通用引物双重PCR在节肢动物物种鉴定中的应用

【目的】本研究旨在使用基于线粒体基因通用引物的双重PCR技术同时扩增单一样本中两条标记基因,从而达到简化节肢动物物种鉴定流程的目的。【方法】在一次PCR实验中同时加入可扩增线粒体COI基因和16S rDNA两个不同分子标记的引物,对3纲8目14科的14种节肢动物物种标本的基因组DNA进行扩增;扩增产物经电泳和胶回收后测序,并BLAST在线搜索相似序列,验证基于通用引物的双重PCR在不同的动物类群中用于物种鉴定的有效性。【结果】应用基于COI和16S rDNA的引物从分属于3纲8目14科的14种节肢动物基因组DNA中均可成功扩增目的基因;扩增产物测序结果进一步证实了扩增的准确性。【结论】通过本方法进行物种的分子鉴定,不仅可以保证物种鉴定的高准确率,还可以明显减少时间与DNA样本量的消耗,这对需要快速准确鉴定物种或珍稀的材料样本十分重要。     

FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用

目的建立并评价FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用。方法采用whatman FTA-DNA直接提取法从25个不同种属的45株培养的菌株和6例临床标本中提取病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。配制不同浓度的孢子悬液探索该方法的检测限和安全性。结果 45株菌株扩增后均能得到1条清晰的DNA扩增片段,并成功测序。应用该方法亦成功从腹水、胸水、口腔拭子、宫颈拭子来源的临床标本中直接提取DNA并成功鉴定病原真菌。该DNA提取方法联合降落PCR能检测到1.0×103个cell/mL的孢子悬液,1.0×104个cell/mL及以下浓度的孢子悬液可以被FTA卡完全灭活。结论 FTA-DNA直接提取法可快速有效地从培养的菌株及部分临床标本中提取并保存病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。     

泰泽病原体基因组DNA提取方法的建立

目的　提取泰泽病原体基因组DNA ,为建立该菌基因组文库奠定基础。方法　使用密度梯度离心结合酶解消化方法、酶解消化方法、本研究建立方法即过滤盐析离心法 ,从感染肝脏组织纯化泰泽病原体 ,并比较三种方法纯化泰泽病原体效果 ;采用氯化苄法、试剂盒、酚法提取泰泽病原体基因组DNA ,并比较三种方法提取基因组DNA质量 ;鉴定酚法提取泰泽病原体基因组DNA特异性。结果　使用过滤盐析离心法从感染肝脏组织纯化泰泽病原体 ,采用酚法提取其基因组DNA ,所获得的基因组DNA特异性好、纯度高、DNA片段长度大于 5 0kb ,且均一性好 ,无降解。结论　本研究首次成功提取泰泽病原体基因组DNA ,可用于多种分子生物学实验     

"DNA粗提取与鉴定"实验的改进

新高中《生物》教材中 ,增加了“DNA的粗提取与鉴定”的实验 ,目的在于 :1 )学会 DNA的粗提取和鉴定方法 ;2 )观察提取出来的 DNA。该实验拓宽了与物理学和化学的联系 ,强调了发现知识的过程与方法 ,减少学生需要记忆的文字内容。同时也强调生物学的科学地位。在 2 0 0 0年 1 2月由人民教育出版社出版的《生物·第二册》(试验修订本·必修 )里 ,要求学生做“DNA的粗提取与鉴定”的实验 ,该实验以新鲜鸡血为原料 ,其提取流程略。而在与之相配套的由人民教育出版社出版的《教师教学用书》里 ,又介绍了另一种“DNA粗提取和鉴定”的方法 ,…     

一种提取麦红吸浆虫基因组DNA的方法

介绍一种可从单头麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana(Gehin)成虫、幼虫和蛹成功地提取基因组DNA的方法。经检测提取DNA样品浓度为100～200ng/μL,纯度在1.4～1.6范围之间,以此为模板,可顺利地进行RAPD引物扩增。该提取方法简单、安全、经济,可为小型昆虫基因组DNA的提取提供参考。     

小型昆虫DNA提取时匀浆方法的改进

应用改进的方法方便地提取了高质量的单头蚜虫基因组DNA ,有助于解决小型昆虫研究工作中单头虫体的DNA提取困难问题     

基于RAPD分析用百合DNA的提取

对百合DNA的提取过程进行改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法。结果表明,该方法提取的百合DNA在1％的琼脂糖胶电泳上为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,分子量大于23kb,OD200nm/OD280nm值为1．80-2．00。DNA的质量符合百合RAPD（随机扩增多态DNA）分析要求,在百合遗传多态性分析和品种分子鉴定中具有良好的应用前景．     

Chelex-100快速提取放线菌DNA作为PCR扩增模板

旨在建立有效扩增16S rRNA基因序列的放线菌DNA快速提取的方法。采用Chelex-100法提取放线菌DNA,使用PCR扩增16S rRNA基因序列评价提取核酸的质量。结果显示,Chelex-100法能够在10 min之内从放线菌中快速提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,符合理论预期结果。因此,Chelex-100法提取放线菌DNA可以作为16S rRNA基因序列PCR扩增的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于放线菌菌株大规模地筛选和分类鉴定。     

对中国黄牛毛囊DNA六种提取方法的研究

本研究的目的是寻求一种简便、高效和对黄牛没有创伤的DNA提取方法,从而为黄牛基因组DNA的制备提供最优可行方案。本研究以中国黄牛毛囊作为DNA的提取材料,设计了离心柱法、磁珠法、SDS法、CTAB法、碱裂解法和煮沸法等6种DNA提取方法,然后分别对提取的DNA样本进行了分光光度计鉴定、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。发现在这6种方法中,耗时最短且成本最低的是煮沸法;DNA纯度、浓度和完整度最理想的是CTAB法;而磁珠法可实现大规模高通量提取,能减少实验者的手动工作量,并且适用于基因测序各种常规操作。以此得出,适用于基因测序的6种黄牛毛囊DNA提取方法中最优的是磁珠法。本研究对中国黄牛毛囊DNA的6种提取方法进行了总结和分析,为今后提取毛囊DNA的研究提供了借鉴和参考。     

野生芋属植物干叶片DNA的提取及PCR扩增

野生芋属植物体内多糖、色素、酚类等次生物质含量较高,严重影响从中提取的DNA的质量。针对这一问题,作者以6种芋属植物的干叶片为材料,摸索出一种适合芋属植物的DNA提取方法,并对提取的DNA进行了纯度鉴定和PCR检测,结果表明此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,样品DNA的质量和纯度较高,可用于下游分子生物学操作。