川贝母内生真菌抑制酪氨酸酶活性的研究

本研究通过测定分离自川贝母、瓦布贝母、甘肃贝母和暗紫贝母新鲜鳞茎的15株内生真菌无菌发酵液对酪氨酸酶活性的抑制率,初步评价其次生代谢物的美白活性;并以维生素C作为阳性对照,对抑制能力较强内生真菌发酵产物的石油醚(30~60℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取物的酪氨酸酶活性抑制率进行研究。结果表明,分离自瓦布贝母的内生真菌WBS020、1WBY2和7WBY2的无菌发酵液抑制酪氨酸酶活性的能力显著高于其它菌株,且高温处理后可保持一定稳定性。试验还发现,上述三株菌的乙酸乙酯和正丁醇萃取物对酪氨酸酶的抑制能力显著高于其石油醚萃取物;WBS020的正丁醇萃取物,1WBY2和7WBY2的乙酸乙酯萃取物都表现较强的抑制活性。除此之外,在质量浓度为8 mg/m L时,阳性对照维生素C的抑制能力显著强于其他萃取物,但1WBY2和7WBY2菌株乙酸乙酯萃取物对酪氨酸酶活性的抑制率也可达90.86%±0.81%和88.92%±7.13%,极显著高于其它两种萃取物。说明瓦布贝母内生真菌次生代谢物中存在着美白活性成分,具有潜在的开发利用价值。     

红海榄根际土壤来源的青霉属真菌XGH2321及其抑菌活性

本研究根据形态学和ITS序列分析结果,将一株分离自海南东寨港红树林保护区红海榄根际土壤的菌株XGH2321鉴定为青霉属的一种真菌.通过对培养基中的碳源、氮源和盐度的优化,确定了适合该真菌菌株分泌抑菌活性物质的改良查氏培养基(4%玉米浆,0.3%NaNO3,0.05%KC1,0.1%K2HPO4,0.05%MgSO4,pH 7.4,9%盐度).将活化后的菌株XGH2321接种到该培养基中,按28℃、160r/min振荡培养7d,获得的发酵液水萃取物对金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌和枯草芽孢杆菌的生长具有明显的抑制作用(MIC为400μg/mL),而发酵液的乙酸乙酯萃取物对上述微生物的生长也具有一定的抑制作用(MIC为800μg/mL);同时,上述2种萃取物对植物病原菌立枯丝核菌的生长也具有明显的抑制作用,MIC分别为200μg/mL和400μg/mL.     

野葛花醇提物中异黄酮含量及其抗氧化活性测定

以葛花苷为标准品,对野葛花醇提物的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物4部分中的异黄酮含量进行测定,并采用DPPH·法对各萃取物进行自由基清除实验.结果显示,(1)氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物4部分的异黄酮含量分别为35.27%、53.42%、52.13%和2.34%.(2)抗氧化实验显示, 4 部分清除DPPH·的IC50值分别为252、49、197和344 μg/mL.(3)相关性分析表明,野葛花醇提物各萃取部分的抗氧化活性主要来自于其中含有的异黄酮类化合物.研究表明野葛花醇提物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部分异黄酮含量较高;氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物4部分对DPPH自由基均有一定的清除作用,其中以乙酸乙酯萃取物的效果最佳;表明异黄酮是一种天然的抗氧化剂,具有较强的抗氧化作用.     

核桃内生真菌抗氧化菌株的筛选及其代谢产物活性研究

本试验以29株核桃内生真菌为研究对象,采用总还原力(FRAP法)及DPPH·清除试验评价其代谢产物的抗氧化能力,从中筛选出高活性菌株,并对该菌株发酵液进行浓缩萃取,研究各萃取物的抗氧化活性。结果表明,供试29株菌的代谢产物都表现出一定的抗氧化活性,其中菌株LTS-6-6(Pyrenochaeta)为高活性菌株。该菌株发酵液乙酸乙酯萃取物(EAE)显示了较强的抗氧化活性,对DPPH·的EC_(50)为7μg/mL,总还原力为527.59±10.66 mg V_C/g,总酚和总黄酮含量分别达到641.14±7.50 mg没食子酸/g、100.30±8.44 mg芦丁/g。该结果表明,核桃内生真菌代谢产物具有一定的抗氧化活性,是寻找天然抗氧化活性物质的良好资源。     

香椿嫩芽和老叶萃取物抗菌活性的比较研究

采用琼脂扩散法对香椿嫩芽和老叶萃取物的氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部分的抗菌活性进行了研究.嫩芽萃取物的抗菌活性明显高于老叶萃取物,其中嫩芽萃取物的乙酸乙酯部分表现出最强的抗菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)为1.3 mg/mL.实验结果表明,香椿叶中的抑菌物质随着生长时间的延长而逐渐降低.     

龙柏茎叶中抑菌活性成分的分离与鉴定

采用活性追踪和柱层析法,以苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌等为靶标菌,提取、分离、鉴定了龙柏茎叶中抑菌活性成分.结果表明,对龙柏茎叶乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取物活性测定中,石油醚萃取物的活性最高.对石油醚萃取物进行硅胶柱层析,得到一种活性较高的化合物A,对苹果腐烂病菌的EC_(50)为0.862 4 mg/mL.经氢谱(1H-NMR)、碳谱(~(13)C-NMR)和红外等确定了化合物A的结构为4-松香酸.     

一株红茄苳内生烟曲霉菌的分离鉴定及其发酵产物抗氧化活性

【目的】红树林内生真菌生长于特殊的生境,有些菌株能分泌出结构新颖和具有生物活性的物质。从红树林植物红茄苳(Rhizophora mucronata)中分离获得一株内生真菌HQD24,对其进行生物学鉴定和抗氧化活性评价。【方法】综合运用形态结构及ITS r DNA序列分析,HQD24被鉴定为曲霉属(Aspergillus)的烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。采用抗氧化多活性模型,2-2′二苯基-1-三硝基苯肼(DPPH)自由基测定法、2′-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基测定法、超氧自由基测定法、还原Fe~(3+)能力、螯合Fe~(2+)能力对HQD24麦麸发酵提取物的石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物进行抗氧化活性评价。【结果】经抗氧化活性实验发现不同有机溶剂萃取成分都具有清除DPPH自由基、ABTS自由基、超氧自由基和还原Fe~(3+)、螯合Fe~(2+)的能力,尤其是清除ABTS自由基和超氧自由基,抗氧化活性的能力都随着浓度的增高而增强。当不同有机溶剂萃取粗提物浓度为1.5 g/L时,二氯甲烷萃取物清除ABTS自由基率为71.92%,正丁醇萃取物清除超氧自由基率为62.36%,综合评价,HQD24的发酵产物中具有抗氧化活性的物质主要分布于二氯甲烷萃取粗提物和正丁醇萃取粗提物,其次分布于乙酸乙酯萃取粗提物,石油醚萃取粗提物中抗氧化活性物质含量最少。【结论】研究结果预示红树林内生烟曲霉菌是产生抗氧化活性物质的重要资源,HQD24菌株可以作为进一步实验研究的对象。     

红豆树种子化学成分及其抗氧化和抑菌活性研究

为研究红豆树种子的化学组成及生物活性。本文采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其甲醇提取物的化学成分进行了鉴定,并首次采用不同极性溶剂对红豆树种子的生物活性物质进行萃取;同时,利用DPPH法、ABTS法和抑菌圈法评价红豆树种子生物活性物质的体外抗氧化及抑菌活性。结果表明,从红豆树种子萃取物中共检测出化合物12个,占萃取物总量的89.03%;种子萃取物的主要成分为5-羟甲基糠醛(52.98%)、D-阿洛糖(7.24%)、2,3-二甲氧基-10,11-二氢二苯并(b,f)恶庚英-10-醇(6.51%)、甲基丁香酚(4.53%)、2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮(4.45%)、黄樟素(3.75%)、α-松油醇(3.31%)、2,6-二甲氧基苯酚(2.01%),此8种成分占总量的84.78%。红豆树种子正丁醇、乙酸乙酯和石油醚等萃取物对DPPH和ABTS自由基均具有显著的抗氧化活性,且抗氧化活性与萃取物浓度呈线性相关。当红豆树种子正丁醇、乙酸乙酯和石油醚等萃取物浓度为10.0 mg/mL时,正丁醇萃取物对大肠杆菌、绿脓杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的抑菌效果最佳;乙酸乙酯萃取物对枯草芽孢杆菌的抑菌效果最佳;石油醚萃取物对金黄色葡萄球菌和苏云金芽孢杆菌的抑菌效果最佳。研究结果为红豆树种子资源的开发和综合利用提供了数据支持。     

井冈山区63种植物不同溶剂萃取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的初步研究

采用乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性筛选模型,对采自井冈山及周边地区的63种植物(67个部位)乙醇提取物的不同溶剂萃取物进行AChE抑制活性研究。结果表明:在乙酸乙酯萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,其中剪刀草和戟叶蓼表现出较强的AChE抑制活性,抑制率均大于90%,其余大部分植物均大于40%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,蛇莓等6种植物的抑制率大于60%,其余大部分植物小于30%;在正丁醇萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,紫萼变种、活血丹、菟丝子、剪刀草、冬青叶山茶叶、地念和车前草的抑制率大于80%,其余大部分植物的抑制率均大于40%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,秀丽四照花等22种植物抑制率均大于50%;在石油醚萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,紫萼变种、紫茎前胡、博落回、杠板归、地念、山橿、藤石松和车前草的抑制率大于90%,供试质量浓度在0.025 mg/mL时,紫茎前胡等17种植物抑制率大于70%。另外,有些植物萃取物不仅对AChE没有抑制活性,反而表现出一定的增强作用。     

茶蜂花粉抗氧化活性与成分

本实验研究了茶蜂花粉的抗氧化活性和功效成分。茶蜂花粉85%乙醇回流提取,经过石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及萃余物4个部分,用D-半乳糖诱导衰老小鼠模型检测茶蜂花粉不同组分的抗氧化活性,采用多种色谱方法分离具有抗氧化活性的成分,利用核磁共振方法鉴定各单体的化学结构。结果表明:茶蜂花粉乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物具有明显的抗氧化作用,乙酸乙酯萃取物经MCI柱层析,得到30%、50%、70%三个乙醇洗脱组分,其中30%乙醇洗脱组分具有显著抗氧化活性,从该洗脱部分得到三个单体化合物,经鉴定为:槲皮素、山奈素-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-(2″,3″,4″-O-三对羟基桂皮酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷,推测茶蜂花粉具有抗氧化活性的成分主要为黄酮类化合物。     

一种银耳段木栽培杂菌的形态学鉴定与分子生物学分析

从四个不同银耳段木栽培场地采集杂菌样本,经初步鉴定后纯化得到48个菌株。通过对子实体、孢子及菌丝等的形态观察确认从银耳栽培段木上分离的48株杂菌隶属于炭团菌属,在形态上与截头炭团菌Annulohypoxylon annulatum最为相似。为了进一步确认从银耳栽培段木上分离的48株杂菌的分类地位,对其中14个供试菌株进行了ITS系统发育分析,结果表明:14个供试菌株之间的遗传距离为0.036时可以形成两个明显分枝,且分枝与地理来源之间并无明显相关性;供试菌株在分类地位上属于炭团菌属,与形态学鉴定结果一致,并与截头炭团菌的关系最为接近,遗传距离在0.2左右;与银耳伴生菌香灰菌的遗传距离为0.29左右。从75条引物中筛选出13条引物对所有48个供试菌株进行ISSR扩增,扩增共获得103条带,其中多态性条带72条,占条带总数的69.9%。聚类分析结果表明:在相似水平为75%时,48个菌株可以划分为5个类群,且类群的划分与地理来源之间并无明显相关性;多数供试菌株之间的遗传相似性较低,这表明供试菌株在DNA水平上存在比较显著的遗传变异,具有较丰富的遗传多样性。     

中国大豆疫霉菌遗传多样性的RAPD分析

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,利用13个引物对75个中国大豆疫霉菌分离物和11个美国分离物进行PCR扩增。在78个RAPD标记中,多态性标记为68个,占87.2%。RAPD指纹聚类分析表明,当以相异距离0.3为阈值,86个分离物被划为12个RAPD遗传组,其中J组有54个分离物,占总数的62.8%,包括44个中国分离物和10个美国分离物。在中国大豆疫霉菌群体内,多数分离物之间遗传相似性较低,在DNA水平上存在显著的遗传变异,具有较丰富的遗传多样性。RAPD分组结果未表明大豆疫霉菌DNA多态性特征与病原菌毒力基因构成之间和分离物地理来源之间存在相关性,证明中国不同地区的大豆疫霉菌群体在与大豆品种的互作中发生了广泛的遗传变异,具有DNA遗传进化方向和毒力基因演变的多样性。美国大豆疫霉菌分离物间遗传距离较近,而中国分离物在总体上与美国分离物的遗传距离较远,表明中国大豆疫霉菌具有比较独特的遗传背景。     

中国大豆疫霉菌遗传多样性的RAPD分析*

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,利用13个引物对75个中国大豆疫霉菌分离物和11个美国分离物进行PCR扩增。在78个RAPD标记中,多态性标记为68个,占87.2%。RAPD指纹聚类分析表明,当以相异距离0.3为阈值,86个分离物被划为12个RAPD遗传组,其中J组有54个分离物,占总数的62.8%,包括44个中国分离物和10个美国分离物。在中国大豆疫霉菌群体内,多数分离物之间遗传相似性较低,在DNA水平上存在显著的遗传变异,具有较丰富的遗传多样性。RAPD分组结果未表明大豆疫霉菌DNA多态性特征与病原菌毒力基因构成之间和分离物地理来源之间存在相关性,证明中国不同地区的大豆疫霉菌群体在与大豆品种的互作中发生了广泛的遗传变异,具有DNA遗传进化方向和毒力基因演变的多样性。美国大豆疫霉菌分离物间遗传距离较近,而中国分离物在总体上与美国分离物的遗传距离较远,表明中国大豆疫霉菌具有比较独特的遗传背景。     

The molecular diversity of different isolates of <Emphasis Type="Italic">Beauveria bassiana</Emphasis> (Bals.) Vuill. as assessed using intermicrosatellites (ISSR<Subscript>s</Subscript>)

Inter-microsatellite PCR (ISSR-PCR) markers were used to identify and to examine the genetic diversity of eleven Beauveria bassiana isolates with different geographic origins. The variability and the phylogenetic relationships between the eleven strains were analyzed using 172 ISSR-PCR markers. A high level of polymorphism (near 80%) was found using these molecular markers. Seven different isolates showed exclusive bands, and ISSR primer 873 was able to distinguish between all the strains. The dendrogram obtained with these markers is robust and in agreement with the geographical origins of the strains. All the isolates from the Caribbean region were grouped together in a cluster, while the other isolates grouped in the other cluster. The similarity exhibited between the two clusters was less than 50%. This value of homology shows the high genetic variability detected between the isolates from the Caribbean region and the other isolates. ISSR-PCR markers provide a quick, reliable and highly informative system for DNA fingerprinting, and allowed the identification of the different B. bassiana isolates studied.     

Genetic Diversity and Structure of the Invasive Toxic Cyanobacterium <Emphasis Type="Italic">Cylindrospermopsis raciborskii</Emphasis>

Strains of the invasive toxic cyanobacteria Cylindrospermopsis raciborskii were genetically evaluated with four genetic markers encompassing in total 2.9 kb (16S rRNA, ITS longer spacer, ITS shorter spacer and rpoC1) to assess the phylogenetic relationships, genetic variation and population differentiation of the species across all five continents. The phylogenetic analysis showed that the C. raciborskii strains grouped into three well-supported distinct clusters: (I) European (II) African/American, and (III) Asian/Australian. The European group presented a high genetic similarity with the Asian and the Australian isolates than with the African and American isolates. Several Portuguese isolates were analyzed (n = 7) and revealed a low genetic differentiation with little geographical structure. The genetic distance among groups and phylogenetic relationships obtained in this study suggest that the recent invasion of C. raciborskii in Portuguese and other European temperate environments could have had its origin in the Asian and/or Australian continents.     

基于ISSR-PCR对山东玉米多堆柄锈菌遗传多样性的研究及其初侵染菌源的推测

利用11对多态性ISSR引物对2014-2016年间采自山东、江苏、浙江、河南及海南等5省的60个玉米多堆柄锈菌菌株进行了种群遗传多样性分析。结果表明,分离自山东的玉米多堆柄锈菌菌株的遗传多样性丰富,多态性百分率（ P）达96.34%,与江苏、浙江、河南锈菌种群具有较高的相似性,遗传距离相对较近,其中与江苏的群体遗传相似系数最高（GS=0.7829）,遗传距离最近（GD=0.2447）,而与分离自海南的锈菌种群相似性最低（GS=0.0148）,遗传距离最远（GD=4.2999）。在相似性系数0.74水平上,供试60个菌株被划为3个群和多个亚群组,各群和亚群间表现出较明显的年度与地理分布上的差异。2015年采集的菌株之间 G_st值为0.8694,2015与2016年采集的菌株群体间的 G_st值为0.4562,说明病菌的遗传变异不仅表现在地域上,也体现在年度间。基于ISSR标记分析,作者认为发生在山东省的玉米南方锈病其初侵染菌源不是来自我国周年发生玉米南方锈病的海南省,而最有可能来自同样能越冬的菲律宾或我国台湾地区。     

Metazoan parasites of freshwater cyprinid fish ( Leuciscus cephalus): testing biogeographical hypotheses of species diversity

The diversity and similarity of parasite communities is a result of many determinants widely considered in parasite ecology. In this study, the metazoan parasite communities of 15 chub populations (Leuciscus cephalus) were sampled across a wide geographical range. Three hypotheses of biogeographical gradients in species diversity were tested: (1) latitudinal gradient, (2) a 'favourable centre' versus 'local oasis' model, and (3) decay of similarity with distance. We found that the localities in marginal zones of chub distribution showed lower parasite species richness and diversity. A latitudinal gradient, with increasing abundance of larvae of Diplostomum species, was observed. There was a general trend for a negative relationship between relative prevalence or abundance and the distance from the locality with maximum prevalence or abundance for the majority of parasite species. However, statistical support for a 'favourable centre' model was found only for total abundance of Monogenea and for larvae of Diplostomum species. The phylogenetic relatedness of host populations inferred an important role when the 'favourable centre' model was tested. Testing of the hypothesis of 'decay of similarity with geographical distance' showed that phylogenetic distance was more important as a determinant of similarity in parasite communities than geographical distance between host populations.     

胶孢炭疽菌的种内遗传多样性研究*

应用RAPD分析对广东不同果树上的胶孢炭疽菌的种内遗传多样性进行研究。结果表明:除部分芒果上的菌株外,20个来源于不同果树上的胶孢炭疽菌都以较高的相似系数聚为一个大群(群I)。说明尽管胶孢炭疽菌具有复合种的性质,但在一定的地理范围内,其遗传背景还是相近的,表现出种的典型特征。6个芒果菌株组成3个小群,且与群I的亲缘关系较远,其分类地位有待进一步明确。     

Population genetic structure of Carchesium polypinum (Ciliophora: Peritrichia) in four Chinese lakes inferred from ISSR fingerprinting: high diversity but low differentiation

Although the peritrichous ciliate Carchesium polypinum is common in freshwater, its population genetic structure is largely unknown. We used inter-simple sequence repeat (ISSR) fingerprinting to analyze the genetic structure of 48 different isolates of the species from four lakes in Wuhan, central China. Using eight polymorphic primers, 81 discernible DNA fragments were detected, among which 76 (93.83%) were polymorphic, indicating high genetic diversity at the isolate level. Further, Nei's gene diversity (h) and Shannon's Information index (I) between the different isolates both revealed a remarkable genetic diversity, higher than previously indicated by their morphology. At the same time, substantial gene flow was found. So the main factors responsible for the high level of diversity within populations are probably due to conjugation (sexual reproduction) and wide distribution of swarmers. Analysis of molecular variance (AMOVA) showed that there was low genetic differentiation among the four populations probably due to common ancestry and flooding events. The cluster analysis and principal component analysis (PCA) suggested that genotypes isolated from the same lake displayed a higher genetic similarity than those from different lakes. Both analyses separated C. polypinum isolates into subgroups according to the geographical locations. However, there is only a weak positive correlation between the genetic distance and geographical distance, suggesting a minor effect of geographical distance on the distribution of genetic diversity between populations of C. polypinum at the local level. In conclusion, our studies clearly demonstrated that a single morphospecies may harbor high levels of genetic diversity, and that the degree of resolution offered by morphology as a marker for measuring distribution patterns of genetically distinct entities is too low.     

麦无网长管蚜不同地理种群遗传多样性的ISSR标记研究

为阐明麦无网长管蚜Metopolophium dirhodumus不同地理种群的遗传多样性,利用ISSR分子标记对6个地区（河北保定、定州、石家庄、邢台、邯郸,山东聊城）的麦无网长管蚜种群进行了遗传多样性研究。23条ISSR引物扩增出了297条清晰条带,其中172条（57.91%）具有多态性。遗传多样性分析结果表明：麦无网长管蚜群体间的遗传多样性（57.91%）高于群体内的遗传多样性（26.24%）,其中河北保定种群和河北邯郸种群的种群内遗传变异最小（24.92%）,河北石家庄种群的种群变异最大（41.75%）,河北和山东地区的种群（除河北石家庄）之间没有显著遗传差异。根据种群变异来源分析,有26.44%遗传变异来源于种群间,73.56%变异来自于种群内（Gst=0.2644）,不同地理种群间并没有出现分化现象（Nm=1.3910）。利用不加权算术平均法（UPGMA）对6个种群进行统计分析,构建进化树,发现6个种群分为了两大类,而其地理距离与遗传距离并不存在相关性,地理空间并未对其种群间的基因交流产生影响。麦无网长管蚜有较高的遗传多样性,而各个种群间并没有明显遗传分化的趋势。本研究有关麦无网长管蚜不同地理种群基因流和遗传变异将为控制麦蚜危害和田间综合防治提供必要的数据支持。