高压电场不可逆电穿孔诱发A549肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：不可逆电穿孔是治疗肿瘤的新兴技术,本文探讨高压电场引起的不可逆电穿孔诱发A549肺癌细胞凋亡的特点。方法：选择处于生长周期的A549细胞,共分为A—G7个组进行研究,其中A组为不施加电场的空白对照组,B-G组为实验组,B组施加500V／cm强度高压电场,G组施加1750V／cm的高压电场,BG组之间各组的高压电场强度间隔为250V／cm。采取细胞抑制实验、不可逆电穿孔示踪实验、细胞凋亡实验,检验A549细胞细胞凋亡与电场强度的关系。结果：①各实验组与对照组、各实验组之间的细胞抑制率,均存在显著性差异（P〈0．05）;②电场强度≥1000V／cm时,细胞不可逆电穿孔率明显增加,有统计学意义（P〈0．05）;电场强度≥1500V／cm时,细胞不可逆电穿孔率增加不明显,无统计学意义（P〉0．05）;③电场强度≥1250V／cm时,细胞早期凋亡率明显增加,有统计学意义（P〈0．05）。结论：高压电场不可逆电穿孔诱发A549肺癌细胞发生早期凋亡的强度为1250V／cm,发生晚期凋亡的强度为1500V／cm,且凋亡率随着电场强度的增加持续升高。这对于高压电场不可逆电穿孔效应引起的肿瘤细胞凋亡机制的研究具有重要意义。     

应用免疫荧光菌球法快速检测霍乱弧菌的实验研究

1材料与方法1．1实验材料1．1．1菌种E1－Tor生物型霍乱弧菌,菌号103,小川血清型,由军事医学科学院提供。1．1．2免疫荧光血清购于长春生物制品研究所,批号940205。1．1．3培养基Ⅰ号增菌液（碱性胨水）,Ⅱ号增菌液（碱性陈水中加入1：200000亚碲酸钾、1：100000十二烷基磺酸钠）,由本室制备。双氢链霉素洗衣粉亚硫酸钾琼脂培养基（双洗琼脂培养基）,购手上海市卫生防疫站。1．1．4器材①接种环：单环接种环内径为3nun,多环接种环用4个内径3rum环排列成花瓣状,由本室自制。②微量吸引器：由上海生物实验研究所提供。③荧光显微镜…     

两种萤火虫荧光素酶活性检测方法的一致性比较

目的：比较2种萤火虫荧光素酶活性检测方法的一致性。方法：分别采用化学发光技术（Che）及活体光学成像技术（Bio）,从细胞和动物水平检测在转染以萤火虫荧光素酶为报告基因的载体pCI-AAA-Fluc-neo后不同时间点,萤火虫荧光素酶的表达强度。结果：在细胞和动物水平,萤火虫荧光素酶的表达强度均随时间推移逐步递减。在HepG2细胞,萤火虫荧光素酶表达持续96h,活性从24h的2781±220mV（1．6×10^6±2．3×10^5光子）降至96h的49±3．5mV（6．4×10^4±2．5×10^4光子）。在动物水平得到相似的结果,BALB／c小鼠萤火虫荧光素酶表达持续20d,其活性从1d的16592±409mV（1．9×10^8±3．6×10^6光子）降至20d的798±139mV（3．37×10^5±3．8×10^4光子）。通过一致性检验,2种检测方法在细胞和动物水平的直线回归方程分别为lgChe=1．186·lgBio-3．764（r=-0．937,P〈0．001）和lgChe=0．451·lgBio＋0．64（r=0．915,P〈0．001）;进一步将理论数据与实验数据进行配对t检验,二者无统计学差异（P〉0．05）。结论：2种检测方法是一致的;从整个实验过程来看,活体光学成像技术较化学发光法更为简便、直观,可量化地对同一个体连续检测,减少了个体间差异和实验动物用量。     

烯效唑对萝卜、大头菜和榨菜的增产效应

萝卜（Raphanussativus）品种浙大长,8月16日播种,8月20日出苗,密度30cm×35cm,每公亩（100m2）915株。大头菜（Brassicajunceavar.metarrhiza）为甘蓝型,8月16日播种,8月20日出苗,密度40cm×35cm,每公亩990株。榨菜（Brassicejunceavar．tumide）品种缩头种,育苗移栽,密度50cm×30cm,每公亩615株。萝卜和大头菜于块根膨大中期（10月31日,出苗后72日。时萝卜直径为3～3．5cm,大头菜直径为2．5～3cm）,榨菜于块茎膨大后期（3月23日,收前20日）喷施烯效唑（浙江省农科院化工厂产品）。结果（表1）表明：1．喷施烯效哇可控制…     

大蒜幼苗基因组DNA的快速提取

1准备工作（1）试剂配制0．5mol／LEDTA3×ssc（0．45mol／LNaCl＋0．045mol／L柠檬酸三钢）0．1×10×ssc5mol／L高氯酸钠研磨缓冲液3×0．1mol／LEDTA1％SDSpH7．0（2）材料市售优质大蒜,去皮洗净,于培养皿中摆放整齐,加自来水浸没基部,使蒜瓣能充分吸收水分。室内萌发,每天换水2次,蒜苗长出4片叶时即可使用。2操作过程门）取幼苗109,剪碎后放入研钵中,加入等量（W／V）研磨缓冲液,研磨成浆状物。（2）将浆状物转移到磨口三角瓶内,加等体积的氯佑一异戊醇（2《：1＊／V）混合液;加瓶塞,剧烈摇动30see,以脱除组织蛋…     

大花补血草优株无性系的建立

1植物名称大花补血草（Limoniumsinuatum）。2材料类别花茎。3培养条件（1）诱导芽萌发及增殖培养基：MS＋6－BA0．6mg／L（单位下同）＋3％蔗糖。（2）生根培养基：1／2MS＋NAA0·5＋1．5％蔗糖。以上培养基均加0．8％琼脂,PH5．8。培养温度25士2『C,光照度为2000IX,每天光照12h。4生长与分化情况4．1脑芽的增殖培养取大花补血草基部抽出的长5～10cm花茎,去除具有花芽的顶部,用带有l～2个、最多3个腋芽的中部茎作为外植体,在清水中用脱胎棉洗净,70％酒精浸lmin,10％安替福民溶液浸13～15min表面灭菌后,用无菌水冲洗4次,切…     

胰高血糖素样肽1对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的：探讨胰高血糖素样肽1（glucagon like peptide 1,GLP-1）对脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞（VEC）炎性反应的影响。方法：以体外培养的人动脉VEC为研究模型,将细胞分为四组（对照组、LPS刺激组、LPS±GLP-1组、GLP-1组）,Rhodamin-Phalloidin检测肌动蛋白骨架F-actin分布,用苏木素-伊红（HE）染色观察细胞间连接的形态特征,用示踪剂Rhodamine Bisothiocyanate-Dextran检测VECs单层通透性变化改变,酶联免疫吸附实验检测细胞分泌白介素（IL）-6和IL-8的变化。结果：GLP-1（100nM）可减少LPS（1μg／mL）刺激后细胞肌动蛋白骨架F-actin应力纤维的形成,并抑制LPS刺激后细胞间连接的中断。Rhodamine B isothiocyanate-Dextran细胞通透性检测结果显示：GLP-1可明显降低LPS刺激引起的VEC通透性增加[由（2．57±0．19）×10^-5cm／s降至（2．10±0．18）×10^-5cm／s,P〈0．05]。此外,GLP-1可抑制LPS刺激后VEC中炎性细胞因子IL-6和IL-8的表达[分别由（42130±6522）pg／ml降至（27478±5096）pg／ml和（18376±1561）pg／ml降至（14414±927）pg／ml,均P〈0．05]。结论：GLP-1可对抗LPS刺激引起的VEC炎症反应和细胞通透性增加．改善LPS诱导的内皮细胞炎性损伤。     

Rapidarc联合呼吸门控在非小细胞肺癌放疗中的应用

目的：探讨RapidArc联合呼吸门控技术在非小细胞肺癌放射治疗中的应用。方法：选取未能手术的ⅢA-ⅢB期非小细胞肺癌患者19例,分别在自由呼吸（FB）和呼吸门控系统RC状态下为每例患者设计FB下的IMRT（IMRT-FB）、双弧RapidArc（Arc-FB）和RC下的IMRT（IMRT-RC）、双弧RapidArc（Arc-RC）4种放疗计划。评价四种计划和Arc-RC治疗的疗效及副反应。结果：除1例患者由于经济原因中途退出,其他患者均顺利完成治疗。PTV的平均体积由FB下的296 cm3减少到了RC下的210.2cm3;RC下的双肺平均体积为3817.4 cm3,较FB增加了34%;Arc-RC计划靶区的CI、HI及D2%、D98%、V95,与IMRT-FB、Arc-FB、IMRT-RC计划差异无统计学意义,但双肺的V20、V30、V40、V50、及平均剂量（Dmean）明显低于后三者（P〈0.05）。总有效率为72.23%（13例）。急性放射性食管炎1、2级发生率分别为61.1%、16.7%,急性放射性肺炎1、2级发生率分别为77.8%、11.1%,骨髓抑制1、2、3级分别为61.1%、22.2%、11.1%,急性心脏损伤1、2级发生率分别为83.3%、16.7%。结论：RapidArc联合呼吸门控在非小细胞肺癌精确放疗中具有减少正常组织受照剂量体积和提高放疗精度的作用。     

汞浸种对小麦种子萌发过程中与抗胁迫有关的一些生理特性和物质含量的影响

小麦（Triticumsp．）超大穗种子用5×10－4mol·L－1HgCl2溶液（对照用蒸馏水）浸种24h后再以水冲洗,置培养皿中于23℃暗处培养。重复3次。每24h取幼苗测定1次下列物质含量或生理指标：细胞膜透性,按电导法（见薛应龙．植物生理实验．北京：高教出版社,1985．151）;MDA含量,按林植芳方法「植物学报,1984,26（6）：605」;＊＊D活性按Gianmoplitis方法（PlantPhysiol,1977,59：315）;POD活性,按愈创木酚氧化比色法（见张志良．植物生理学实验指导．北京：高教出版社,1987．154）;CAT活性,按过氧化氢分解量法（见山东农…     

卵裂球电脉冲融合制作昆明小鼠四倍体胚胎

为制作四倍体小鼠胚胎 ,用 4种脉冲电压强度 (6 0 0、 80 0、 10 0 0和 12 0 0V/cm )和 3种脉冲宽度(10、 30和 5 0 μs)组合 ,对 2 -细胞昆明小鼠胚胎做了融合实验。 6 0 0V/cm× 5 0 μs和 12 0 0V/cm× 30 μs两种组合融合率最高 ,分别为 91 6 %和 93 0 % ;而 6 0 0V/cm× 10 μs和 12 0 0V/cm× 5 0 μs时均显著低于其他各种组合 ,融合率分别为 5 8 9%和 6 0 2 %。以上结果表明 ,一定的脉冲电压强度是胚胎融合的必要条件 ,而脉冲宽度是影响胚胎融合及其后期发育的关键因素。激光共聚焦显微镜对融合后两细胞核的观察暗示 ,细胞核的迁移、靠近和融合是自发过程     

水稻原生质体电融合时的参数选择（简报）

水稻（0862和台北309）原生质体电融合最佳条件是交流电场强度250V／cm,频率600kHz;高压直流脉冲幅值1．65kV／cm,脉冲持续时间50μs,脉冲间隔时间3．0S。融合率最高可达275％．在上述条件下,电场处理基本不影响原生质体的活力。     

PCR-SSCP分析方法的优化

目的：优化PCR-SSCP分析方法。方法：选择野生型Kir2．3质粒和突变型Kir2．3（2123L）质粒为样本,其PCR结果的鉴定采用2％的琼脂糖凝胶EB显色,SSCP分析采用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶DNA银染显色。PCR产物变性比较了三种方法：即碱变性、SDS变性、直接变性。聚丙烯酰胺凝胶根据丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺及甘油的比例设计了六个实验组,每组采用两种条件电泳,即：30mA恒流快速电泳和100V恒流过夜电泳。结果：选择直接变性的PCR产物作为变性上样液,并确定了三种凝胶配及该条件下适用的电泳条件。即：丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为49比1,凝胶中含1％甘油,4℃,500V高压电泳3min接着30mA恒流快速电泳3h;丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为49比1,凝胶中含5％甘油,4℃,500V高压电泳3min接着30mA恒流快速电泳3h;丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29比1,凝胶中不合甘油,4℃,500V高压电泳3min接着100V恒流过夜电泳12h。结论：条件优化的PCR-SSCP是一种筛查基因突变简便、有效的实验方法。     

LuxAB标记的N2106-L在小麦根圈的定植动态

目的研究小麦PGPR（植物根际促生菌）菌株的个体生态学及其在小麦根圈的定植动态。方法采用三亲本杂交法将发光酶基因luxAB转人具有固氮能力的小麦根际促生菌Azotobacter N2106菌株中,获得标记菌株N2106-L,将标记菌株接种到灭菌和非灭菌的黄褐土、红壤和黄潮土中研究其存活状况,采用根盒试验追踪标记菌株在小麦根圈的定植动态。结果标记菌株N2106-L具有发光活性和对km、str、tet三种抗生素的抗性,且具有较好的遗传稳定性。N2106-L在灭菌土壤中的数量稍高于非灭菌土壤;在3种土壤中的数量依次为：黄褐土〉黄潮土〉红壤。N2106-L在小麦根表定植密度大于根际定植密度;在小麦根际,小麦播种10d时标记菌株在0-2cm深度根际土壤定植达到最大值（2．17±0．25）×10^6CFU／g土,20d时在2-4cm深度的根际土壤中达到最高定植水平（3．92±0．47）×10^5CFU／g土;在小麦根表,标记菌株在小麦播种10d时在所有深度的根段均达到最高定植水平,0-2cm根段定植密度为（3．60±0．60）×10^6CFU／g鲜根,12cm以下根段达到（2．78±0．56）×10^4CFU／g鲜根。结论标记菌株随着根的伸长不断向根尖方向扩散,且较为稳定地在小麦根圈定植,研究结果为小麦PGPR菌株的应用提供了可靠实验数据。     

重组人生长激素治疗生长激素缺乏症的疗效观察

目的：正确评价重组人生长激素（rhGH）治疗儿童生长激素缺乏症（GHD）的疗效。方法：GHD患儿47例,给予rhGH0．1U／（kg．d）,疗程3个月,并对其疗效进行观察。结果：身高（height）由（122±17．67）cm增至（125．32±17．50）cm,生长速率（growthrate）由〈4cm／年增加到（10．40±3．74）cm／年。血清碱性磷酸酶（AKP）由（207±48．11）IU／L增至（261±45．29）IU／L。I型前胶原羧基端伸展肽（PICP）由（97．80±14．94）ng／ml增至（119．50±24．10）ng／ml值。肌酐（Cr）由（40．20±8．28）umol／L变为（36．50±8．33）umol／L值。结论：rhGH是治疗GHD有效的药物。     

三种手术入路显露男性后尿道的比较（英文）

目的：评价经耻骨上、耻骨下及会阴三种手术入路暴露尿道膜部的优劣。方法：对35具成年男性尸体标本解剖,测量并比较耻骨上缘中点（A）、耻骨下缘中点（B）及会阴部两坐骨结节连线中点（c）分男11到尿道球膜部连接处（D）、前列腺尖（E）及膀胱颈（F）的距离及相关角度;对另20具成年男性尸体标本分别经3种手术入路显露后尿道,标记可能损伤的组织器官并评分。结果：AD=（6．5±0．5）cm,BD=（2．2±0．5）cm,CD=（3．4±0．6）cm,其中BD〈CD〈AD（P〈0．05,SNK法）;AE=（6．6±0．5）cm,BE=（3．0±0．5）cm,CE=（4．4±0．7）cm,其中BE〈CE〈AE（P〈0．05,SNK法）;AF=（5．7±0．6）cm,BF=（4．5±0．5）cm,CF=（6．5±0．6）cm,其中BF〈AF〈CF（P〈0．05,SNK法）。各点连线所成角度中,ZEAD（仅。）=（9．3±2．0）。∠EBD（α2）=（17．4±3．8）°,ZECD（α3）=（9．2±1．6）°,其中α1与α2有显著性差异（P〈0．05,t=11．1）,α3与α2有显著性差异（P〈0．05,t=-12．1）,α1与α3无显著性差异（P〉O．05,t=-0．13）;∠FAE（β1）=（22．7±2．6）°,∠FBE（β2）=（32．9±6．4）°,∠FCE（β3）=（15．0±3．2）°,其中β2〉β1〉β3（P〈0．05,SNK法）。经耻骨上入路损伤评分为13分,经耻骨下为18分,经会阴为15分。结论：暴露从优到劣依次为经耻骨下、经耻骨上、经会阴;损伤从大到小依次为经耻骨下、经会阴、经耻骨上部分。     

弦月的组织培养与快速繁殖

1 植物名称 弦月[Senecio radicans（L．F．）Sch．Bip．1,实验用植株购于苏州花卉市场。 2 材料类别 当年生枝条的带节茎段。 3 培养条件 以MS为基本培养基。（1）初代培养基：不加任何激素的MS基本培养基（MS0培养基）：（2）增殖培养基：MS＋6-BA 0．2mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．1;（3）生根培养基：1／2MS＋NAA0．8。     

大鼠肺鳞癌模型两种麻醉方法的比较

目的探讨不同麻醉方法建立大鼠肺鳞癌模型的差异。方法体重180～220g Wistar大鼠,依不同麻醉方法分为2组：实验Ⅰ组（110只）用0．3％戊巴比妥钠麻醉;实验Ⅱ组（80只）基础麻醉用盐酸氯胺酮44mg／kg,然后乙醚吸入麻醉。两组均采用额镜直视法,灌注3-甲基胆蒽（MCA）、二乙基亚硝胺（DEN）与普通碘油混悬液于大鼠左下叶支气管。结果麻醉显效时间和维持时间分别为：Ⅰ组,（23．50±1．98）min,（246．56±15．46）min,Ⅱ组,（3．05±0．45）min,（12．47±1．35）min,两组间有显著性差异（P〈0．01）;灌注成功率、存活率、诱癌率分别为：Ⅰ组94．55％,48．08％,90．00％,Ⅱ组93．75％,90．67％,92．65％,两组成功率、诱癌率差异无显著性（P〉0．05）,存活率有显著差异（P〈0．01）。分别于不同时间处死大鼠,2组基本病理过程相同。结论戊巴比妥钠麻醉剂量易控制,以小剂量灌注雄性大鼠为佳;盐酸氯胺酮与乙醚复合麻醉较难控制,但速度快,实用性强。     

不同强度高压电场对A549肺癌细胞肿瘤生物学特性的影响

目的：探讨不同强度高压电场对A549肺癌细胞肿瘤转移生物学特性的影响。方法：选择处于生长周期的A549细胞,共分为7个组进行研究,其中A-F组为实验组,G组为不施加电场的空白对照组,A施加500V/cm强度高压电场,F组施加1750V/cm的高压电场,电压场强间隔为250V/cm。采取粘附实验、侵袭及转移实验,检验A549细胞在不同强度高压电场中,其肿瘤生物学转移特性的改变。结果：①各实验组与对照组、各实验组之间的细胞粘附能力,均存在显著性差异（P〈0.05）;②电场强度≥750V/cm时,各实验组之间、及其与对照组之间的细胞迁移能力,存在显著性差异（P〈0.05）;③电场强度≥1000V/cm时,各组与对照组间的细胞侵袭能力,存在显著性差异（P〈0.05）;④电场强度为1000-1250V/cm的各组与1500-1750V/cm各组间的细胞侵袭能力,存在显著性差异,有统计学意义（P〈0.05）。结论：不同强度的电场抑制A549肺癌细胞的程度不同,随着强度的增加,A549细胞粘附、迁移和侵袭能力的抑制现象依次出现,并随着电场强度的增加其抑制程度也持续增加。     

孤啡肽对大鼠顶叶皮层神经元瞬时外向钾电流的抑制作用

目的：研究孤啡肽（N／OFQ）对大鼠顶叶皮层神经元瞬时外向钾电流（IA）的影响,初步探讨其作用的通道动力学机制。方法：采用全细胞膜片钳技术,观察N／OFQ对急性分离的大鼠顶叶皮层神经元IA的作用。结果：①0．1μmol／L N／OFQ使IA幅值由给药前的（5356．1±361．6）pA下降为（4113．3±312．7）pA,抑制率为23．20％±2．17％（P〈0．01,n=10）。②0．1μmol／L N／OFQ使IA的电流-电压（I-V）曲线降低（P〈0．01,n=10）。③0．1μmol／L N／OFQ使,IA激活曲线的半数激活电压（V1／2）和斜率因子（κ）分别由给药前的（-9．2±2．5）mV和（20．4±2．3）mV变为给药后的（30．6±3．7）mV（P〈0．01,n=8）和（22．6±2．1）mV（P〉0．05,n=8）。④0．1μmol／L N／OFQ使IA失活曲线的半数失活电压（V1／2）和斜率因子（κ）分别由给药前的（-64．1±3．2）mV和（21．5±2．1）mV变为给药后的（-55．9±1．9）mV（P〈0．05,n=5）和（19．6±2．2）mV（P〉0．05,n=5）。结论：N／OFQ可抑制大鼠顶叶皮层神经元IA,使其激活曲线、失活曲线均右移。     

对节白蜡的组织培养及植株再生

1植物名称对节白蜡（Fnainushupehen－sis）,又名湖北白蜡,湖北俗称对节树、望乡树。2材料类别幼嫩茎段,取自本校盆景园20～30年生中型盆景桩（高50～60cm）当年新梢。3培养条件分化培养基：（1）MS＋6－BA2．5mg·L－1（单位下同）;（2）MS＋6－BA5．0;（3）MS＋6BA10．0;（4）WPM＋6-BA2．5;（5）WPM＋6－BA5．0;（6）WPM-6-BA10．0;（7）DKW＋6－BA2．5;（8）DKW＋6－BA5．0;（9）DKW＋6－BA10．0。生根培养基：（1）WPM＋IBA0．5;（11）WPM＋IBA2．0。以上培养基均附加蔗糖30g·L－1,琼脂6g·L-1…