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1.
汉滩病毒核壳蛋白(NP)在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究 总被引:11,自引:0,他引:11
应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒76-118株(HTNV)核壳蛋白,将HTNVS基因插入杆状病毒转染质粒pAcYMIB的多角体基因启动子下游附近,与经Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染S19细胞,经空斑筛选获得了高效表达NP的重组杆状病毒(AcVHanS)。经SDS-PAGE和Western blot证实,表达产物与HTNV毒粒NP分子量均为50KD左右,紫外扫 相似文献
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Sasaki等在ProcNatlAcadSciUSA 2 0 0 0年第 4期上报道了一种不依赖甲硫氨酸的翻译起始方式[1] 。PSIV (Plautiastaliintestinevirus)是一种昆虫RNA病毒 ,属蟋蟀麻痹样病毒组 (Cricketparalysis likeviruses) ,为正链RNA病毒。属于该组的还有DCV、RhPV、HiPV等。该组病毒的理化性质与哺乳动物的小RNA病毒 (picornavirus)相似 ,但基因图 1 (A)PSIV基因组结构 ;(B)预测的外壳蛋白编码区上游的茎环结构组织不同。… 相似文献
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HCV核心蛋白免疫优势肽AA32—45抗原化抗体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
经定点突变,在抗HBsAg单克隆抗体重链V区产生一个XhoI位点并插入编码HCV核心蛋白免疫优势肽AA32 ̄45的互补寡核苷酸片段,构成抗原化VH基因。抗原化VH与人γ3恒区cDNA拼接成嵌合重链基因并与嵌合轻链基因共同构建成杆状病毒表达系统转移载体,经共转染筛选到重组病毒BacHL-E1和BacHL-E2,感染Sf9细胞分别表达Ig-E1和Ig-E2。Ig-E1与正常免疫球蛋白分子一样能形成四聚 相似文献
4.
将中国株HIV-1B亚型gp120全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游,构建成重组转座载体pFastBacI-gp120,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV-1的外膜糖蛋白gp120,SDS-PAGE和Western blot分析结果一致,证明表达了2种糖基化程度不同的gp120。 相似文献
5.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。 相似文献
6.
白细胞介素1(IL-1)是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素 1受体(IL-1R)结合而起作用。以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠I型可溶性白细胞介素1受体(sIL-1 RI)基因。以NIH/3T3细胞RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增得到小鼠sIL-IRI的cDNA,克隆至杆状病毒转移载体pAcGP67B,将转移重组质粒与野生病毒ACNPV DNA共转染昆虫细胞Sf9,经同源重组得到重组杆状病毒rACNPV。应用经纯化的rAcNPV感染昆虫细胞Sf9,表达获得重组的sIL-1RI。经对亲和层析样品的SDS-PAGE分析和对IL-1β生物活性阻断作用实验证实,表达产物能够与其配基结合,并且能够分泌至细胞培养上清中。 相似文献
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在昆虫细胞中高效表达蓝舌病毒VP7蛋白作为组特异性诊断抗原 总被引:6,自引:1,他引:5
对蓝舌病毒结构蛋白VP7作为组特异性诊断抗原进行了研究,将编码BTV13主要组特异性抗原VP7的S7cDNA插入杆状病毒表达载体pFastBac1,通过同源重组获得了重组杆状病毒evBacBTVP7。用此重组病毒感染昆虫细胞获得VP7蛋白的高效表达,表达量可占细胞蛋白总量的12.4%。 相似文献
8.
昆虫杆状病毒增效蛋白(enhancin)曾被称为病毒促进因子(synergisticfactor,SyF)或病毒增效因子(viralenhancingfactor,VEF),它长期以来被认为只存在于昆虫颗粒体病毒(Granulosisvirus,GV)中的一类蛋白质,已知有8种GV中含有增效蛋白。自Tanada[1~4]1959年从美洲一星粘虫(Pseudaletiaunipuncta,Pu)GV中分离出增效蛋白并证实它有增强PuMNPV的感染力后,一直很受人们关注。从它的作用机理到氨基酸序列… 相似文献
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汉滩病毒包膜糖蛋白G1和G2重组杆状病毒表达载体的构建与表达及其免疫原性 总被引:6,自引:0,他引:6
将汉滩病毒(HTNV)M基因插入杆状病毒转移质粒pAcYMIB多角体启动子下游附近,与Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染Sf9细胞,经空斑筛选获得了表达包膜糖蛋白(G1、G2)的重组杆状病毒(AcvHanM)。经纯化AcVHanMDNA的Southemblot证实,M基因正确插入了杆状病毒基因组中。用抗糖蛋白混合单克隆抗体和病人血清做免疫荧光染色,观察到细小的特异性荧光颗粒,呈典型的核周分布。免疫荧光检测还证实,重组糖蛋白与9株抗糖蛋白单抗均起反应,提示重组糖蛋白的抗原位点分布与病毒毒粒糖蛋白相同或相似,用放射免疫沉淀(RIP)分析仅显示G2带,且表达的G2分子量略小于病毒G2,这可能与两者的糖基化程度不同有关。研究还表明,重组糖蛋白具有细胞融合活性。 相似文献