酶解-凝胶色谱法制备志贺氏菌脂多糖

应用核酸酶及蛋白酶K降解作初提,经凝胶色谱纯化的程序提取了较高纯度的志贺氏菌脂多糖,产率为5.28％。并初建以254nm/425nm波长用于监测脂多糖的新方法。     

脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白分型研究的进展

<正> 脑膜炎奈瑟氏菌是引起流行性脑脊髓膜炎(流脑)的病原菌,其细胞的超微结构是比较复杂的。核区含有DNA组成的纤维样核质,胞浆区含有丰富的核糖体(Ribosome),胞浆膜与双层膜结构,浆膜外间有致密的肽聚糖层(Peptidoglycan)或粘肽层(Mucopeptide)。外膜(Outer mem-brane)是一种起伏不平的膜,其厚7.5nm。外膜是多糖(群特异性多糖,脂多糖)、脂类和蛋白质复合物。外膜蛋白常以脂多糖和     

脂多糖对镉致河南华溪蟹免疫因子毒性的调节作用

目的:探讨免疫刺激剂脂多糖对镉处理后的河南华溪蟹是否有调节作用,以及脂多糖的作用机理。方法:设置5个脂多糖处理组(0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μg/m L)和1个对照组(无菌生理盐水),分别刺激溪蟹12、24和48 h后,根据机体中血淋巴细胞总数和溶菌酶活力的变化,选取脂多糖最佳作用条件;镉暴露溪蟹96 h后,按最佳作用条件注射脂多糖(8.0μg/m L,24 h),测定血清中溶菌酶和酸性磷酸酶活力。结果:脂多糖刺激溪蟹后,血细胞数量和溶菌酶活力的变化表现出时间-剂量效应;镉暴露后注射脂多糖,溪蟹血清中溶菌酶活力无显著变化,而酸性磷酸酶活力与镉单独作用组相比显著升高。结论:脂多糖对河南华溪蟹免疫系统有良好的刺激作用,该研究为探讨脂多糖对甲壳动物刺激作用机理提供了理论基础,同时也可为脂多糖作为免疫增强剂在水产养殖中的研究应用提供参考。     

沉默NHEJ修复通路中关键蛋白Ku70在牙髓干细胞增殖和凋亡中的作用及其机制研究

目的:研究沉默非同源重组修复(non-homologous endjoining,NHEJ)通路中关键蛋白Ku70在牙髓干细胞增殖和凋亡中的作用,分析其机制。方法:提取健康恒牙牙髓组织,进行牙髓干细胞培养。采用脂多糖诱导人牙髓干细胞,分为对照组、阴性对照组、脂多糖组、沉默组和沉默+脂多糖组。观察Ku70免疫组化情况,进行细胞增殖、细胞凋亡实验,检测γ-H2A.X、Ku70、X线修复交叉互补基因4(X-ray repair cross complementary gene 4,Xrcc4)、Rad51 m RNA、Cleaved Caspase-3、p-p38水平。结果:与沉默组相比,对照组、阴性对照组、脂多糖组、沉默+脂多糖组各时间段牙髓干细胞增殖降低;沉默+脂多糖牙髓干细胞增殖高于脂多糖组(P<0.05)。随时间延长,脂多糖组牙髓干细胞增殖不断降低,其他四组牙髓干细胞增殖不断升高,其中在第5 d变化最明显。第5d,与沉默组相比,对照组、阴性对照组牙髓干细胞凋亡率、γ-H2A.X、Rad51 m RNA,Cleaved Caspase-3降低,p-p38升高;脂多糖组、沉默+脂多糖组各项指标较高,p-p38降低;对照组、阴性对照组、脂多糖组、沉默+脂多糖组Ku70、Xrcc4 m RNA降低(P<0.05)。沉默+脂多糖组牙髓干细胞凋亡率、γ-H2A.X、Rad51 m RNA,Cleaved Caspase-3低于脂多糖组,p-p38高于脂多糖组(P<0.05)。结论:沉默Ku70能促进脂多糖诱导的牙髓干细胞增殖,抑制其凋亡,其可能与γ-H2A.X、Rad51 m RNA表达降低,Ku70,Xrcc4升高有关。     

大肠杆菌细胞外膜渗透性与脂多糖结构的关系

细胞外膜是大肠杆菌的半透膜屏障, 其主要成分是脂多糖。选取并构造共9种具有不同脂多糖结构的大肠杆菌, 用于考察脂多糖结构对细胞外膜渗透性的影响。从9种菌株中提取出脂多糖和类脂A, 并且用薄层层析色谱和离子源质谱来鉴定其结构。用N-苯基-1-萘胺作为荧光探针来测定细胞外膜渗透性大小。野生型大肠杆菌表现出最小的渗透性, 因敲除或表达某些基因而导致脂多糖结构改变的突变株均表现出较高的渗透性。脂多糖上的磷酸基团、脂肪酸链和多糖链的改变都影响了大肠杆菌的渗透性, 其中多糖链长度的改变对渗透性影响最大, 其次是脂肪酸链的数目变化。实验结果表明渗透性和脂多糖的结构具有较强的相关性。     

部分革兰氏阴性菌脂多糖运输蛋白LptD的结构及功能研究进展

在革兰氏阴性菌中,脂多糖是外膜的重要组成部分,并参与构成细菌的固有免疫。而在大多数革兰氏阴性菌中,Lpt系统都是运输脂多糖的唯一途径,在该系统中LptD作为一个跨膜的外膜蛋白,也是脂多糖输出的最后一步,因此被许多学者称作脂多糖运输的"命门"。LptD参与多种重要的生物学功能,包括有机溶剂耐受性、疏水性抗生素耐受性、膜通透性等。但近来的研究表明,LptD最重要的功能是参与了脂多糖的运输,也因为其参与脂多糖运输而具有了多种功能。本文重点介绍部分革兰氏阴性菌LptD的蛋白结构及其功能研究进程,以期为进一步研究其它革兰氏阴性菌脂多糖运输通路(Lpt通路)及该通路上各蛋白间的相互作用机制提供参考。     

大鼠脂多糖结合蛋白的分离纯化及对脂多糖的调节作用

经硫酸铵沉淀、Bio Rex70树脂的阳离子交换层析和MonoQ预装柱的阴离子交换层析 ,从大鼠急性期血清中分离纯化了脂多糖结合蛋白 .SDS PAGE为单一条带 ,分子量 60kD ,所纯化的大鼠脂多糖结合蛋白可明显增强脂多糖与单核巨噬细胞的结合 .脂多糖结合蛋白对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中肿瘤坏死因子α(TNF α)mRNA表达的调节作用具有明显的剂量依赖性 .     

CCl4和脂多糖诱导的急性肝损伤中肝细胞凋亡病理特点比较

目的比较CCl4和脂多糖诱导的两种急性肝损伤模型中肝细胞凋亡的病理特点。方法雄性BABL/c小鼠随机分为正常组、CCl4模型组与脂多糖模型组。CCl4和脂多糖模型小鼠分别腹腔注射0.03 mL/kg 50?l4/橄榄油混合液和10μg/kg脂多糖与900μg/kg半乳糖胺。9 h后采集标本,检测肝细胞凋亡,血清ALT、AST活性,肝组织SOD活性、MDA含量。结果与正常组比较,CCl4和脂多糖模型小鼠血清ALT与AST活性均明显升高(P<0.01),且脂多糖模型高于CCl4模型(P<0.01);模型小鼠均有明显肝细胞凋亡(P<0.01),且两组间无显著差异,但CCl4模型呈局灶性,以中央静脉周围为主;脂多糖模型呈弥漫性,肝细胞坏死与肝组织炎症更显著(P<0.01)。CCl4和脂多糖模型肝组织均SOD活性升高、而MDA含量下降(P<0.01),但CCl4模型更显著(P<0.05)。结论CCl4与脂多糖诱导的急性肝损伤小鼠模型均有明显的肝细胞凋亡,但CCl4模型以中央静脉区为主,脂质过氧化损伤更为明显;脂多糖模型呈弥漫性,肝细胞坏死与肝组织炎性反应较重。     

微生物脂多糖的产生、分离及乳化性能

Acinetobacter sp．生长在醇类、植物油或正烷烃中能产生胞外脂多糖。探讨了此菌株产生胞外脂多糖的最佳条件,包括不同碳源．不同氨源,二价镁离子及添加抗菌素等对其产量的影响。脂多糖含量的测定采用了乳化比浊度的方法。研究表明,此胞外脂多糖具有明显的乳化性及乳化稳定性,是一种聚合的生物乳化剂。     

脂多糖信号通路中的蛋白质修饰

革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖,又称内毒素,感染宿主后可导致脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合症. 脂多糖借助信号转导通路诱发宿主的应答,刺激免疫细胞产生大量具有致热效应的炎性细胞因子,引起免疫系统的过度活化. 近年来,研究脂多糖受体TLR4及其信号转导在先天免疫和获得性免疫中的作用,以及脂多糖信号通路的复杂调控机制取得了突破性进展. 其中蛋白质翻译后修饰参与脂多糖信号通路调节的研究成为这一领域的新热点之一. 本文总结了磷酸化修饰、泛素化修饰、ISG15化修饰和SUMO化修饰在调节脂多糖信号通路方面的作用.不仅对被修饰蛋白如何传递和调节脂多糖信号以及翻译后修饰在该过程中的作用进行了阐述,还着眼于不同翻译后修饰形式之间的关联.脂多糖信号通路的深入研究不但有助于阐明内毒素相关疾病的分子机理,还可为临床预防和治疗革兰氏阴性细菌感染所致疾病提供新靶点.     

微生物脂多糖的产生、分离及乳化性能

Acinetobacter sp．生长在醇类、植物油或正烷烃中能产生胞外脂多糖。探讨了此菌株产生胞外脂多糖的最佳条件,包括不同碳源．不同氨源,二价镁离子及添加抗菌素等对其产量的影响。脂多糖含量的测定采用了乳化比浊度的方法。研究表明,此胞外脂多糖具有明显的乳化性及乳化稳定性,是一种聚合的生物乳化剂。     

新型硫化氢供体GYY4137对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:急性肺损伤是临床上常见的危重病,发病急,死亡率高,目前仍缺乏有效的治疗手段,新型的外源性硫化氢供体GYY4137具有抗炎、抗休克、抗癌及抗血栓等作用,本研究探讨其对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法:将BALB/c小鼠(18-20 g)随机分为3组:正常对照组(20只),脂多糖组(20只),治疗组(20只),然后复制小鼠脂多糖诱导的急性肺损伤模型:给予小鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)复制小鼠急性肺损伤模型模型,治疗组注射脂多糖1小时后给予腹腔注射GYY4137(50 mg/kg),在给予脂多糖8小时后将小鼠处死,留取血清与组织标本。检测小鼠血清中的炎症因子肿瘤坏死因子α、白介素6及白介素10的表达,检测小鼠血清中H2S的含量,测得肺脏湿/干比,检测肺组织中的髓过氧化物酶活性,并测得肺组织中与氧化应激相关的H2O2、·OH与SOD因子的含量。结果:脂多糖引起了严重的肺损伤,GYY4137对脂多糖导致的肺水肿、炎症反应及氧化应激损伤有不同程度的改善,保护了脂多糖造成的肺损伤,降低了脂多糖诱导的小鼠肺脏氧化应激损伤。其保护作用于抗炎、抗氧化有关。结论:GYY4137可能通过抗炎、抗氧化作用途径保护了脂多糖造成的急性肺损伤,可能在炎症疾病模型中也发挥相同作用,并且为未来临床使用缓释硫化氢供体提供了基础资料。     

脂多糖通过自噬作用促进氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞的形成

目的:研究脂多糖(LPS)促进氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞形成的机制。方法:人源性THP-1细胞的培养,经ox-LDL诱导形成泡沫细胞。采用油红O染色鉴定泡沫细胞的形成,免疫荧光和Western blot方法检测自噬活性,观察自噬作用对泡沫细胞脂质沉积的影响。结果:①经形态学观察,脂多糖可以促进ox-LDL诱导的泡沫细胞的形成。②脂多糖可以激活自噬作用,并且自噬活性在16h达到最强。③脂多糖可以增强自噬激活剂雷帕霉素(Rap)的促自噬作用(P0.05),并且削弱自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)的作用。④Rap单独作用不能影响泡沫细胞中脂质的累积,然而脂多糖能够增强Rap的作用,显著促进脂滴在泡沫细胞中的累积(P0.05);3-MA可以抑制基础水平和脂多糖诱导后泡沫细胞中脂滴的积累。结论:脂多糖通过增强自噬作用促进泡沫细胞的形成。     

猪胎盘脂多糖的分离纯化及其对脾淋巴细胞的诱导作用

 健康猪胎盘经酶解,提取,氯仿-正丁醇除杂蛋白与5'-磷酸二酯酶除核酸,再经透析,乙醇沉淀,DEAE-Dextran-Gel A-25层析制得纯品猪胎盘脂多糖(简称P-脂多糖)。分析结果表明,P-脂多糖是一种类酸性粘多糖与脂质的共价结合物,分子量约为75kD,分子中含11种单糖组成,其中半乳糖含量最高,其次为岩藻糖,氨基已糖和已糖醛酸。体外实验发现P-脂多糖能明显诱导小鼠淋巴细胞的增殖,强烈地促进淋巴细胞的DNA合成,刺激指数约为9.3,最适刺激浓度50～60μg/mL,最适刺激时间48小时,同时能明显促进淋巴细胞的蛋白质合成。实验还证实,P-脂多糖对脾淋巴细胞的增殖诱导作用并不是通过依赖于白间素-2(IL-2)途径,而是通过增强淋巴细胞IgM的表达,表明P-脂多糖是一种促B-淋巴细胞分裂剂。     

脂多糖:生物合成、跨膜转运及生物学功能

革兰阴性菌外膜外叶的脂多糖通常由类脂A、核心多糖、O-特异多糖三部分组成。最新的不同革兰阴性细菌的基因组数据方便了脂多糖生物合成的研究。大肠杆菌中与脂多糖生物合成及转运相关的基因及其编码的蛋白大多数已被鉴定出来,在大多数革兰阴性菌中都有这些基因信息。     

革兰氏阴性菌脂多糖运输系统的构成及作用机制

革兰氏阴性菌包含有两层组分不同的膜结构——内膜和外膜,对大多数革兰氏阴性菌而言,脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)是其外膜上最主要的脂质成分,锚定在外膜小叶(the outer leaflet of the OM)上,是革兰氏阴性菌固有免疫的重要组成部分。脂多糖运输系统(lipopolysaccharide transport system,Lpt)将胞内装配完整的LPS正确装配到外膜,使得与脂多糖相关的阻渗、有机溶剂耐受性、疏水性抗生素耐受性、膜通透性等功能得以实现。该运输系统的正确作用主要依赖7个不同的脂多糖运输蛋白(Lpt ABCDEFG)协同完成,整个系统贯穿细菌内膜至外膜,由内膜上ABC转运体复合物Lpt B2FG、胞质内转运协同蛋白Lpt A/C及被许多学者称作脂多糖运输的"命门"的外膜蛋白复合物Lpt DE共同构成。本文就革兰氏阴性菌脂多糖的具体结构功能进行简介,进而综述脂多糖运输系统的7个蛋白的构成和作用机制,以期为进一步研究该系统中每个蛋白的功能提供理论基础及参考。     

大肠杆菌脂多糖核心型及其检测方法

大肠杆菌脂多糖核心型根据其化学结构的不同分为５种，即Ｅ．ｃｏｌｉ Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４和Ｋ１２。用传统化学分析法检测大肠杆菌脂多糖核心型，极为复杂，此法只适用于实验室研究。为此，我们建立了Ｅ．ｃｏｌｉ脂多糖核心型血清学检测法，并对致病性大肠杆菌和正常人类粪便中分离的大肠杆菌脂多糖核心型进行了检测。     

细菌脂多糖增强抗体形成

本实验分为两大部分,第一部分,实赊动物为正常健康大白鼠,分剧以白喉类毒素及H901伤寒菌苗加脂多糖后,一同注入动物;第二部分,健康家免经脂多糖处理,然后于24或48小时后受400仓电离辐射,并于照射后径24、48小时进行免疫,实验结果就明,细菌脂多糖与特异性抗原同时、或先24、48小时注入,可以增强血凝 抗体的效价,井增加琼脂弥散反应出现的阳性率厦抗原稀释倍数。电离辐射能抑制家觅抗体生成;在照射后7日左右,杭体生成的能力巳完垒恢复。脂多糖不但能使未经照射的正常免瘦动物的抗体出现较早,效价亦较高,且亦能消除电离辐射对机体杭体产生的抑制作用,并使其效价反高于正常免疫动物,出现亦较早。可兄栅菌 脂多糖可能是作用于抗体产生的诱导时相。可认为,脂多糖的主要作用在于对免疫器官的非特异激发,因而增强杭体的生成。     

低度增高的棕榈酸与脂多糖联合对胰岛β细胞活力的影响

目的:探讨低度增高的棕榈酸联合脂多糖对胰岛β细胞活力的影响及可能机制。方法:采用0.15 mmol/L棕榈酸和50 ng/mL脂多糖单独、联合刺激大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞24h后,通过CCK8法检测细胞活力,Western blot方法检测细胞内神经鞘脂代谢的关键酶-中性神经酰胺酶(NCDase)的蛋白表达水平。进一步建立过表达NCDase基因重组质粒pEGFP-C3-NCDase并转染INS-1细胞后,用棕榈酸、脂多糖联合刺激24h,再通过CCK8法检测细胞活力。结果:与对照组相比,0.15 mmol/L棕榈酸或50ng/mL脂多糖分别刺激INS-1细胞24h后对其细胞活力的影响无统计学意义(P0.05),但二者联合刺激可明显降低INS-1细胞的活力(P0.05)。与对照组相比,单独棕榈酸或脂多糖刺激INS-1细胞后并不影响细胞内NCDase的蛋白表达,但联合刺激可显著下调NCDase的表达(P0.05);与pEGFP-C3+棕榈酸+脂多糖组相比,pEGFP-C3-NCDase明显削弱了棕榈酸联合脂多糖对INS-1细胞活力的抑制作用(P0.05)。结论:低度增高的棕榈酸与脂多糖协同刺激可产生β细胞毒性作用,其机制可能与下调胰岛β细胞内NCDase表达有关。     

嗜麦芽寡养单胞菌脂多糖对斑点叉尾免疫保护作用

嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)是近年来引起斑点叉尾高致死性、传染性疾病的主要病原之一。为了研究嗜麦芽寡养单胞菌脂多糖对斑点叉尾的免疫保护作用,实验选用了400尾健康斑点叉尾,随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个组,每组用鱼100尾,每组下设两个重复,每个重复用鱼50尾,以腹腔注射的方式分别向Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个组的斑点叉尾注射嗜麦芽寡养单胞菌脂多糖、无花果多糖加脂多糖、全菌灭活苗和生理盐水,在试验第0、第28天时分别进行首次免疫和加强免疫,试验期间每隔7d,对试验鱼的血液白细胞杀菌活性、补体C3含量、IgM含量和血清凝集效价滴度进行测定;试验第49天时进行活菌攻毒。结果表明,首免后,接种脂多糖、无花果多糖加脂多糖的试验鱼血清凝集效价滴度明显升高,白细胞杀菌活性、补体C3含量、IgM含量也明显增加;加强免疫后,脂多糖、无花果多糖加脂多糖的试验鱼血清凝集效价滴度峰值分别为1∶256和1∶512,白细胞杀菌活性峰值分别为0.565和0.511,补体C3含量峰值分别0.194和0.180mg/mL,IgM含量峰值分别1.415和1.464mg/mL,免疫保护率分别为70.0%和65%。嗜麦芽寡养单胞菌脂多糖和脂多糖+无花果多糖受免鱼的上述指标均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)地高于生理盐水注射组,这两者的免疫保护效果优越于全细胞灭菌苗。