猪出血性败血病杆菌E0630弱毒菌株的培育

将猪出血性败血病杆菌(Pasteurella suiseptica)强毒菌株C44-1在含有“海鸥”洗涤剂的马丁琼脂培养基上不断移植继代,至630代时得到弱毒菌株E。630。此菌几乎丧失对家兔及猪的致病力,用活菌50亿或300—780亿分别注射家兔或猪只均不能致死,但仍具有良好的免疫原性。经分别注射0．75亿一1亿或2--3亿弱毒菌株免疫的家兔或猪只,均可抵抗强毒活菌的攻毒。E。63 0较稳定,连续通过不含“海鸥”洗涤剂的马丁琼脂培养基50代,血液琼脂培养基23代,或经连续接种易感猪5代后,对家兔及猪,毒力均无变化。此弱毒菌株可制成冻干活菌苗,用于预防猪出血性败血病。     

不同I相百日咳菌株抗原构造的研究

一、不同I相百日咳菌株与不同I相百日咳血清的凝集力有所不同,且具有不同疑集力的I相菌的抗原构造亦不同,惟抗原相同的I相菌的凝集力与吸收能也有不同者。 二、I相菌的L抗原至少有a、b、c三种,a抗原是I相菌共同的抗原。B及c抗原在不同I相菌株内有不同。用B及C因子血清可将我国、苏联、美国、英国、日本不同来源的16株I相百日咳菌分为合有L抗原ac…、ab…、abe…。三大类。 三、不同抗原构造的I相菌株I司同其他I相菌的特性一致。用同一菌株(18323)进行攻击时,对小鼠的免疫力无差别。 四、对文献上认为凝集力不同的I相菌的抗原构造是否一致;用I相血清来制定I相菌的可靠性;菌株间不同的特异抗原在免疫方面的作用与制造百日咳菌苗用的菌种的抗原构造的问题;以及不同及相同抗原构造的I相菌株在流行病学方面的意义等方面进行了讨论。     

1例L型支气管戈登菌肺部感染的报道

放线菌目戈登菌属支气管戈登菌存在于环境中,在机体免疫力下降时可感染致病。从1例肺部感染4年的78岁患者痰标本中分离出1株菌株,经聚合酶链反应(PCR)扩增16SrRNADNA,序列比对分析证实为支气管戈登菌。该菌株在含蔗糖的Middlebrook7H9(7H9-L)半固体培养基上呈煎蛋样嵌入性生长,在含氯化钠的92-3TB(92-3TB-L)液体培养基也生长,而在罗氏培养基、BACTECMGIT-960、不含氯化钠的92-3TB(92-3TB-B)液体培养基及不含蔗糖的Middlebrook7H9(7H9-B)半固体培养基不生长。涂片抗酸染色显微镜下可见大小不等的抗酸染色阴性球状或短杆状菌。传代培养2代后可见橘红色菌落,涂片抗酸染色可见少量抗酸染色弱阳性杆状菌,革兰染色及扫描电子显微镜观察菌体为杆状。结果表明,从患者痰液中分离的菌株为L型支气管戈登菌,提示肺部感染迁延不愈的免疫力低下患者需考虑感染L型支气管戈登菌的可能。     

双歧豆奶菌种的驯化研究

选用青春双歧杆菌在 A、B、C三种培养基上进行耐氧和凝固驯化 ,经 2 8代筛选出一株耐氧性并在 C培养基上进行耐氧和凝固驯化 ,经 2 8代筛选出一株耐氧性并在 C培养基中由 5 6 h可发生凝固 ,最后缩短到 12 h发生凝固的青春双歧杆菌 ;在 PYG和豆乳培养基中进行耐酸驯化 ,经 15代筛出一株能在p H4.7°T90的发酵豆乳中存活的青春双歧杆菌 ;在 BCPYC液体和固体培养基中进行耐热驯化 ,经 14代筛选出一株能在 47℃± 1℃的环境中生长的青春双歧杆菌。本菌在改良的 NPNL双歧选择培养基中生长 ,形态、培养与生化特性与原菌种无差异。     

饲用微生物的分离鉴定及其对杏鲍菇菌糠发酵的效果

【目的】菌糠的营养素含量齐全,但纤维素含量过高是阻碍其饲料化利用的主要因素。故本研究筛选适合于发酵杏鲍菇菌糠的微生物菌株,以改善其饲用品质。【方法】首先,本研究采用纤维素-刚果红、苯胺蓝和MRS-Ca (De Man, Rogosa, Sharpe-Ca)筛选培养基,结合纤维素、木质素酶活力及抑菌活性的测定,从EM (effective microorganisms)原液发酵的杏鲍菇菌糠中分离筛选具有较强纤维素、木质素降解能力及抑菌能力的细菌/真菌。通过细菌16S rRNA和真菌18S rDNA基因序列分析确定菌株所属种属。其次,将筛选出的菌株菌液等体积混合制成复合菌剂用于固态发酵杏鲍菇菌糠。测定不同发酵时长菌糠营养成分含量以确定最佳发酵时间,并与相同工艺条件下EM原液发酵的杏鲍菇菌糠进行饲用品质比较。【结果】筛选并鉴定得到纤维素酶活性较高的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株P11、发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)菌株R8和马克斯克鲁维应变酵母(Kluyveromyces marxianus)菌株MU5;木质素酶活性较高的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)菌株MU7;抑菌活性较高的类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides)菌株R4和乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)菌株R9。使用以上菌株复合发酵杏鲍菇菌糠7 d后,各项指标达到稳定。与EM原液发酵的杏鲍菇菌糠相比,复合菌剂发酵杏鲍菇菌糠的NDF和ADF分别显著降低了19.6%和21.44%(P0.05);CP (crude protein)、CA (crude ash)和EE (ether extract)含量分别显著提高了10.44%、5.26%和123.53%(P0.05)。【结论】本研究筛选得到的芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌优势菌株复合后用于发酵杏鲍菇菌糠可以很好地改善其饲用品质,效果优于生产中常用市售EM原液。     

百日咳疫苗用菌株基因的遗传稳定性研究

目的对百日咳疫苗(pertussis vaccine)用菌株的主要保护性抗原基因序列的遗传稳定性进行研究,进一步验证此前一代测序的结果,为疫苗的安全性和有效性提供依据。方法采用第二代测序技术(next generation sequencing,NGS)对百日咳疫苗生产用菌株的主代代次(P4)、工作代次(P7)、疫苗代次(P13)及疫苗代次后连续传3代的第3代样品V3代次(P16)的主要抗原基因序列进行测序并分析。采用ELISA和Lowry法对百日咳疫苗生产用菌株各代次主要抗原组分进行抗原含量检测及比活性检测。结果百日咳毒素(pertussis toxin,PT) S1亚基上的8个等位基因氨基酸相对应的24个碱基位点中最高突变率为0.38%,其中疫苗代次最高突变位点(A2789C0.92%)在S5亚基上,其他各代次最高突变位点均不在S亚基上。PT全基因组最高突变率4%,且同一个位点不同代次的碱基突变呈不规律性,突变率没有随传代次数的增加而增高。百日咳黏附素(pertactin,PRN)的24个抗原表位中最高突变率在疫苗代次T951G位点,突变率为1.66%;其他位点的突变率均0.8%。全基因组中突变率最高的位点为V3代次C2025T,突变率为6.24%;各代次PRN全基因组最高突变率6.24%,且不在主要抗原表位区域内;在同一个位点不同代次的碱基突变没有随传代次数的增加而增高,呈不规律性。丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)中B细胞抗原表位区中碱基最高突变率为0.98%(V3代次T6449G位点),其他代次均0.8%;全基因组各代次位点最高突变率为V3代次C7323G,突变率为9.89%;其余代次突变率均9.89%,且不在抗原表位区,同一个位点不同代次的碱基突变没有随传代次数的增加而增高,呈不规律性。PT的ELISA比活性平均值为0.532±0.100,最低限值为0.232。PRN的ELISA比活性平均值为0.885±0.110,最低限值为0.555。FHA的ELISA比活性平均值为0.701±0.170,最低限值为0.191,百日咳菌种抗原含量和比活性较稳定。结论传代过程中PT、PRN、FHA主要碱基位点突变率较低,说明百日咳菌种基因遗传稳定性好。     

高产复合酶菌株HD-1选育的研究

从产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)菌中分离出一支产酸性蛋白酶等多种水解酶的菌株No．3号。经铜蒸汽激光诱变,选育出一支高产复合酶的菌株FID-1,该菌在简单的固体发酵培养基上,28℃培养48hr,每克鲜曲的酶活力(U)为：酸性蛋白酶7500u、纤维素Cx 酶 9061U、纤维素CL酶3581U、果胶酶5471U、糖化酶5582U。酶活平均提高率为38.86％,最高幅度是78.6％。该菌经多次连续传代和贮存一年后,产酶性状稳定。该菌株是目前国内饲料用酶制帮生产株中,酶系最齐全,产酶水平位于前列的优良菌株。     

异小杆线虫发光共生细菌两种型的生物学研究

异小杆线虫发光共生细菌两种型(初生型和次生型)的形态和绝大多数生理生化及血清学反应均相同。它们的主要差异表现在培养特征、稳定性及对线虫繁殖的作用性上。如初生型菌能使线虫在人工培养基上大量繁殖,次生型菌却不能;初生型菌不稳定,易转化为较稳定的次生型。但不同的初生型菌株其稳定性又有差别;在NBTA、EMB及麦康凯培养基上,两种型的菌落区别明显。此外,所有初生型菌都具有抗菌作用,次生型菌只有部分菌株具有此性质,而且前者的抗菌谱较后者广。不同菌株的初生型,其抗菌能力有差别。     

流行性感冒桿菌生长因素的研究

血液中合有抑制V因子的物質,在75—100。C的温度下加熟5一10分钟,可以破壤此抑制物,放出V因子。以一定量的辅酶I和氯化血红素分别作为V因子和X因子的来源,加於肝消化湯中,可以代替巧克力培养基。流行性感冒桿菌的氧消耗量,在巧克力肝消化得中最大。在含辅酶I和氯化血红素的肝消化湯中次之,在不含这些因子的肝消化湯中呼吸最弱。辅酶I和氯化血红素至少可以保存21-2月,若能大量生产,则配裂流行性感冒桿菌培养基时,可以避免使用血液。这在简化培养基的制偏手续上,将有很大的好处。     

脱落酸产生菌的遗传育种

从南京蔬菜研究所植物致病株中分离到3株脱落酸（ABA）产量较高菌株,经初步鉴定均为灰葡萄孢（BolrytiscinereaPers．）。分别命名为A23,A101,A160通过紫外诱变及菌株生长状况比较,选出一株菌A101作为出发菌,经紫外,硫酸二乙酯多次诱变,在ANA合成代谢关键酶抑制剂平板上定向选育出一株ANA高产菌UUD－1,该菌固体发酵可产生ABA374μg／ml,是出发菌株产量的14倍,且其产量连续培养5代稳定。