浅谈重组人血白蛋白的进展

人血白蛋白是临床上使用量最大的血液制品,但血浆来源的人血白蛋白由于来源受到限制,远不能满足市场的需要,而且人血浆有携带病毒的风险,利用基因重组等技术研制的重组人血白蛋白克服了这些不足,成为发展的趋势。表达系统是重组人血白蛋白生产过程中极其重要的环节,本文主要综述了重组人血白蛋白表达系统的研究进展和国内外产业化现状。     

重组人血白蛋白临床研究进展

人血白蛋白是人血浆中最丰富的蛋白质,具有许多重要的生理特性,用途广泛。目前主要以毕赤酵母作为宿主表达的重组人血白蛋白,开发了重组人血白蛋白的纯化技术,同时对重组人血白蛋白结构进行了分析,结果表明与人血浆白蛋白基本一致。临床研究结果表明重组人血白蛋白与人血浆白蛋白有着几乎相同的疗效和安全性。综述了重组人血白蛋白的性质结构分析及酵母表达系统;重点介绍了重组人血白蛋白在临床方面研究进展。     

一种新剂型基因工程干扰素稳定性的研究

目前国内市场上的干扰素多数为含有人血白蛋白的冻干制剂 ,为消除人血白蛋白带来的血源性感染 ,并方便临床用药 ,我们根据基因工程药物的特点 ,将冻干基因工程干扰素改造成干扰素注射液 ,选择合适的缓冲系统和非人血白蛋白稳定剂 ,在 4℃和 3 7℃下的稳定性进行了研究 ,确定了一种稳定的新型干扰素注射液。     

热稳定性试验对人血白蛋白质量的影响

目的观察热稳定性试验对人血白蛋白质量的影响。方法依据《中国药典》三部对人血白蛋白待检品进行热稳定性试验,并通过可见异物、多聚体含量和纯度等指标对其进行稳定性评价。结果人血白蛋白经热稳定性试验后可见异物检查无肉眼可见的明显变化。热稳定性试验对多聚体含量有明显影响(t=-2.65,P=0.0160.05),试验品多聚体含量增加。试验品和对照品纯度变化有显著差异(t=4.19,P=0.0010.05;t=12.87,P=0.0000.01)。SDS-PAGE结果显示,试验品有两条杂带含量增多,表明主带人血白蛋白含量降低,纯度下降。结论人血白蛋白应严格按照《中国药典》规定的温度进行储存和运输,确保制品的质量。     

积极开展QC活动,努力提高生物制品质量

生物制品是用于防疫、临床急救治疗和诊断的具有生物活性的制品,其质量的优劣直接关系到千百万人的健康和生命安危。近几掂来兰州生研所通过开展ＱＣ活动,动员职工参与质量管理,围绕制品质量选定课题,使一些制品的质量显著提高,降低了损失率,如狂犬病疫苗,精制破伤风抗毒素和人血白蛋白等制品,直接增创经济效益约１５００万元,为在生物制品生产中开展ＱＣ活动积累了一些经验。本文叙述了本所开展ＱＣ活动的做法,成效和体会     

国内人血白蛋白市场供需状况分析及应对策略

目的：解决国内人血白蛋白供需不平衡。方法：运用经济学中的供给与需求理论分析国内人血白蛋白市场供需状况,采用SWOT矩阵对整个人血白蛋白市场环境进行系统分析。结果与结论：由于原料供应短缺、需求旺盛等原因造成国内市场人血白蛋白供不应求,政府应在原料供应、价格干预、监管、宣传方面采取有效措施,同时企业应配合政府积极生产,加强技术创新等共同来协调人血白蛋白的供需平衡。     

静脉注射用人血免疫球蛋白工艺改进

以低温乙醇法组份Ⅱ (ＣｏｈｎⅡ )为原料 ,经 4%乙醇低温沉淀和ＤＥＡＥ -ＳｅｐｈａｄｅｘＡ -5 0吸附提纯并加人血白蛋白保护的完整ＩｇＧ制备方法是一种较理想的方法[1] 。该法制取的ＩＶＩＧ安全有效 ,符合世界卫生组织 (ＷＨＯ)专家委员会制定的质量要求[2 ] 。具有ｐＨ中性 ,更接近人体生理ｐＨ ;ＩｇＧ亚类俱全且相对构成比同正常人血浆 ;保持了ＩｇＧ分子结构完整 ,生物学功能完全等诸多优点。加入人血白蛋白保护剂可有效地保护ＩｇＧ分子在制备过程中免遭潜在构型的变化 ,保持较低的抗补体活性[1 4] 。不同厂家ＩＶＩＧ制品中人血…     

引起重组白蛋白电泳检测假性结果的研究

目的:建立SDS-PAGE结合pH值变化对重组人血白蛋白电泳检测假性结果的分析方法。方法:采用还原SDS-PAGE(12.5%)和Native-PAGE(8%～25%),将包含重组人血白蛋白的发酵上清液的pH值分别调为4.0、5.0、6.0、6.5、7.5、8.0、9.0和10.0进行电泳分析。结果:在不同的pH值条件下,重组人血白蛋白会出现不同程度的降解。结论:包含重组人血白蛋白的发酵液中存在不同种类的蛋白酶,导致重组人血白蛋白的假性降解。     

应用PCR方法检测部分血液制品中HCV-RNA

应用市售丙型肝炎ＰＣＲ检测试剂盒,对１９９４ １９９６年用不同病毒灭活工艺生产的人凝血因子类制品、人静注丙球和人血白蛋白进行ＨＣＶ ＲＮＡ检测。结果表明,检测六种血液制品共２１批,１批阳性,占４８％。     

利用转基因猪生产人血清白蛋白

人血清白蛋白 (HSA)是人血浆中重要组成部分 ,它在肝脏中合成进入血液 ,可运输脂类物质、维持血浆渗透压和增强机体免疫力。这在医学临床上广泛应用于治疗失血、创伤、癌症所引起的休克、水肿和低蛋白血症等病。但是目前医疗中所用的HSA由人血中提取。这种人血资源也极为有限 ,且有的还含有各种不同的病原污染 ,不能广泛地取材。为扩大HSA的来源 ,湖北省农科院生物技术研究所郑新民、华文君、肖作焕等研究人员利用转基因猪生产HSA已基本获得成功。他们用含猪血清白蛋白测翼序列的微小人血清白蛋白基因、用显微注射法导入猪的基因组中 ,…     

人血白蛋白的分离及提纯研究进展

改进白蛋白工艺,加强产品稳定性及治疗对确保患者生命健康具有重要的意义,同时也节省企业资源,提高企业经济效益。目前国内血液制品发展面临较大的挑战,不仅受原材料血浆供应紧张的影响,同时缺乏自身产品多样性,因此对白蛋白分离及提纯工艺进行分析,提高人血白蛋白产品纯度,获得有效的血液制品是当前血液制品生产的重点及难点。本文将综述人血白蛋白分离及提纯的相关工艺要求,旨在为人血白蛋白的制备提供指导。     

冻干神经生长因子活性稳定性试验研究

用不同的物质作保护剂冻干纯化鼠神经生长因子,经检定以人血白蛋白作为赋形剂和保护剂冻干神经生长因子制品外观洁白细腻,结构强度良好,生物活性符合要求,残存水分低于３％。采用留样观察法检测其稳定性,将制品放置４℃～８℃,在０、０．５、１、２、３、６、９、１２、１８、２４、２５个月分别测定其各自的活性。结果表明神经生长因子冻干制品在４℃～８℃保存,２５个月仍然保持原有生物活性     

人胎盘血白蛋白的制造工艺比较和临床反应观察

一九七○年以来,我们按照硫酸铵盐析——辛酸钠处理——低温冻干法生产冻干人胎盘血白蛋白,在临床使用中效果良好,受到工农兵的普遍欢迎。但也偶有个别批号制品对个别人引起一定程度的临床反应,这是生产中需要解决的一个重要问题。鉴于现行《人胎盘血白蛋白制检规程》仍然保留了某些细节不同的制造工艺,这些不同工艺的制品,究竟在质量上有何差别,在临床使用中的反应如何,对此,我们初步进行了以下的生产试验比较和观察,结果总结于下。     

血液制品的现状与展望

血液制品特指血浆蛋白制品和相应的重组制品。根据临床应用的效能,血液制品可以分为白蛋白类、免疫球蛋白类、凝血因子类和微量蛋白制品等不同种类。血浆白蛋白制品是最早应用于战伤救治的血液制品,高纯白蛋白、重组白蛋白以及重组白蛋白融合药物的研发和上市开创了血液制品的新局面。肌肉注射用免疫球蛋白因其制备工艺相对简单,使用方便,价格低廉且不良反应可以接受而一直在临床实践中应用;静脉注射用免疫球蛋白随着新的适应症不断发现,其应用范围越来越广;皮下注射用免疫球蛋白的出现使免疫球蛋白的使用更加方便,已经成为静脉注射用免疫球蛋白安全有效的替代品;针对特定病原体的特异性免疫球蛋白在临床上更具有不可替代的作用。凝血因子和重组凝血因子类制品主要用于相应的先天性遗传性缺陷患者,纤维蛋白原、因子Ⅶ、因子Ⅷ、von Willebrand因子复合物、因子Ⅸ和凝血酶原复合物、因子Ⅺ、因子ⅩⅢ等制品的应用取得了良好的治疗效果。因子Ⅶa和活化凝血酶原复合物对于治疗产生凝血因子抑制物的血友病病人具有十分明显的效果。纤维蛋白原类制品和凝血酶在外科止血方面发挥着重要的作用。多种微量血浆蛋白制品已经上市,如蛋白C、抗凝血酶、α1-抗胰蛋白酶和组织纤溶酶原激活剂等。部分微量血浆蛋白制品也在研发和临床试验过程中,如C1-抑制剂、补体系统Ⅰ因子、α2-巨球蛋白、血清胆碱酯酶、铜蓝蛋白以及纤维结合蛋白等。尽管多种重组血浆蛋白制品已经上市,血浆来源的制品仍将具有其不可替代的特殊地位,血浆蛋白新品种的研发仍是热点。目前,我国血液制品的研发与国外存在着较大的差距,我国血液制品企业面临着机遇与挑战。     

构造和性质类似于天然型、产量为10g/l的重组白蛋白

绿十字公司与岛津制作所、东京农工大学合作在大阪召开的第67届日本生物化学学会大会上发表了重组人血清白蛋白和天然人血清白蛋白的化学性质和构造极类似。加速开发重组人血清白蛋白。现在用10吨罐生产。但是,每升培养上清生产率提高到10g(血清白蛋白)。绿十字公司从1994年2月25日开始这种重组人血清白蛋白的第二阶段临床试验。     

冻干干扰素保护剂(稳定剂)的筛选

取同一批重组人干扰素α2a原液,分别加入A,B,C,D,E五种冻干保护剂,按《中国生物制品规程》方法进行冻干,检测其效价,外观,水分含量,内毒素含量,以现行干扰素生产使用的人血白蛋白C保护剂作为对照,结果显示,使用A,D,E保护剂制品在40℃放置4个月,效价降低了45％－60％,使用B保护剂的制品稳定性最好,在40℃放置4个月,效价仅下降了35％,B保护剂配方为最佳保护剂配方。     

显色基质鲎试剂法在人血白蛋白热原检测中的应用

为了对显色基质法测定人血白蛋白中的内毒素含量方法进行探讨。以内毒素,鲎试剂及显色基质,在一定的条件下反应释放出对硝基苯胺(PNA),溶液呈现黄色,于波长545nm处比色读数,其产色深浅与内毒素浓度呈线性关系,从而定量测定出检品中内毒素含量。结果表明标准曲线的线性相关系数r≥0.98,人血白蛋白经3.3倍稀释后无干扰作用。显色基质法与家兔法比较,有灵敏、快速、能定量、重复性好的特点,可用于人血白蛋白内毒素含量的测定。     

HFRS疫苗佐剂吸附前后加入保护剂对其免疫原性的影响

为提高肾综合征出血热(HFRS)双价纯化疫苗抗原的有效利用率,在保证疫苗免疫效果的前提下,合理地降低疫苗的成本,确定最佳疫苗配制方法和最合适的疫苗浓缩倍数。将抗原含量不同的出血热纯化疫苗原液及疫苗配制的两种主要成分———人血白蛋白和A l(OH)3佐剂按不同的配制顺序配制成4批纯化疫苗,分别抽样,测其上清液中抗原量并做效力试验。结果表明人血白蛋白和A l(OH)3佐剂加入的顺序不同,配制的4批纯化疫苗上清液抗原量也不同,效力试验结果显示其中和抗体阳转率(PRNT)也有很大差别。因此在纯化疫苗的配制过程中,人血白蛋白和A l(OH)3的加入顺序影响到佐剂A l(OH)3对疫苗抗原的吸附,也影响到疫苗的免疫效果;先加A l(OH)3再加人血白蛋白的疫苗免疫效果要好于先加人血白蛋白再加A l(OH)3的疫苗。     

血液制品的科研策略分析

血液制品以健康人血液为原料,通过采用生物工程技术或分离纯化技术制备的具有生物活性的一类特殊制品,是宝贵的人源性生物类药品。在医疗急救（如创伤失血、烧伤等）、战伤抢救以及某些特定疾病（如血友病等）的预防和治疗上,有着不可替代的作用。血液制品主要包括人血白蛋白、各类免疫球蛋白、凝血因子、特殊蛋白及因子、纤维蛋白黏合剂等五大类。血液制品产业知识密集,技术含量高,工艺及质量标准高,多学科高度综合和相互交叉渗透,所需投入高,具有高风险的特性。     

两种微泡造影剂评价输卵管通畅性的临床效果观察

目的:研究全氟丙烷人血白蛋白微球注射液(简称全氟丙烷白蛋白)在评价输卵管通畅性的临床应用效果。方法:96例不孕症患者分为两组,分别应用全氟丙烷白蛋白和Sono Vue进行子宫输卵管造影,实时观察造影剂在子宫、输卵管及盆腔显影情况,判断输卵管通畅性并记录病人即时疼痛指数。其中全氟丙烷白蛋白组中19例进行X线子宫输卵管造影。结果:两组超声造影结果对比,显影清晰率、图像质量及即时疼痛指数无统计学差异,一致性较好。全氟丙烷白蛋白Hy Co Sy组19例同时进行X线子宫输卵管造影,两种方法一致程度较好。结论:应用全氟丙烷白蛋白进行子宫输卵管超声造影可作为临床评价输卵管通畅性的一种有效方法。