高产融合子Q4413的形态学与生理生化特征的研究

本文通过对枯草芽孢杆菌BR151衍生株与北京棒杆菌1134衍生株的赖氨酸高产融合子Q4413株的形态学、生理生化特性等方面的研究,揭示了融合子与双亲株在这些方面的差异,为Q4413株确系双亲株的重组子或新的融合子增加了佐证.     

高产融合子Q4413的遗传学研究

本文通过对枯草芽孢杆菌BR151衍生株与北京棒杆菌1134衍生株的赖氨酸高产融合子Q4413的遗传型研究、生物量(菌体湿重、菌重、菌体体积和菌体密度)测定、DNA含量测定和GC比的研究,揭示了融合子在遗传学方面与双亲株之间的差异,进一步证实了该株确系稳定的重组子或新的融合子.     

细菌科间原生质体融合的研究

本文将赖氨酸产生菌——北京棒杆菌1134株进行标记,同时将枯草芽孢杆菌BR151菌株进一步标记后,进行科间原生质体融合的探讨,揭示了科间原生质体融合的可能性。经适宜的条件培养和预处理,再在适宜的条件下,酶解制备亲本株的原生质体,用PEG(MW6000)为聚合剂,经低温短时间处理,将1134衍生株与151衍生株的原生质体进行融合;并在改良的DM_3平皿上加入适量的细胞壁碎片(作引物)与适量的人血清白蛋白制剂,使其再生,结果棒杆菌(在酶解后2.5h.)与枯草芽孢杆菌(酶解后20min)的制备率均已达到99.98％以上,再生率分别达21.3％与90.8％以上。经适温培养48h后,从融合平皿上随机挑出若干个菌落。点种于CM母平皿上,再分别影印于10套选择培养基平皿上,进行鉴定,其融合率达到了3.9×10~(-4)。从菌落形态和菌体形态上可大体分为近1134类型,近151类型和中间类型三种。经连续传代五代后,从融合子中筛选山了几株在摇床上以甜菜糖蜜为原料。产酸水平捉高近一倍的稳定高产融合子。其中Q4413株的产酸率平均达6.56％,10立升小罐发酵产酸率6.52％,糖酸转化率为40.25％,经进一步验证,该菌株的产酸能力和遗传性均是稳定的,为远缘工业微生物育种开辟了新的可行途径。     

2—酮基—L—古龙酸高产融合子15的形态学及生理生化特征的研究

由地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｈ１９和２—酮基—Ｌ—古龙酸产生菌Ｓ１９的原生质体融合,得到了既能独立生长传代,又能产生２—酮基—Ｌ—古龙酸的１５号融合子。其菌落和菌体形态类似于Ｈ１９亲本,其生理生化特性也大多酷似Ｈ１９亲本而不同于Ｓ１９亲本。但其产生２—酮基—Ｌ—古龙酸的特性、乙醇氧化反应、石蕊牛奶产酸以及精氨酸双水解酶阴性等特点又酷似Ｓ１９亲本而不同于Ｈ１９亲本。其氧化酶反应、初始生长ｐＨ范围、苯丙氨酸和色氨酸脱氨酶反应则不同于双亲本。其菌体的氨基酸组份及含量也与双亲有一定差异。     

解淀粉芽胞杆菌SSY1菌株的稳定性研究

目的测定产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌SSY1株的稳定性。方法在适宜生长条件下连续传代30代。分别取第2、10、15、20、25和30代细菌,对其进行染色镜检、生化试验、药敏试验、产纤维素酶特性及动物安全性试验观察。结果传至第30代,细菌的形态、生化特性、产纤维素酶特性及药敏特性均未发生明显变化。结论产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌SSY1株稳定性良好,有望成为中药发酵菌种。     

土壤中大肠杆菌的分离纯化及鉴定

目的:从土壤中分离大肠杆菌并对其进行相关鉴定。方法:通过平板划线法分离纯化出菌落,通过革兰氏染色、生理生化(淀粉水解试验、石蕊牛奶试验、硫化氢试验、甲基红试验)反应,提取该菌DNA,用16S rRNA引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳及DNA序列测定和BLAST比对同源分析鉴定其微生物种类。结果:培养基中长出了单个菌落,制片观察显微镜下为革兰氏阴性杆菌,淀粉水解试验中滴加卢戈氏碘液出现透明圈;石蕊牛奶变紫色;无硫化铅沉淀;甲基红试验呈阳性;PCR产物电泳呈现预期1440bp扩增带,序列比对只与E.coli相同。结论:证实土壤中存在的杆菌为大肠杆菌。     

短乳杆菌与植物乳杆菌的发酵特性

【背景】目前对于酸菜发酵的研究主要关注点是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),有关短乳杆菌(Lactobacillus brevis)在酸菜方面的研究报道很少。【目的】为了挖掘短乳杆菌的发酵性能并开发酸菜发酵剂,将2株短乳杆菌分别与1株植物乳杆菌进行组合并发酵酸菜,分析短乳杆菌对酸菜发酵品质的影响。【方法】分别测定短乳杆菌与植物乳杆菌的单菌株生长产酸性能、耐酸性及亚硝酸盐降解力,并将两菌种组合后发酵酸菜,分析1-7d内酸度、乳酸菌活菌数、亚硝酸盐含量及酸菜质构特性的变化趋势。【结果】相较于短乳杆菌Lb-9-2,短乳杆菌Lb-5-3的生长和产酸速率较慢、酸耐受力较弱,但其亚硝酸盐降解力较强。两株短乳杆菌分别与植物乳杆菌Lp-9-1组合后产酸力显著增强,并在3 d时达到最低pH值(约3.10);植物乳杆菌Lp-9-1的添加使酸菜中总体乳酸菌生长延迟,在5 d时达到最高活菌数;组合菌种的样品中亚硝酸盐含量在1-7 d内变化较为平缓,前5天内两个组合之间差异不显著;接种乳酸菌会降低酸菜硬度和弹性,发酵3d时Lb-5-3/Lp-9-1组合的硬度最大,感官评价得分最高。【...     

猪血红蛋白降解菌株分离筛选与微生物特性

从多年被废弃畜禽血液浸染的土壤中,分离筛选出16株菌株。根据在酪蛋白/明胶平板上蛋白质水解圈比值大小,初步确定8株菌株为被选菌株;并分别在Hb发酵培养液中发酵72 h,测定蛋白酶活力、游离氨基酸含量、可溶性蛋白质含量、Hb降解率,最终确定一株菌株(编号为Lact5.Ⅲ)为所有被筛选出来的16株菌株中的最佳菌株。经过菌落形态观察初步确定为细菌,进一步测定生理、生化反应指标,鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。     

费氏丙酸杆菌两个亚种的分离与鉴定

用亨格特（Hungate）厌氧技术从不同奶制品分离出3株丙酸杆菌Propionibacterium,编号为PTC－1,PTC－2和PTC－3。细胞呈多形态,杆状,革兰氏阳性,不形成芽孢,不运动,菌落在PYG深层洋菜中呈双凸透镜状,白至土黄色,从葡萄糖、乳糖等8种碳水化合物发酵产酸,葡萄糖发酵产物包括大量丙酸和乙酸,少量异丁酸,琥珀酸和CO₂。厌氧至耐氧。PTC－1的DNA的GC百分含量测定值为67.8mol％（Tm）。三株菌的特性很接近,只在硝酸盐还原和牛奶凝固特性有差     

耐亚胺培南黄杆菌的耐药性分析

目的探讨耐亚胺培南黄杆菌的ESBLs和AmpC检出率和耐药率。方法采用ESBLs确认试验检测ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC,用K-B法进行药敏试验。结果1011株耐亚胺培南黄杆菌中,产ESBLs株787株,占77.8%;检出AmpC 549株,占54.3%;检出同产ESBLs AmpC株439株,占51.6%,其中ESBLs 高产AmpC 288株,占65.6%;ESBLs 诱导AmpC 151株,占34.4%;黄杆菌对β-内酰胺类抗生素、庆大霉素、阿米卡星的耐药率高,对氟诺唑酮类抗生素及加酶头孢菌素较敏感。结论产酶是黄杆菌多重耐药的主要原因之一,头孢哌酮/他唑巴坦、头孢吡肟对其具有良好的抗菌活性。     

炭疽杆菌与其他需氧芽孢杆菌鉴别方法的研究

炭疽杆菌与其他需氧芽孢杆菌间的鉴別至今尚无较可靠方法。本文乃报导43株标准炭疽杆菌,33株标准的其他需氧芽孢杆菌及212株新分离的需氧芽孢杆菌实验结果:（1）串珠试验,43株标准炭疽杆菌中95.3%阳性,80株新分离炭疽杆菌92.5%为阳性而165株其他需氧芽孢杆菌全部为阴性。（2）W噬菌体裂解试验,所有炭疽杆菌全部被裂解,其他的需氧芽孢杆菌中仅有1株新分离的蜡样杆菌被裂解,其余全不被裂解。（3）碳酸氢钠培养基上CO2培养试验,43株标准炭疽杆菌中除7株弱毒株外,均出现粘液菌落,80株新分离的炭疽杆菌中78株出现粘液菌落而其他的则均不出现粘液菌落。（4）青霉素抑制试验、水杨苷发酵试验、动力试验及溶血试验在炭疽杆菌为阴性,在其他需氧芽孢杆菌中则不一致。因此提出,串珠试验、W噬菌体裂解试验及碳酸氢钠培养基上CO2培养下菌落的观察可作为炭疽与非炭疽杆菌的主要鉴別方法;而普通培养基上菌落的观察、青霉秦抑制试验、水杨苷发酵试验、动力试验及溶血试验可作为辅助的鉴別方法。     

适于罗布麻生物脱胶的果胶酶产生菌分离筛选与表征

在青海柴达木盆地沤制的罗布麻表皮中分离得到两株适于罗布麻脱胶的高产果胶酶菌株,经形态、生理生化指标鉴证和16SrDNA菌种鉴定,确定一株为新的果胶酶产生菌琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii）,一株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。水解圈实验得出前者H／C值（H／C为水解圈直径H与菌落直径C之比）为5,后者为3;经酶活力测定,在37℃下,琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii）在11h达到产酶高峰（酶活力为103．2IU／mL）,枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）培养至9h达到产酶高峰（酶活力为91．6IU／mL）,但前者最高酶活力比后者高12．5％;经脱胶实验得出两菌残胶率分别为18．47％和17．31％,对罗布麻生物脱胶有较好的适用性。     

一株产碱性蛋白酶的嗜碱芽孢杆菌的分离和鉴定

从天津塘活盐碱土壤中分离一株产碱性蛋白酶的嗜碱芽孢杆菌HAP,并对其进行了表型分类和16S rDNA序列分析.结果表明,HAP是一株革兰氏阳性芽孢杆菌,菌体大小(0.7-0.9)μm×(2-3)μm,该菌可利用木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇,发酵型糖代谢产酸;可以水解酪素、淀粉,但不能水解酪氨酸;能够利用柠檬酸盐;其酶活力为1.22×104U/mL.结合系统发育学分析将HAP鉴定为嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus).     

分离筛选大熊猫正常生理菌—乳杆菌

本实验从１７只健康大熊猫粪便中分离出４７株待检菌,通过对其菌体形态和染色性,菌落形态,生化反应,发酵最终产物的气相色谱测定鉴定筛先出１３株乳杆菌。并测定了１３株乳杆菌对大熊猫常用抗生素的药物敏感性和对小白鼠的急性毒力实验。对大熊猫正常生理菌群微生态制剂的研制进行了初步探讨     

产碱菌属的一个新种

从土样中分离得到编号为E54的革兰氏阴性短杆菌。其形态、生理生化特性与假单胞菌属及产碱闺属的近似种均不相同。该菌株无鞭毛,无PHB颗粒形成。氧化酶阳性,氧化葡萄糖产酸,还原硝酸盐但无反硝化作用。产生精氨酸双水解酶,但不产生脲酶和色氯酸脱氨酶。石蕊牛奶产碱并还原n不水解淀粉和明胶。能利用多种碳源。DNA中G十C含量为6 8．65mol％。I)NA DNA杂交结果与产碱菌属更接近c因此,将其定为新种,命名为产酮产碱菌(Alcalige-nes ketogenes sp. Nov. Yin et Cai)。     

产蛋白酶菌株的筛选、鉴定及水解菜粕蛋白能力

以筛选产蛋白酶菌株水解菜粕蛋白生产氨基酸为研究目的,利用牛奶、豆浆等选择性培养基,从土壤、水体等自然环境以及家禽内脏中分离到可利用蛋白质菌株90余株.通过菌株对菜粕蛋白利用及水解能力的研究,筛选出2株具有高效水解菜粕蛋白产氨基酸的菌株,分别编号为K11和G12.经形态学观察和16S rDNA序列分析,初步鉴定K11为短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus),G12为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltrophilia).发酵实验表明,2株细菌具有高效水解菜粕蛋白的能力,发酵后菜粕中游离氨基酸最大含量达到8.2％,研究所得菌株对于利用菜粕蛋白资源具有非常重要的意义.     

1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其弹性蛋白酶结构研究

鉴定弹性蛋白酶产生菌株EL32,确定该酶的基本结构。采用分子生物学、形态学及生理生化性质对菌株EL32进行鉴定;用硫酸铵沉淀、离子交换层析和分子筛层析纯化酶蛋白;借助肽指纹图谱及酶基因克隆技术研究该酶的一级结构;利用同源建模的方法研究该酶的空间结构。菌株EL32的16S rDNA与枯草芽胞杆菌16S rDNA的同源性达到99%,其菌落呈乳白色,其细胞革兰染色阳性,具有芽胞;发酵葡萄糖试验产酸不产气,明胶水解试验呈阳性,能够水解淀粉,V-P反应呈阳性,鉴定为枯草芽胞杆菌。从菌株BL32发酵液中纯化得到了弹性蛋白酶,SDS-PAGE分析显示其分子量为31 ku。用LTQ-MS测定肽指纹图谱表明该弹性蛋白酶是枯草芽胞杆菌蛋白酶subtilisin,该酶的基因和蛋白质序列与枯草芽胞杆菌蛋白酶subtilisin的同源性都高达99%。菌株EL32弹性蛋白酶的三维结构含有6个α-螺旋,7个扭曲的平行β-折叠以及2个反平行的β-折叠,His、Asp和Ser是其活性中心的关键基团。鉴定了1株产弹性蛋白酶的枯草芽胞杆菌,确定了其弹性蛋白酶是蛋白酶subtilisin,为该枯草芽胞杆菌蛋白酶的应用提供了基础。     

肌苷产生菌缺失核苷水解酶活性突变株选育及其发酵生产试验

以枯草芽孢杆菌ＪＳＩＭ－１０１９为出发菌株,经物理、化学诱变剂连续处理,获得一株缺失核苷水解酶活性的突变株ＪＳＩＭ－Ｂ－１９８。该突变株不能降解肌苷,应用于发酵生产中,肌苷产量显著增加。在２００００升发酵罐中,连续１０罐批,平均产肌苷８．３８ｇ／Ｌ,对糖转化率２１．９８％,发酵周期５０ｈ￣６０ｈ,该菌株遗传性能稳定,已在工业生产中应用。     

痤疮丙酸杆菌的分离鉴定及其对瘤胃微生物发酵的影响

摘要：【目的】奶牛围产期能量代谢的特点是能量负平衡,瘤胃发酵产生的丙酸是奶牛糖异生供能的主要底物,对预防奶牛能量负平衡具有重要的意义。本研究旨在从健康奶牛瘤胃液中分离、筛选出以产丙酸为主的痤疮丙酸杆菌,研究其瘤胃发酵特性。【方法】无菌采取装有瘤胃瘘奶牛的瘤胃液,按照厌氧菌分离步骤,通过丙酸生成菌株的特异性培养基SLB进行筛选,提取分离菌的基因组DNA,克隆其16S rRNA基因,进行序列测定,分离出一株痤疮丙酸杆菌。通过体内外发酵试验研究痤疮丙酸杆菌对瘤胃液pH、挥发性脂肪酸和乳酸的影响。【结果】通过形态学观察、生化反应和序列分析证实所分离的一株产丙酸的杆菌为痤疮丙酸杆菌。该菌株在体外发酵过程中,瘤胃液pH先下降,在12h时降至最低,随后上升;乙酸、丙酸、丁酸等挥发性脂肪酸先升高,于12h时升至最高,随后又降低;乳酸浓度和乙酸/丙酸总体上一直下降;在体内发酵过程中,pH总体上下降;乙酸、丙酸、丁酸等挥发性脂肪酸总体上升。【结论】在国内首次从健康牛瘤胃液中成功分离出一株痤疮丙酸杆菌,为今后研发预防奶牛能量负平衡的微生态制剂奠定基础。     

高产纤维素酶芽孢杆菌的筛选、鉴定与发酵条件优化

纤维素是生产生物质能源最广泛、最廉价的原材料,筛选高活性纤维素酶菌株是纤维素能源开发利用的关键。采用刚果红-CMC平板筛选高产纤维素酶菌株;结合菌株形态、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定;采用正交实验筛选菌株AF1的最佳产酶发酵条件。筛选获得5株高活力的纤维素酶产生芽孢杆菌,鉴定为2株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、3株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。5株菌的水解圈直径与菌落直径比值均大于4.5,其中解淀粉芽孢杆菌AF1最大达到8.04,优化AF1菌株最佳固体发酵培养基为：玉米秸秆粉20 g, NaCl 0.4 g, CaCl₂ 0.2 g,麸皮32 g,吐温80 0.2 g,蛋白胨0.7 g,(NH₄)₂SO₄ 0.8 g,KH₂PO₄ 0.5 g, MgSO₄·7H₂O 0.04 g,糖蜜0.4 g,吐温20 0.4 g,水115...