-regulation occurred for all patients. The fraction of each lymphocyte subset and the T4/T8 ratio did not change. OKT-3/cyclophosphamide appears to modulate the number of circulating lymphocytes in human cancer patients.     

Immunologic and clinical aspects of natural killer cells in human leukemia

We have studied peripheral-blood, splenic and bone marrow natural killer (NK) activity in patients with leukemia. These studies demonstrated that leukemic patients displayed defective NK activity in all of these tissues. However, NK defect could be corrected by culture of effector cells with interleukin-2 (IL-2). The phenotypic analysis of IL-2 cultures showed clearly the heterogeneity of lymphocyte subsets. The characterization studies demonstrated that CD56+, CD3- NK cells manifested most potent lysis of leukemia, CD56+, CD3+ T cells mediated some, but low, antileukemia activity and CD56-, CD3+ T lymphocytes were devoid of cytotoxicity.