献血员巨细胞病毒感染的研究

用PCR法和DNA杂交法检测同一献血员的白细胞及血清中的HCMV-DNA,并用ELISA法检测血清中的HCMV-IgM、IgG(测四个滴度),连续两年共检测白细胞和血清样本各200人份.PCR法检测白细胞中的HCMV-DNA阳性率分别为63%和70%,DNA杂交法检测的阳性率为42%和50%.PCR法检测血清中的HCMV-DNA的阳性率为49%和53%,DNA杂交法检测的阳性率为33%和39%.HCMV-IgM阳性率两年均为5%.HCMV-IgG阳性率分别为54%和58%.     

桔梗多糖脱蛋白方法的优化及对抑菌性的影响

以桔梗为实验材料,对水提后的多糖采用以下五种方法:Sevage法、盐酸法、三氯乙酸法、酶法以及酶与Sevage结合的方法进行脱蛋白处理,分别比较各种脱蛋白方法的蛋白质清除率以及多糖损失率。同时,对脱蛋白前后不同浓度的桔梗多糖的抑菌性进行比较。结果表明,五种脱蛋白方法的蛋白清除率依次为三氯乙酸法盐酸法Sevage法酶法酶+Sevage法,即98.07%92.25%60.91%51.10%39.63%;多糖的损失率依次为三氯乙酸法酶+Sevage法Sevage法酶酶法盐酸法,即8.83%10.08%11.23%11.74%22.24%;其中,三氯乙酸法蛋白质的清除率最高,多糖的损失率最小,为最适宜的脱蛋白方法。桔梗多糖脱蛋白前后对根霉、青霉、黄曲霉均有抑制效果。且随多糖浓度的增加抑菌作用逐渐加强。桔梗多糖脱蛋白前对根霉的抑制作用大于脱蛋白后的多糖。对青霉和黄曲霉的抑制作用效果则为脱蛋白后的多糖大于脱蛋白前的多糖。     

3种前处理方法提取鸡脯肉中磺胺二甲基嘧啶的方法比较

分别采用磷酸盐缓冲液(PBS)提取法、免疫磁富集法和GB 29694—2013法提取鸡脯肉中的磺胺二甲基嘧啶,比较这3种方法的回收率和稳定性。当偶联液(0.01 mol/L PBS)p H为5.0、抗体偶联量为80μg、捕获时间为45 min、免疫磁珠用量为350μg时,免疫磁富集法的回收率和变异系数分别为98.8%~102.9%和4.7%~6.2%;磷酸盐缓冲液提取法的回收率和变异系数分别为40.5%~78.5%与8.7%~10.4%;GB 29694—2013法的回收率和变异系数分别为90%~107.1%与8.5%~9.8%。磷酸盐缓冲液提取法简便省时,但是其回收率偏低;GB 29694—2013法与免疫磁富集法的回收率均可高达90%,与GB 29694—2013法相比,免疫磁富集法更省时,具有较大的应用前景。     

3种检测分枝杆菌方法的比较及应用价值分析

目的:比较并评价涂片抗酸染色法(涂片法)、L-J培养法和基因芯片法在分枝杆菌检测中的应用价值。方法:对241例需查抗酸杆菌的临床标本,采用涂片法、L-J培养法和基因芯片法检测分枝杆菌,3种方法检测结果存在分歧的标本再进行DNA测序,以培养鉴定结果阳性或DNA测序得到分枝杆菌序列为确诊标准。结果:241例标本,涂片法、L-J培养法和基因芯片法的检测阳性率依次为18.7%、12.0%、15.8%,经卡方检验三者阳性率的差异没有统计学意义(P0.05);检测灵敏度依次为85.4%、70.7%、93.0%,经卡方检验三种方法的灵敏度总体来说有差别(χ2=7.24,P0.05),涂片法与L-J培养法以及涂片法与基因芯片法的灵敏度差异没有统计学差异,基因芯片法的灵敏度高于涂片法(χ2=6.61,P0.05);检测特异性依次为95.6%、100.0%、100.0%。38例基因芯片检测阳性患者中有28例为结核分枝杆菌,10例为非结核分枝杆菌。结论:与涂片法及培养法相比较,基因芯片法能够鉴别分枝杆菌菌种,同时具有快速、可靠、准确度高的特点,在分枝杆菌感染的早期诊断和抗菌治疗上具有重要的临床价值。     

灰树花粗多糖的提取方法比较及其分离纯化

比较了几种常规粗多糖提取法与超临界CO2提取法对灰树花粗多糖提取的差异,同时对灰树花粗多糖进行脱蛋白、脱色研究。试验结果表明:热水浸提法所得灰树花粗多糖得率最高,为28.1%,而超临界CO2提取法所得粗多糖纯度最高,为39.3%。聚酰胺法脱蛋白及脱色效果较好,蛋白脱除率及脱色率分别为69.9%、61.9%,且多糖吸附率较低。将超临界CO2法提取的灰树花粗多糖采用聚酰胺法脱蛋白及脱色后,多糖得率为79.3%,纯度为50.1%。因此聚酰胺法是分离纯化灰树花粗多糖的一种简便、高效的方法。     

哌拉西林/他唑巴坦对三种非发酵菌体外敏感性检测方法的比较

目的评价不同方法检测无CLSI解释标准的3种非发酵菌———嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、脑膜脓毒性黄杆菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药性情况,以利于检测方法的选择应用。方法同时用标准K-B法、VITEK-32配套的药敏检测卡GNS-143法、E-test试条法检测临床分离的139株无CLSI解释标准的非发酵菌对哌拉西林/他唑巴坦的敏感性,并对3种方法相互间的符合情况进行比较。结果3种方法检测80株嗜麦芽窄食单胞菌,36株洋葱伯克霍尔德菌,23株脑膜脓毒性黄杆菌对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为:46.3%、82.5%、45.0%,77.8%、44.4%、52.8%,69.6%、52.2%、56.5%;耐药率分别为:32.5%、10.0%、48.8%,19.4%、38.9%、38.9%,17.4%、39.1%、21.7%。139株细菌3种方法间的符合情况:K-B法与VITEK法比较,完全符合率为51.1%、部分符合率为22.3%、完全不符合率为26.6%;K-B法与E-test试条法比较,三者分别为61.9%、15.8%、22.3%;VITEK法与E-test试条法比较,三者分别为56.1%、16.6%、27.3%。结论不同的方法检测同一种细菌对哌拉西林/他唑巴坦的药敏结果有较大不同,各方法间的可比性较差。嗜麦芽窄食单胞菌K-B法与E-test试条法符合性好于VITEK法,而其他2种细菌VITEK法好于K-B法。建议临床实验室对此类细菌的药敏检测仅报告实验检测结果,而不报药敏检测解释结果。     

临床标本细菌基因组DNA提取方法探讨

目的优化细菌基因组DNA提取方法,使其适合临床细菌分子生物学检测需要。方法分别采用专用DNA提取液法、热裂解法、溶菌酶法、热裂解法与碱性裂解法组合改良法,对纯培养细菌和临床标本中细菌基因组DNA进行提取。结果专用DNA提取液法、溶菌酶法提取成功率为100%,热裂解法革兰阳性菌提取成功率为0%,革兰阴性菌成功率为100%,碱性裂解液法在NaOH浓度大于4 mmol时提取成功,临床标本在NaOH溶液超过20 mmol/L并含2%SDS时细菌基因组DNA的提取成功率为100%。结论热裂解法与碱性裂解法组合改良法提取细菌基因组DNA方便快速、简单实用,适用临床标本检测。     

仙人掌多糖提取过程中脱蛋白方法的研究

用水提取的仙人掌多糖常含有蛋白质C,实验以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标,选用了Sevag法、三氯乙酸法和酶法对仙人掌多糖提取物进行脱蛋白处理。实验结果表明,酶法、三氯乙酸法和Sevag法的脱蛋白率分别为89.67%、56.20%和45.65%,多糖损失率分别为7.19%、9.49%和13.75%。因此,酶提取法是替代常规方法的一种有效方法。     

大白菜霜霉病菌寄生霜霉孢子囊的保藏方法

通过离体子叶冷冻法、离体叶片冷冻法和10%二甲基亚砜+5%脱脂乳冷冻法等3种方法来保藏大白菜霜霉病菌寄生霜霉,并采用离体子叶接种法测定孢子囊的致病力,以筛选出一种较好的保藏方法。结果表明,保藏6个月后,离体子叶冷冻法和离体叶片冷冻法保藏的孢子囊的萌发率、发病率和病情指数均较高;而10%二甲基亚砜+5%脱脂乳冷冻法保藏6个月后仅有2.16%的孢子囊能够萌发,菌株致病力丧失,发病率和病情指数均为0。保藏12个月后,离体子叶冷冻法保藏效果最好,孢子囊萌发率达到62.22%,发病率为90%,病情指数为48.89;离体叶片冷冻法保藏的孢子囊的致病力较弱;10%二甲基亚砜+5%脱脂乳冷冻法保藏12个月的孢子囊全部失活。此外,采用离体子叶冷冻法保藏12个月的32株寄生霜霉复壮成功率达到了93.75%。离体子叶冷冻法适用于寄生霜霉的保藏,其孢子囊可长时间保持较高的萌发率。     

化学发光微粒子免疫法和梅毒螺旋体颗粒凝集试验检测梅毒抗体的比较

目的评价化学发光微粒子免疫法（chemiluminescence microparticle immunoassay, CMIA）检测临床血清标本梅毒螺旋体抗体的敏感性和特异性。方法用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TVeponema Pallidum particie agglutination test,TPPA）法作为对照标准,采用CMIA法检测2012年11月到12月1200例住院患者的血清标本,并用卡方检验评价两种检测方法对同一个样本的化验结果的一致性。结果1200例血清标本中用CMIA法检出阳性率为11.3%,TPPA法检出阳性率为10. 9% ,以TPPA为标准,CMIA法敏感性为96. 9%,特异性为99. 2%,其中CMIA法检测血清S/CO值〉 4. 00的110例,用TPPA确认107例阳性,阳性预测值（PPV）为97.3%;CMIA法S/C0值在1.0-9.0,TPPA可出现阴性结果。结论CMIA法可替代TPPA法进行梅毒螺旋体抗体检测,对于CMIA法检测S/C0值1. 0-4.0的需进一步复检。     

天蓝色链霉菌胞内蓝色素提取方法研究

对天蓝色链霉菌— 10 0胞内蓝色素提取方法进行了研究 ,结果表明碱提取法、SDS法、研磨法的色素提取得率分别为 90 2 %、95 2 %和 54 6 % ;酶水解法的色素提取得率 <30 % ;细胞在pH9缓冲液中自溶 ,浓度为 1/4原发酵浓度 ,4 0℃保温搅拌 4 8h ,色素提取得率为 33 8%。     

响应面法优化螺旋藻藻蓝蛋白的超声波提取工艺

利用超声波破壁技术提取螺旋藻中的藻蓝蛋白,采用响应曲面法对工艺条件进行优化,模型决定系数(R2=99.95%)表明模型的拟合性好,得到的最佳工艺条件为:液料比为21 mL/g,超声波功率为640W,超声时间为14min。此条件下藻蓝蛋白的得率为10.76%,与模型预测值10.77%相近。对超声波提取法、冻融法、恒温浸提法进行比较研究,藻蓝蛋白的得率分别为10.76%、7.89%、6.57%,得知超声波提取法用时短、藻蓝蛋白得率高。     

洋葱伯克霍尔德菌感染家兔抗感染疗效与体外药物敏感性的比较

目的使用无CLSI完整解释标准的药物,哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/棒酸、头孢吡肟治疗洋葱伯克霍尔德菌感染的家兔模型,观察比较何种体外药物敏感试验更能准确反应临床疗效。方法 57株临床分离的洋葱伯克霍尔德菌,感染57只家兔腹腔。将感染家兔分成3组(A、B、C组),每组19只;分别在48、72、96、120和144 h注射药物:A组每只家兔注射1 mL浓度为2 g/mL哌拉西林/他唑巴坦;B组每只家兔注射1 mL浓度为0.1g/mL头孢吡肟;C组每只家兔注射1 mL浓度为0.6 g/mL替卡西林/棒酸。比较肉汤稀释法(MIC法)、K-B法及VITEK法检测的药物敏感性结果与体内药物治疗的疗效关系。结果哌拉西林/他唑巴坦治疗组(A组),K-B法检测结果与家兔感染模型治疗过程相符率为72.2%,MIC法66.7%,VITEK法为66.7%。替卡西林/棒酸治疗组(B组),MIC法83.3%,VITEK法为77.8%,K-B法检测结果与家兔感染模型治疗过程相符率为50.0%。头孢吡肟治疗组(C组),MIC法88.9%,VITEK法为77.8%,K-B法检测结果与家兔感染模型治疗过程相符率为72.2%。结论在3种药物敏感性检测法中,哌拉西林/他唑巴坦以K-B法检测结果与感染家兔的抗感染疗效最为接近;替卡西林/棒酸及头孢吡肟均以MIC法与感染家兔的抗感染疗效最为接近;针对洋葱伯克霍尔德菌的感染建议临床使用不同的方法检测不同的药物体外敏感性。     

不同方法检测淋巴瘤病理标本EB病毒的比较

目的 :探讨用不同方法检测淋巴瘤标本中EB病毒LMP 1的表达率以选择一种敏感、可靠的检测手段。方法 :运用SP法、CSA法检测EB病毒LMP 1在Raji细胞株细胞学涂片、12 3例淋巴瘤 (其中 10 4例NHL ,19例HL)切片中的表达 ,部分病例结合PCR加以验证。结果 :(1)细胞学涂片SP阳性细胞率为 70±10 % ,CSA法 10 0 %阳性。 (2 )HL中 ,SP法检测LMP 1阳性率为 6 / 19(32 % ) ,CSA法阳性率 8/ 19(4 2 % ) ,PCR阳性率为 11/ 19(5 8% )。 (3)非霍奇金淋巴瘤 (NHL)中SP法阳性率为 3/ 10 4 (其中B NHL 1/ 79,1 2 6 % ,T NHL2 / 2 5 ,8% )。CSA法阳性率为 9/ 10 4 ,其中B NHL4 / 79(5 % ) ,T NHL 5 / 2 5 (2 0 % ) ,ITCL达 2 / 10 (2 0 % )。结论 :SP法在检测低丰度抗原时漏检率较高 ,CSA法为一种较敏感、可靠的检测手段 ,结合PCR方法可有效检测低丰度抗原。     

四种营养评价法对肝硬化患者营养不良评价的一致性探讨

目的:探讨主观全面营养评价法(subjective global assessment,SGA)、简易营养评价法(mini-nutritional assessment,MNA)、简易营养评价精法(short form mini-nutrition assessment,MNA-SF)及欧洲NRS2002(Nutritional risk screening)营养风险筛检法四种营养评估法对肝硬化患者营养不良评价的一致性。方法:采用SGA、MNA、MNA-SF、NRS2002四种营养评估法对本院收治的肝硬化患者49例进行营养评估,应用诊断一致性检验评价四种营养评估法之间的一致性。结果:四种方法评估肝硬化营养不良发生率分别为:SGA法为32.7%,MNA法为67.3%,MNA-SF法为51.0%,NRS2002法为40.8%;四种营养评估法吻合程度从强到弱依次为:MNA法与MNA-SF法,k=0.671;SGA法与MNA-SF法,k=0.554;MNA-SF法与NRS2002法,k=0.553;MNA法与NRS2002,k=0.501;SGA法与NRS2002法,k=0.477;SGA法与MNA法,k=0.381...     

7种不同提取方式对香露兜挥发性成分的影响

为了解不同提取方式对香露兜挥发性成分的影响,以采自海南兴隆的香露兜成熟鲜叶为研究对象,采用100%甲醇蒸馏法、75%乙醇蒸馏法、100%乙醇蒸馏法、75%乙醇超声波辅助法、100%乙醇超声波辅助法、75%乙醇浸提法和100%乙醇浸提法7种不同方式进行提取,利用气相色谱-质谱法(GC-MS)测定各提取物的挥发性成分,并结合主成分分析(PCA)和相关分析(CA)对其组成和含量差异进行比较分析。结果表明,7种不同提取方式共鉴定出52种挥发性成分,主要由酯类、醇类、酮类、烯烃类、吡咯类物质组成,100%甲醇蒸馏法未检测出关键特征香气物质2-乙酰-1-吡咯啉(2-AP),其余6种方式提取物均有检出,含量变幅为1.21～37.48μg/g;7种香露兜提取物相关性系数平均值为34.80%±7.20%,PCA分析将7种提取方式分为3组:75%、100%乙醇超声波辅助提取法和75%、100%乙醇浸提法主要挥发性成分为叶绿醇、角鲨烯、3-羟基-2-丁酮、棕榈酸乙酯、羟基丙酮、3-甲基-2-(5H)-呋喃酮和2-AP,75%和100%乙醇蒸馏提取法主要挥发性成分为硬脂酸甲酯、2-AP、(E)-7-四癸醇和棕榈酸甲酯,100%甲醇蒸馏提取法主要挥发性成分为(Z)-十六烯酸甲酯、苯乙烯、十四酸甲酯、十五碳酸甲酯。由此说明,香露兜7种不同方式提取物3个组间挥发性成分的组成和含量存在差异,这为香露兜产品精深加工提供了理论依据。     

Immuno-PCR法诊断早期梅毒的方法学建立及其应用

目的建立Immuno-PCR法诊断早期梅毒的方法学,评价其灵敏度、特异性、重复性及其临床应用。方法利用基因重组TpN47抗原免疫新西兰兔,制备抗体并用Weston blotting检测;利用抗TpN47抗体作为捕获抗体与血清中TpN47抗原结合,通过链霉亲和素、生物素化抗体、生物素化DNA和PCR扩增等建立Immuno-PCR法检测梅毒螺旋体抗原TpN47体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;收集200例临床标本通过Immuno-PCR法、ELISA、TPPA和TURST法进行临床应用比较。结果 Weston blotting结果显示TpN47抗体阳性;Immuno-PCR比ELISA法敏感性强103倍,比TPPA、TURST强105倍;特异性高,重复性好。临床标本中Immuno-PCR法敏感性和特异性分别为86.00%（P〈0.05）和100.00%,ELISA法为71.00%和98.00%,TPPA法为65.00%和100.00%,TRUST法为68.00%和95.00%。结论 Immuno-PCR法检测梅毒螺旋体TpN47抗原敏感性高,特异性强,重复性好,可作为梅毒螺旋体感染的早期诊断方法 。     

水浴回流与超声波辅助回流提取百合皂苷工艺比较研究

分别采用单因素试验法和正交试验法对水浴和超声波辅助回流提取法对百合总皂苷的提取工艺进行比较,获得最佳水浴回流提取工艺为:乙醇浓度为50%、温度为90℃、提取时间为3 h、固液比为1∶18。在该工艺条件下百合皂苷的提取率为1.98%;超声波辅助回流提取最佳工艺为:温度为90℃、乙醇浓度为70%、提取时间为25 min、固液比为1∶30、提取功率为105 W。在该工艺条件下百合皂苷的提取率为2.33%,超声波辅助回流提取法的百合皂苷提取率和稳定性、重复性都优于传统的水浴回流提取法。     

实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌的比较

目的比较实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌中沙门菌与志贺菌的结果并分析总结。方法对江苏盛泽医院2010年到2014年就诊的腹泻患者4 662例的粪便标本同时进行实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测,对其结果进行统计学分析,并对所有实时荧光定量PCR检测阳性标本进行常规细菌鉴定法检测,对所有结果进行分析与总结。结果实时荧光定量PCR法检测沙门菌阳性85株,阳性率为1.82%;志贺菌阳性192株,阳性率为4.12%;常规细菌鉴定法检测沙门菌阳性81株,阳性率为1.74%;志贺菌阳性184株,阳性率为3.95%,两种方法比较差异无统计学意义(P0.05)。对实时荧光定量PCR检测阳性标本进行常规细菌鉴定法检测,阳性率为100%。结论实时荧光定量PCR法检测沙门菌与志贺菌结果可靠,检测时间短,更能满足临床诊断肠道疾病的需求。     

成年大鼠气管插管方法的改良

目的寻找一种较好的成年大鼠气管插管方法;方法对比明视经口气管内插管法与逆行导管引导插管法的成功率及并发症;结果明视经口气管内插管法的成功率为100%,逆行导管引导插管法的成功率为87%。插管后并发症明显低于逆行导管引导插管法。结论明视经口气管内插管法优于逆行导管引导插管法,值得推广应用。