酪氨酸对大鼠离体Leydig细胞睾酮和cAMP生成的影响

本实验采用胶原酶消化,Ficoll 密度梯度离心,制备大鼠睾丸 Leydig 细胞悬浮液进行体外培养(每管内含有10~6 细胞),以研究酪氨酸对 Leydig 细胞睾酮和cAMP 生成的影响。实验结果表明,hCG(100mIU)能明显地促进Leydig 细胞睾酮和 cAMP的生成。睾酮从对照组的3.08±0.58ng(X±SD,下同)增加到41.61±1.52ng,cAMP 含量从19.62±2.56pmol增加到153.24±5.92pmol。若将酪氨酸(60μg)与hCG同时加入到细胞培养液中,则睾酮和cAMP 含量分别下降到 19.22±.0.52ng(P<0.01)和92.63±6.02pmol(P<0.05)。但是,酪氨酸羟化酶抑制剂(α-甲基酪氨酸)对酪氨酸抗hCG致睾酮生成作用无阻断效应,而酪氨酸对外源cAMP(2.5mM)诱导的睾酮生成,则有明显的抑制作用,睾酮含量从27.56±1.53ng降至 19.50±0.47ng(P<0.01)。以上实验结果表明,酪氨酸抗hCG致睾酮生成的作用机理与cAMP有关。     

酪氨酸对未成年小鼠和大鼠诱发排卵和孕酮含量的影响

本实验室曾证明酪氨酸有抗hCG致孕酮生成作用,同时也发现酪氨酸对大鼠排卵前的颗粒细胞有促进cAMP和甾体激素合成作用,表明酪氨酸对卵巢有逆向的双重作用。本文观察酪氨酸对未成年小鼠和大鼠诱发排卵和血清孕酮含量的影响。结果显示酪氨酸有促进未成年小鼠和大鼠诱发排卵和提高孕酮的作用。苯丙氨酸和色氨酸无此作用。在甲状腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等酪氨酸衍生物中,仅多巴胺与酪氨酸的作用相似。     

大鼠黄体细胞酪氨酸含量及hCG,cAMP和孕酮对含量的影响

经PMSG-hCG处理的未成年雌性大鼠卵巢,用胶原酶-DNA酶溶液消化,制成黄体细胞悬浮液。预培育1h后,加入不同浓度的hCG、cAMP及孕酮;并在加入hCG(10mIU/ml)、cAMP(2.5mmol/L)或孕酮(1nmol/L)的同时分别加入苯丙氨酸或放线菌酮,再培育1.5h,取细胞悬浮液400μl,用薄层层析扫描技术测其酪氨酸含量。结果:黄体细胞内有一定量内源酪氨酸,hCG,cAMP和孕酮均可明显促进酪氨酸的释放(P<0.05).苯丙氨酸对酪氨酸的含量无影响。酪氨酸释放也不依赖蛋白质合成过程。     

酪氨酸对hCG诱导兔离体卵泡蛋白质及RNA合成的影响

为了深入探讨酪氨酸抗hCG致孕酮生成作用的机制,本文利用~3H-亮氨酸和~3H-尿嘧啶掺和入兔离体卵泡的方法,观察了酪氨酸对蛋白质及RNA合成的影响。结果显示,酪氨酸对hCG诱导的蛋白质、RNA合成具有明显的抑制作用,但同剂量的多巴胺或苯丙氨酸却无效。酪氨酸还抑制cAMP的生成,并可拮抗外源cAMP诱导蛋白质及RNA的合成。上述结果表明,酪氨酸可通过使cAMP生成减少和进入细胞内直接发挥作用两种方式抑制hCG诱导的兔卵泡蛋白质及RNA的合成。酪氨酸的这一作用可能与其抑制孕酮生成有密切的关系。     

生长激素和胰岛素样生长因子-Ⅰ加速孕马血清促性腺激素诱发的颗粒细胞分化

曾报道,生长激素(GH)、胰岛素和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)能调节颗粒细胞成熟,但其作用机理尚未充分阐明。Hutchinson 等研究了 GH、IGF-I 和卵泡刺激素(FSH)间相互作用的性质,以及它们对颗粒细胞甾体生成作用的影响。实验所用颗粒细胞取自己烯雌酚处理的未成熟大鼠,在离体条件下再用孕马血清促性腺激素(PMSG)或 FSH 加以刺激。结果表明,GH 在 PMSG 存在下,能增加芳香化酶活性和孕酮     

Interleukin-1β对促卵泡生成素(FSH)诱导大鼠颗粒细胞雌激素生成的抑制作用

本文利用颗粒细胞的体外培养方法研究了 Interleukin-1β 对 FSH 诱导颗粒细胞雌激素生成的影响。颗粒细胞得自未成熟的、经雌激素处理的大鼠,加入 FSH 及同时加入不同浓度的 Interleukin-1β 后,体外培养三日,观察 Interleukin-1β 对雌激素生成的影响。结果可见 FSH 刺激颗粒细胞雌激素生成作用随 FSH 剂量的增加而随之增加。Interleukin-1β 单独处理并不影响雌激素的生物合成。但若同时应用 Interleukin-1β 和 FSH 处理,则可见 Inter-eukin-1β 抑制 FSH 诱导颗粒细胞雌激素生成作用,且此抑制作用强度呈剂量依赖性。其最大的抑制作用达83%。该抑制作用在加药处理后48h 即很明显。Interleukin-1β 抑制 fors-kolin 和(Bu)_2 cAMP 引起的雌激素的生成,这表明 Interleukin-1β 的作用点在 cAMP 生成之后。本文结果提示 Interleukin-1β 使颗粒细胞雌激素生成下降的作用有可能参予卵泡的闭锁机制,尤其当机体在遭受炎症、感染期间,Interleukin-1β 是卵巢功能受损的一个可能参予因子。     

小鼠卵巢对酪氨酸的摄取与酪氨酸抗hCG致孕酮生成作用

末成年小鼠用PMSG处理后48小时,注射hCG(5单位/10克体重)诱发排卵。在注射hCG后12、24、48、96、144小时,静脉注射~3H-酪氨酸(5μCi/10克体重)5分钟后摘取卵巢,干燥、称重、消化后,加闪烁液测其放射性(以cpm/毫克干重表示)。结果表明,卵巢对~3H-酪氨酸的摄取量,在排卵后显著增加。随着孕酮分泌的增加,卵巢对酪氨酸的摄取亦增加,两者的变化趋势一致。此外,本文证明,卵巢摄取的外源酪氨酸,对hCG诱发的孕酮生成有抑制作用。     

卵巢甾体激素与卵泡刺激素合并使用可提高颗粒细胞纤溶酶原激活物产生

卵泡刺激素(FSH)能刺激未成熟大鼠离体培养颗粒细胞的纤溶酶原激活物(PA)的产生,并呈剂量一依从性增加;已证实 PA 对卵巢的排卵有作用。Ny 等(1984)进一步证明,刺激颗粒细胞分泌的是组织型-纤溶酶原激活物(tpA),而不是尿激酶型-纤溶酶原激活物(uPA)。卵巢甾体激素等与 FSH 合并使用后,能提高卵巢 FSH-依从性 PA 的产生。用雌二醇(E_2)或孕酮单独处理培养中的颗粒细胞时,对 PA 的产生无明显影响。已知雌激素对卵巢细胞的成熟和发育超重要作用,其中包括:对颗粒细胞的增殖,增加 FSH 对颗粒细胞 cAMP 的形成,提高卵巢芳香化酶的活性等。活体动物经二乙基己烯雌酚预处理后,给予生理学浓度范围的 E_2,能增强 FSH所诱发的 PA 产生。E_2与 FSH 合并处理时,E_2的刺激作用有一时间的依赖性,即须经72h 的作用。给孕     

抑制素α基因表达下调对鹅卵泡颗粒细胞凋亡和增殖的影响

抑制素α基因是控制家禽排卵率的一个重要候选基因。为研究抑制素α基因对体外培养的鹅卵泡颗粒细胞增殖凋亡的遗传作用,构建psiRNA-INHα1和psiRNA-INHα2两个抑制素α基因干扰载体,以降低抑制素α基因表达。体外培养鹅F1和闭锁卵泡的颗粒细胞,经抑制素α基因干扰48h后,荧光显微镜检测转染效率,同时用流式细胞术检测抑制素α基因表达水平,以及细胞生长周期、细胞凋亡指数和增殖指数的变化,用放免法测定细胞培养上清中雌激素和孕酮水平。结果表明,抑制素α基因干扰后卵泡颗粒细胞抑制素表达水平比对照组降低30%～40%（P〈0.05）;细胞凋亡指数和增值指数显著高于对照组（P〈0.05）;细胞分泌雌激素水平显著下降（P〈0.05）。由此推断,抑制素α基因对颗粒细胞具有显著的抗凋亡效应。     

小鼠排卵前后卵巢纤蛋白溶酶原激活因子活性的变化

给幼龄小鼠注射PMSG刺激滤泡生长,随后注射hCG以诱发排卵。在激素处理的不同时间取出卵巢,制备卵巢匀浆液或从卵巢中分离颗粒细胞和卵丘-卵母细胞复合体,并做离体培养。样品中组织型(tPA)和尿激酶型(uPA)纤蛋白溶酶原激活因子经SDS-凝胶电泳分离,用纤蛋白铺盖技术测定。实验结果表明,注射hCG 8h后15％的受试动物排卵,而卵巢匀浆液和颗粒细胞中tPA和uPA活性分别也在hCG注射后4和8h达到高峰。排卵后酶活性下降。卵丘-卵母细胞复合体主要含tPA,注射hCG 12—24h达到高峰。上述资料证明,tPA和uPA都参入小鼠排卵过程。因为排出的卵子中仍含有大量tPA,卵细胞的tPA除参与排卵外,可能对排卵后的一些生理过程也起重要作用。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、IGF结合蛋白-2和LH受体mRNA在卵泡闭锁过程中的表达及调节

研究了IGF-Ⅰ、IGF结合蛋白-2(IGFBP-2)和促黄体激素受体(LHR)mRNA在卵泡闭锁过程中的表达及调节.给26日龄大鼠注射15 IU PMSG,经检测,证实PMSG处理48 h后,一些小窦状卵泡的颗粒细胞已发生凋亡;96 h在排卵前卵泡中已可检测到凋亡细胞;120 h大多数的排卵前卵泡中均出现大量的凋亡细胞.48～120 h IGF-Ⅰ主要在窦前卵泡和小窦状卵泡表达;48与96 h,窦前与窦状卵泡的膜细胞均表达高水平的IGFBP-2.在48 h,颗粒细胞中有LHR的强信号,但在96和120 h,颗粒细胞的LHR表达减弱(P＜0.001).表皮生长因子(EGF)和IGF-Ⅰ均抑制窦前和窦状卵泡颗粒细胞凋亡.同时观察到EGF促进IGF-Ⅰ mRNA表达,IGF-Ⅰ刺激排卵前卵泡表达LHR mRNA.上述结果表明,各级卵泡的闭锁可能均受EGF和IGF-Ⅰ相互作用的调节.     

不同培养时间对鸡卵泡颗粒细胞孕酮、雌激素分泌水平及FSHR、LHR基因表达的影响

目的：研究培养不同时间鸡卵泡颗粒细胞孕酮和雌激素的分泌水平,促卵泡素受体（FSHR）和促黄体素受体（LHR）的基因表达水平,推断体外培养时间对颗粒细胞激素分泌及相关受体基因表达的影响。方法：通过细胞体外培养的方法,分别于0 h、24 h、48 h、72 h、96 h收集鸡卵泡颗粒细胞上清液,采用ELISA法测定细胞上清液内的孕酮及雌激素分泌水平,并采用荧光定量PCR技术检测颗粒细胞内FSHR和LHR基因表达情况。结果：在培养初期0 h~48 h孕酮和雌激素分泌量显著降低（P < 0.05）,随着培养时间增加到72 h两种激素的分泌量又开始增加,并达到培养初期水平,培养至96 h细胞内孕酮和雌激素分泌量再次降低;颗粒细胞FSHR和LHR mRNA的表达水平则随着培养时间的增加而降低（P < 0.05）。结论：体外培养的卵泡颗粒细胞内孕酮和雌激素的分泌量随体外培养时间的延长呈先降低后升高的趋势,可能与体外培养细胞的生长状态相关,从整体上看随着培养时间的延长,细胞内孕酮和雌激素的分泌量均降低,可能与两种促性腺激素受体FSHR和LHR基因表达量下降相关。     

前列腺素E_2、F_(2α)对大鼠颗粒细胞PA活力的影响

年龄26—27天的Wistar雌鼠用PMSG与HCG诱导成熟,同时分别注射3、6、9 mg消炎痛,分离卵巢颗粒细胞并离体培养,培液中的PA活力经~(125)Ⅰ-纤维蛋白降解法检测,均无被抑制现象(图1)。仅用PMSG激动大鼠的颗粒细胞离体培养于含HCG及不同浓度(10~(-8)mol/L—10~(-5)mol/L)的消炎痛培液内,各组PA活力均未出现明显变化(图2)。离体条件下PGE_2增强PMSG激动大鼠颗粒细胞PA活力的事实说明,消炎痛抑制实验未能显示前列腺素与PA的关系,可能因所用以诱导大鼠临近排卵的PMSG和HCG分别所含FSH与LH的高活力促使PA活力达到最高点,以致前列腺素对PA的影响被掩盖;PGF_(2α)对PA未显示任何作用(图4)。另外,PGE_2使仅接受PMSG大鼠颗粒细胞PA升高的事实(图3)提示,PGE_2有摹拟LH的作用;未经PMSG与HCG处理鼠的卵泡细胞的PA活力也受PGE_2的影响,说明它还有摹拟FSH的作用。     

酪氨酸对人离体滋养层细胞孕酮与hCG分泌的影响

本文观察三种剂量(2×10~(-5)mol/L,2×10~(-4)mol/L和2×10~(-3)mol/L)的酪氮酸对离体培养的滋养层细胞孕酮及hCG分泌的影响,并对其抑制效应的机理作了初步探讨。实验结果表明,三种剂量的酪氨酸均可抑制滋养层细胞孕酮分泌(P<0.01),但是,在孕酮分泌受酪氨酸抑制的同时,未见对hCG分泌发生影响(P>0.05),进一步观察了酪氨酸对滋养层细胞3β-羟甾脱氢酶活性的影响,结果表明,酪氨酸能显著抑制3β-羟甾脱氢酶活性,提示酪氨酸对滋养层细胞孕酮生成的抑制作用与抑制3β-羟甾脱氢酶活性有关。     

二十一种氨基酸对hCG致大鼠黄体细胞孕酮生成作用的影响

本文选用PMSG-hCG预处理的未成年雌性大鼠卵巢黄体经DNA酶-胶原酶消化后,制成黄体细胞悬浮液。在黄体细胞悬浮液的培养管内,加入hCG100mIU/ml 100μl,同时加入三种浓度(0.02,0.2,2mmol/L)的二十一种氨基酸,充入95％O_2+5％CO_2,37℃孵育1.5h,用放射免疫分析方法测孕酮含量。结果表明:二十一种氨基酸中,只有酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸可对抗hCG致孕酮生成作用。这三种氨基酸在结构上均具有羟基,都是蛋白质磷酸化的位点,据此推测:这三种氨基酸抗hCG致孕酮生成作用可能与干扰蛋白激酶的磷酸化有关。     

幼年大鼠诱发排卵条件下卵巢前列腺素(PGs)的含量变化及其生理作用

本实验用幼年大鼠经PMSG/hCG诱发排卵,研究了印巢PGE_2、PGF_(2α) 、6-酮-PGF_(1α) 及TXB_2在排卵过程中的变化。实验表明卵巢PGE_2、PGF_(2α) 及6-酮-PGF_(1α) 在排卵前达到峰值,在排卵后,均趋下降。TXB_2未出现明显变化。受试动物经消炎痛处理后,不仅使排卵受到严重抑制,而对上述三种PGs在排卵前的上升也表现了显著的抑制。提示在卵泡破裂过程中PGs的重要调节作用,PGE_2、PGF_(2α)均可能参与排卵,其中尤以PGE_2的作用最为显著。     

细胞内外钙浓度变化不影响酪氨酸抗hCG致孕酮生成作用

实验取经ＰＭＳＧ－ｈＣＧ处理的未成年雌性大鼠卵巢,用胶原酶－ＤＮＡ酶消化,制得黄体细胞悬浮液,预孵育１ｈ后加入各种处理因素,继续孵育２ｈ,用放射免疫方法测孵育液中孕酮的量。结果：孵育液中含有高钙或高钾或加入Ａ２３１８７时均可增加黄体细胞基础及ｈＣＧ诱导的孕酮生成量。相反,减少钙的浓度或加入ＥＧＡＴ或戊脉胺,孕酮生成量则明显减少。酪氨酸抑制ｈＣＧ刺激的孕酮生成,但对高钙、高钾和Ａ２３１８７增加孕酮的作用没有影响,并对上述三者分别与ｈＣＧ同时作用所致孕酮生成增加也没有影响。提示：大鼠黄体细胞孕酮生成依赖于细胞内外的钙;细胞内外钙浓度的变化不影响酪氨酸抗ｈＣＧ致孕酮生成作用;钙与ｈＣＧ使孕酮增加的作用可能是通过不同机制。     

卵巢血纤维蛋白溶酶原激活物受激素调控

卵巢有多种来源的血纤维蛋白溶酶原激活物(PA)。1985年作者发现颗粒细胞和卵泡膜细胞产生不同类型的 PA。刺激颗粒细胞主要产生组织型 PA(t-PA),卵泡膜细胞主要分泌尿激酶型 PA(u-PA)。颗粒细胞的制备和培养按 Crisp 和 Denys(1975)的修改法;实验给大鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后,48小时杀死;分离收集卵泡或卵丘-卵母细胞复合物,以 DME 配方新配的培养基液洗涤。卵细胞的细     

白细胞介素-1抑制猪离体培养颗粒细胞的黄体化

白细胞介素-1(IL-1)具有广泛的生物学功能,它作为免疫介导剂而发挥重要作用。有人曾报道,腹腔巨噬细胞含有能促进小鼠黄体化颗粒细胞生成孕酮(P)的物质。因为 IL-1主要由活化的巨噬细胞生成,因而考虑 IL-1能否调控颗粒细胞的甾体生成功能。实验选用取自中等大小猪卵泡的颗粒细胞,在黄体生成素(LH)存在或不存在的条件下,与 IL-1共同培养,观察 IL-1对颗粒细胞 P 生成的影响。结果表明,IL-1显著抑制 LH 所促进的 P 生成,作用强弱取决于剂量大小。LH 所诱发的颗粒细胞黄体化形态变化也被 IL-1所     

鳗鲡繁殖生物学研究:Ⅵ.鳗鲡 17α,20β-双羟孕酮的生成和作用

研究了鳗鲡卵泡１７α,２０β－双羟孕酮的民它对卵母细胞胚泡破裂的影响。结果表明,注射锂鱼脑垂体奖浆液和人绒毛膜促性腺激素可诱导性腺发育成熟鳗鲡１７α,２０β－地酮的生成并导致排卵,但两者单独或结合使用对鳗鲡７００－９００μｍ离体卵泡１７α,２０β－双羟孕酮的生成没有作用,鳗鲡脑垂体匀浆液则能显著刺激７００－９００μｍ离体卵泡生成１７α,２０β－双羟孕酮。１７α－羟孕酮能显著增加鳗鲡７００－９００－