忍冬木层孔菌液体培养过程中多酚含量及抗氧化活性研究

忍冬木层孔菌是木层孔菌属的一种药用真菌,目前对它的研究少有报道。以液体培养为基础,研究忍冬木层孔菌培养过程中生物量、胞内外多酚含量的变化,以及胞内外提取物抗氧化活性的变化。结果显示,菌丝体生物量在培养168–216h时达到最大值（8.33g/L）;胞内多酚和胞外多酚含量分别在216h和168h时达到最大值（15.60mg GAE/g和106.76mg GAE/L）;液体培养胞内外提取物的抗氧化活性与多酚含量正相关,多酚含量高时提取物对DPPH[1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl]自由基的抑制率也高。     

草菇培养物中粗三萜和黄酮含量及抗氧化抗肿瘤活性研究

采用液体摇瓶法培养草菇菌丝体,并用不同有机溶剂对培养液及菌丝体中的代谢成分分别进行分离提取,获得了不同来源的次生代谢提取物。对各提取物的成分分析表明,石油醚相、乙酸乙酯相和乙醇相提取物中均含有粗三萜和黄酮类物质,但菌丝体提取物中粗三萜和黄酮含量明显高于培养液提取物中的含量。石油醚抽提菌丝体获得的提取物中粗三萜含量最高,达17%,而乙酸乙酯抽提菌丝体获得的提取物中黄酮含量最高,达9.31%。抗氧化活性检测结果显示,石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相中的代谢提取物均有较高的抗氧化活性,但乙酸乙酯相提取物的抗氧化活性明显高于石油醚相提取物,具最高抗氧化活性的提取物分别来自乙酸乙酯、乙醇对菌丝体的抽提物。MTT法检测各提取物对胃癌细胞增殖的抑制作用,结果显示各组分均有较高的抗肿瘤活性,且抗肿瘤活性与提取物浓度存在明显的量效关系。     

草菇培养物中粗三萜和黄酮含量及抗氧化抗肿瘤活性研究

采用液体摇瓶法培养草菇菌丝体,并用不同有机溶剂对培养液及菌丝体中的代谢成分分别进行分离提取,获得了不同来源的次生代谢提取物。对各提取物的成分分析表明,石油醚相、乙酸乙酯相和乙醇相提取物中均含有粗三萜和黄酮类物质,但菌丝体提取物中粗三萜和黄酮含量明显高于培养液提取物中的含量。石油醚抽提菌丝体获得的提取物中粗三萜含量最高,达17%,而乙酸乙酯抽提菌丝体获得的提取物中黄酮含量最高,达9.31%。抗氧化活性检测结果显示,石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相中的代谢提取物均有较高的抗氧化活性,但乙酸乙酯相提取物的抗氧化活性明显高于石油醚相提取物,具最高抗氧化活性的提取物分别来自乙酸乙酯、乙醇对菌丝体的抽提物。MTT法检测各提取物对胃癌细胞增殖的抑制作用,结果显示各组分均有较高的抗肿瘤活性,且抗肿瘤活性与提取物浓度存在明显的量效关系。     

鹅膏菌抑真菌活性及其活性物质的提取工艺优化(英文)

通过鹅膏菌抑菌活性物质对杨树烂皮病病原菌金黄壳囊孢菌的菌丝生长及其孢子抑制效果的研究,分析鹅膏菌的抗真菌活性。将培养15 d的鹅膏菌液体发酵物分成培养液和菌丝体两部分,然后分别将培养液、菌丝体提取物和发酵液本身对金黄壳囊孢菌菌丝生长和孢子萌发抑制效果进行检测。结果表明:培养液对金黄壳囊孢菌菌丝生长的抑制率最高,为68.90%;三者对孢子萌发都有明显的抑制效果,即在处理后10 d孢子都没有萌发。菌丝体在超声波、加热和浸泡的条件下,利用乙醇,丙酮、乙酸乙酯和正丁醇进行提取,其提取物用于病原菌的抑制效果检测,结果表明:用乙醇和丙酮提取时,超声波、浸泡及加热处理,对金黄壳囊孢菌的抑制效果都与对照有显著差异(a=0.01),而正丁醇的提取物的抑制效果较差,与对照没有显著差异。通过不同提取物对金黄壳囊孢菌菌丝生长和孢子萌发的抑制效果进行分析,并对抑菌活性物质提取工艺进行筛选,得到抑菌活性物质提取的最佳方法为摇床培养,乙醇是最适提取溶剂,处理方式(超声波、浸泡或者加热)相互间差异不显著。     

pH对灵芝液态发酵代谢物及抗氧化活性的影响

已有研究报道灵芝栽培生长的最适pH在中性偏酸环境,在碱性范围的生长及代谢情况鲜见报道。本研究主要探究广泛pH对灵芝液态发酵代谢物及其抗氧化活性的影响。采用摇瓶液态培养后分析代谢物中灵芝三萜、胞内外多糖、菌丝体蛋白及抗氧化活性等指标,系统比较灵芝菌丝体在pH值2-11的生长和代谢情况。研究结果表明,灵芝菌丝体生长、合成灵芝三萜、胞内多糖、30E胞外多糖、菌丝体蛋白和菌丝体水解氨基酸的最适pH值分别为10、3、2、7、2和2。对应结果分别为17.13 g/L、33.86 mg/g、72.73 mg/g、7.86 g/L、71.42 mg/g和107.10 mg/g。比对照分别提高28.5%、77.3%、22.4%、96.5%、97.1%和70.8%。胞内多糖组分1和组分2最高分子量均在初始pH 4,分别为1.016×10⁸ g/mol和9.280×10⁴ g/mol,胞外多糖组分1最高分子量在初始pH 10,为4.946×10⁶ g/mol;对菌丝体的总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力、羟自由基清除能力分析结果表明最佳的初始pH分别为3、7、9。本研究为液态发酵方式下灵芝生长及其代谢物定向调控发酵的工艺优化提供参考依据,同时发现灵芝菌丝体中优质蛋白及抗氧化活性可在功能性食品和化妆品领域推广应用。     

光照和pH对药用真菌二型附毛孔菌液体培养过程中抗氧化活性的影响

本文以多酚含量、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性为测定指标,研究了不同光照和pH条件对药用真菌二型附毛孔菌Trichaptum biforme液体培养过程中抗氧化活性的影响。结果显示,二型附毛孔菌在液体培养过程中具有抗氧化活性。一定的光照可提高其分泌次级代谢产物的能力及抗氧化活性,14d光照条件下,多酚含量和T-AOC分别在第12天和第10天达到峰值,为1.85mg/m L和3.99U/m L;1d黑暗、1d光照交替的光照条件下,DPPH自由基清除率和SOD活性均于第2天达到最大值,分别为87.44%和0.63U/m L。不同pH条件对二型附毛孔菌液体培养过程中的抗氧化活性影响更大。当pH为9.0时,二型附毛孔菌在液体培养过程中分泌的多酚含量、T-AOC、SOD活性和DPPH自由基清除能力均最高,分别于第2天、第10天、第2天和第2天达到2.92mg/m L、5.22U/m L、0.70U/m L和95.07%。其次是pH 3.0,最后是pH 5.0和7.0,说明偏碱或偏酸条件更能刺激药用真菌二型附毛孔菌通过分泌大量次级代谢产物以抵抗来自微环境的氧化压力。     

培养条件对毛栓菌菌丝体生长和多酚氧化酶分泌的影响

研究了碳源、氮源、培养温度、初始pH值、接种量、通气量等条件对毛栓菌（Trametes trogii)菌丝体生长及多酚氧化酶分泌的影响;结果表明,不同碳源和氮源对菌丝体生长影响较大,对多酚氧化酶分沁也有较大影响,麦草粉和麸皮为碳源,玉米粉、硫酸铵为氮源有利于多酚氧化酶的分泌;初始pH值对酶活影响较小,培养温度、通气量等对酶活影响较大。     

光照和pH对血红密孔菌生长及抗氧化活性的影响

探究不同光照和pH对药用真菌血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)生长及抗氧化活性的影响。分别设置了3个不同光照条件组(14 d光照、光照黑暗交替和黑暗)和4个pH组(pH 3、5、7和9),并在菌种培养的第2、4、6、8、10、12和14天测定其生物量、DPPH自由基清除率和总抗氧化能力(T-AOC)。血红密孔菌在14 d黑暗环境中有最大生物量和最强T-AOC活性。14 d黑暗条件下更利于血红密孔菌的生长,其生物量于第10～14天大量增加,并于第14天达到最高值,为4.49 g/L,生物量高出光照及更替条件近1.5倍。T-AOC活性在第12天最高,为25.10 U/mL。14 d黑暗培养环境下DPPH自由基的清除率也较高。不同pH条件对血红密孔菌培养过程中各项指标影响不同。当pH为5时血红密孔菌生长过程中产生的生物量于第10天最高,为7.12 g/L。而DPPH自由基清除率和T-AOC则在pH 7时第10天最高,分别为94.99%和64.34 U/mL;pH 7时次之。说明偏酸环境更能适宜血红密孔菌的生长,而中性及偏碱环境则有利于提高该菌的抗氧化能力。     

锦带花纤孔菌液体培养过程中的抗氧化活性

为更好地研究和开发药用真菌锦带花纤孔菌(Inonotus weigelae)的药理作用,以菌丝体生物量、p H、还原糖含量、漆酶活性、多酚含量、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力为检测目标,对锦带花纤孔菌在液体培养过程中的抗氧化活性进行了评价。结果显示,抗氧化活性与菌株生长状况、胞外酶活性及次级代谢产物分泌密切相关。菌丝体生物量增长呈"S"型,6-12 d迅速增长,第12天达到最大值,在此过程中还原糖含量、漆酶活性及多酚含量均出现高峰,且菌丝体生物量的变化趋势与漆酶活性和多酚含量基本一致,说明菌株的营养利用与生理代谢相互依存。SOD活性与T-AOC在培养过程中均呈上升趋势,说明菌株在氧化胁迫的压力下可启动自身的抗氧化系统以抵御外界的损伤。此外,锦带花纤孔菌对DPPH自由基的清除能力也较强,第2天时清除率为78.56%,第14天时仍能达到50%以上。结果证明药用真菌锦带花纤孔菌具有较强的抗氧化活性。     

绒毛栓孔菌液体培养过程中胞外酶活性的研究

本研究以绒毛栓孔菌为材料,采用液体培养的方法分析其在发酵过程中胞外酶的活性变化,并对其菌丝体生物量和发酵液pH值进行了测定。结果表明:胞外酶活性与菌丝体生长状况密切相关。菌丝体生物量增长呈"S"型,6～8d增长最快,第12天达到最大值,在此过程中漆酶、锰过氧化物酶、淀粉酶、羧甲基纤维素酶、果胶酶和蛋白酶活性均出现高峰。酶活性的变化表明,在液体培养过程中绒毛栓孔菌首先分解木质素,其次利用淀粉和纤维素作为碳源,蛋白质作为氮源。若要获得最大菌丝体生物量,缩短培养时间,就必须在培养过程中保证碳氮源的均衡供给。本试验说明不同的酶其分泌高峰期可以作为判断菌丝体营养利用情况和培养周期的依据,以此获取最大菌丝体生物量,为工业生产利用奠定基础。     

7种广西产甜茶抗氧化活性的比较

通过清除二苯代苦味酰基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法、铁离子还原测定(ferric reducing antioxidant power,FRAP)法、亚铁离子螯合(ferrous ion-chelating,FIC)法、β-胡萝卜素-亚油酸法等4种体外抗氧化活性测定方法,首次比较了3种茶科属茶叶和7种广西产甜茶水提物的抗氧化活性,同时用Folin-Ciocalteus法测定了其总多酚的含量。研究结果表明,多穗柯甜茶和藤茶的总多酚含量高于其他供试品。藤茶具有很好的清除DPPH·的能力,高于绿茶及阳性对照水溶性维生素E(Trolox)和人工合成抗氧化剂二丁基羟基甲苯(butylated hydroxytoluene,BHT)。甜叶菊茶和悬钩甜茶的金属离子螯合能力均高于绿茶。其中,黄杞和牛白藤两种植物的抗氧化活性为首次报道。由此可见,广西产甜茶均具有较高的开发利用价值,是治疗和防治慢性代谢性疾病的重要研究对象。对广西产甜茶的研究对于了解和抢救某些少数民族的历史文化具有重要意义,为别样茶的抗氧化研究奠定了基础,值得进一步探索和开发。     

药用真菌灵芝液体培养过程中的抗氧化活性研究

灵芝Ganoderma lingzhi是一种重要的药用真菌,已被《中国药典》正式收录。本研究主要以菌丝体干重、多糖含量、多酚含量、黄酮含量、抗坏血酸（ascorbic acid,AA）含量、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力、2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)[2,2′-azino-bis(3- ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid),ABTS]自由基清除能力、铁离子还原能力（ferric reducing antioxidant power,FRAP）和亚铁离子螯合能力为测定指标,对灵芝液体培养过程中的抗氧化活性进行了评价。结果显示,该菌具有较高的抗氧化活性,体现在液体培养过程中生长代谢旺盛,可分泌大量多糖、多酚、黄酮、AA等物质和SOD等酶类,对羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基及ABTS自由基等的清除效果显著,且具有较强的铁离子还原能力和亚铁离子螯合作用,这也说明该菌的抗氧化活性与其自身的生长状况、次级代谢产物分泌及还原能力等密切相关。此外,一定的环境胁迫压力也可以激发该菌启动自身的抗氧化系统以保护机体免受氧化损伤。     

栎生桑黄和忍冬桑黄液体培养过程中发酵液抗氧化能力

桑黄孔菌属Sanghuangporus是药用木生真菌资源中一个重要的属,但是该属仅有少数几个种类被用于人工栽培,且栽培面积较小。此外,桑黄孔菌属中大部分种类的药用功能仍未完全明确。因此,本研究以桑黄孔菌属近期新发表的新种栎生桑黄S. quercicola和关注度较低的忍冬桑黄S. lonicericola为主要研究对象,通过测定它们液体培养过程中第2、4、6、8、10、12和14天的菌丝生物量以及发酵液的粗多糖含量、多酚含量、黄酮含量、抗坏血酸含量、DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力、铁离子还原能力和亚铁离子螯合能力等12个抗氧化指标,对桑黄的抗氧化能力进行评定。2种桑黄真菌各选取一号菌株,其发酵液均表现出强抗氧化能力。相比之下,栎生桑黄的多糖、抗坏血酸和超氧化物歧化酶含量更高,而忍冬桑黄的多酚和黄酮含量更高。相应的,栎生桑黄和忍冬桑黄在其他一些抗氧化指标上也表现出强弱程度及出现时间的差异。上述研究结果为桑黄孔菌属真菌的药用功能开发提供了新资源,为不同抗氧化代谢产物的分离纯化提供了科学依据。     

分离自茯砖茶的真菌菌株MJAU EC021的鉴定及培养过程中生理特性

【目的】从茯砖茶样中分离纯化得到生长优势菌株,研究其液体培养时的生理生化特性,为茯砖茶实际生产提供依据。【方法】用PDA平板稀释涂布法从茯砖茶中分离纯化菌株。采用常规真菌发酵培养方法,单因素筛选其培养条件,再利用响应面法优化最优培养条件,测定冠突散囊菌发酵液中还原糖、多酚、胞外酶酶活及抗氧化的能力。【结果】利用形态学与ITS序列分析鉴定优势菌株MJAU EC021为冠突散囊菌Eurotium cristatum;最优的培养条件:转速187 r/min,培养时间10 d,培养温度28°C,冠突散囊菌生物量为21.52 g/L。冠突散囊菌发酵培养过程中4种胞外酶活性均在第10天时达到最大值,第9天时胞外多酚含量达到峰值为0.588 g GAE(没食子酸)/m L;发酵液对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)、羟基自由基的清除率达到最大值分别是90%、94%。【结论】真菌菌株MJAU EC021是株冠突散囊菌E.cristatum,发酵液具有较好的抗氧化能力,是潜在的抗氧化添加剂。     

Antioxidant activity of polyphenolic extracts of Ichnocarpus frutescens

In the present study antioxidant activities by (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical (DPPH), hydrogen peroxide, hydroxyl radical inhibition, hemolysis by hydrogen peroxide assay, reducing power and total antioxidant activities of polyphenolic extract of Ichnocarpus frutescens leaves were investigated. The flavonoids and total polyphenolic contents of the extract were also determined using standard methods. Phytochemical analyses revealed the presence of flavonoids, polyphenols, anthocyanins and simple phenolic acids. The results of antioxidant activities of polyphenol extract obtained by different in vitro methods were varied depending on the method used. Nevertheless, polyphenol extract showed significant inhibitory activities in all in vitro reactive oxygen species scavenging, might be attributed due to the high level of polyphenolic compound. Also, these various antioxidant activities were compared to α-tocopherol and l-ascorbic acid as reference antioxidant compounds. These findings provide evidence that the polyphenolic extract of I. frutescens is a natural source of antioxidant against oxidative damage.     

蛹虫草无性型菌丝体提取液体外抗氧化活性研究

分别测定了蛹虫草无性型菌丝体不同溶剂提取液在不同抗氧化模型中的抗氧化作用。结果表明,各种提取液对二苯基苦味酰基苯肼自由基(·DPPH)和羟自由基(·OH)均有显著的清除作用:在50mg/mL时,去离子水、70%乙醇和70%丙酮提取物对DPPH自由基的清除率分别为89.2%、83.6%和75.9%;70%乙醇提取物在30mg/mL时对·OH自由基的清除率达到100%;在50mg/mL时70%丙酮和去离子水提取物的·OH自由基清除率分别为95.6%和89.6%。在一定浓度下,各提取液对邻苯三酚自氧化也均有抑制作用;不同溶剂提取物的还原能力强弱为:70%乙醇>去离子水>70%丙酮。各种提取物的抗氧化组分不同,提取物浓度与抗氧化性成正相关。     

九州虫草菌丝体对Mn的耐性及富集

重金属耐性真菌的研究是生物修复的重要研究内容。本文研究了九州虫草（Cordyceps kyusyuensis）对于Mn的耐性及富集。在液体培养基中添加不同浓度（0—60 g/L）的Mn离子,测定其菌丝生物量、菌丝Mn含量、菌丝抗氧化酶活性和过氧化水平以及菌体细胞离子交换量、Mn在细胞中的分布的变化情况。实验结果表明九州虫草菌丝生物量与Mn浓度呈显著负相关,Mn浓度60 g/L为九州虫草菌丝生长极限浓度。菌丝中Mn含量随培养基中Mn浓度的增大而显著升高,10 g/L Mn时,菌丝细胞中Mn积累量达到细胞干重的1.0013%。九州虫草菌丝中过氧化产物丙二醛（MDA）、可溶性蛋白（SP）含量、可溶性糖浓度与培养基中Mn浓度呈负相关,实验组与对照组差异显著。抗氧化酶（过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD））活性随着培养基中Mn浓度增大而显著升高,但变化趋势不同。九州虫草菌丝细胞不可溶性组分中Mn的量（91.51%—98.6%）显著高于可溶部分（1.40%—8.49%）。九州虫草菌丝细胞壁离子交换量（CEC）随着培养基中Mn浓度的升高变化不明显。说明在九州虫草菌丝对Mn的富集过程中,其细胞壁、细胞膜和细胞器对于Mn结合发挥了主要作用,细胞质中可溶性成分对Mn的结合发挥次要作用。在Mn的胁迫下,增强抗氧化酶系统的协同作用以清除大量自由基是细胞对锰耐性的重要机制。     

Structure-activity relationship analysis of antioxidant ability and neuroprotective effect of gallic acid derivatives

Gallic acid and its derivatives are a group of naturally occurring polyphenol antioxidants which have recently been shown to have potential healthy effects. In order to understand the relationship between the structures of gallic acid derivatives, their antioxidant activities, and neuroprotective effects, we examined their free radical scavenging effects in liposome and anti-apoptotic activities in human SH-SY5Y cell induced by 6-hydrodopamine autooxidation. It was found that these polyphenol antioxidants exhibited different hydrophobicity and could cross through the liposome membrane to react with 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) free radical in a time and dose-dependent manner. At the same time, the structure-antioxidant activity relationship of gallic acid derivatives on scavenging DPPH free radical in the liposome was also analyzed based on theoretical investigations. Analysis of cell apoptosis, intracellular GSH levels, production of ROS and the influx of Ca(2+) indicated that the protective effects of gallic acid derivatives in cell systems under oxidative stress depend on both their antioxidant capacities and hydrophobicity. However, the neuroprotective effects of gallic acid derivatives seem to depend more on their molecular polarities rather than antioxidant activities in the human SH-SY5Y cell line. In conclusion, these results reveal that compounds with high antioxidant activity and appropriate hydrophobicity are generally more effective in preventing the injury of oxidative stress in neurodegenerative diseases.