辐射过程中耐辐射奇球菌蛋白酶变化的检测与分析

采用明胶和酪蛋白底物酶谱法以及荧光酪蛋白底物对紫外线以及γ射线辐射后恢复期耐辐射奇球菌R1(Deinococcus radiodurans R1,DRR1)的蛋白酶变化进行了检测。结果发现,DRR1存在高活性大分子量组成性表达蛋白酶,与Karlin等［16］提出的DRR1蛋白酶为预测高表达蛋白(PHX)的设想一致。DRR1包含大量分子量大于140kD 的明胶降解酶和分子量大于120kD的酪蛋白降解酶,其中活性最高的174kD明胶酶在经SDS变性处理后仍有较高活性,该蛋白酶在DRR1受紫外线辐射和电离辐射后恢复期的表达模式存在差异,在γ射线电离辐射过程中以及电离辐射后恢复的晚期活性较高。此外,还发现一些蛋白酶特异性由辐射所诱导,表明这些蛋白酶可能参与细胞信号通路中蛋白的顺序降解,也提示DRR1损伤修复过程中细胞内存在一个精确的蛋白酶系统。这些蛋白酶的表达与细胞的营养状态相关。同时对一株由本实验室从北京地区土壤中分离到的杆状耐辐射菌RR533.2的明胶和酪蛋白蛋白酶谱进行了测定,结果发现其蛋白酶谱与DRR1相类似。     

糜酶转基因小鼠心脏组织中基质金属蛋白酶9的活化

为研究糜酶在心脏中的功能 ,用明胶酶谱法和放免法检测了糜酶转基因小鼠心脏组织中基质金属蛋白酶及糜酶的活力 .糜酶转基因小鼠心脏组织中糜酶样活力较转基因阴性小鼠升高了约80 % ;而其心脏匀浆液凝胶酶谱分析结果显示在 92 k D处明胶酶活力也升高约 30 % ;经 Western印迹鉴定为基质金属蛋白酶 9,而在蛋白水平上与转基因阴性小鼠无显著差异 .结果提示 ,糜酶转基因小鼠心脏组织中糜酶活力的升高可活化基质金属蛋白酶 9,从而影响心脏胶原代谢 .     

基质金属蛋白酶-2在酵母系统中表达的初步研究

基质金属蛋白酶-2（明胶酶A）在肿瘤侵袭和转移中具有重要作用,为进一步研究其作用机制,在酵母系统中表达了金属蛋白酶-2通过PCR方法获得明胶酶A的表达序列,酶切和测序结果证明序列正确后,构建明胶酶A的表达载体pPIC9/GelA,电击法转化酵母得到阳性克隆.明胶酶谱分析说明表达产物具有明胶底物特异性,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,表达产物的分子质量为66 ku.     

耐热芽孢杆菌高温中性蛋白酶制备工艺研究

为使耐热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)XJT9503高温中性蛋白酶产业化并在生产中应用,对XJT9503高温中性蛋白酶的制备工艺进行了研究.结果表明,可采用加热真空薄膜浓缩,在40℃,-0.094～-0.096MPa真空度下,经过45～55min浓缩,可使发酵处理液浓缩2～3倍,其酶活力仅损失10%左右.确定了采用喷雾干燥法生产固体酶制剂的最优工艺条件进口温度170℃、出口温度75℃、流量30kg*h-1.在此条件下,酶得率为68%.对固体酶与液体酶保存期稳定性的测定结果表明,固体酶的保存效果远比液体酶好,当保存210d时,固体酶制剂的酶活损失仅为2～8%.     

微生物弹性蛋白酶研究概况

概述了弹性蛋白酶的性质,及在医药、食品和日用化学等方面的重要功用,同时对能够产生胞外弹性蛋白酶的微生物作了详尽的论述。通过微生物发酵法和生化提取法制备弹性蛋白酶的工艺对比得出结论：由微生物发酵法生产弹性蛋白酶成本低,产量大,不受原料限制。若开发出廉价、充足的微生物弹性蛋白酶酶源,必将推动它在各领域的广泛应用。     

荧光假单胞菌脂肪酶固定化及催化制备生物柴油的工艺研究

研究了不同因素对制备固定化荧光假单胞菌脂肪酶的影响及固定化酶的酶学性质,并初步探讨了利用该固定化酶制备生物柴油的工艺。以海藻酸钠明胶为复合载体,采用包埋法制备固定化荧光假单胞菌脂肪酶,考察了载酶量、颗粒直径等因子对固定化效果的影响,并用制备的固定化酶进行了酶促酯交换合成生物柴油的工艺研究,考察了反应条件如酶量、反应温度、甲醇流加方式、醇油比等因素对甲酯得率的影响。试验结果表明,制备固定化荧光假单胞菌脂肪酶的最优条件为:每克载体给酶量为300 IU,选用6号注射器针头(内径为0.5 mm);通过酯交换,催化大豆油合成生物柴油的最佳反应工艺参数为:固定化酶25%,醇油比4:1,含水量6%,反应温度40℃;此条件下反应35 h后,甲酯的最高得率可达82%。     

酶法水解谷朊粉工艺研究

对谷蛋白肽酶法制备工艺进行了研究.利用蛋白酶Alcalase可获得较高的水解度,其较优的工艺如下:底物浓度10%,加酶量为底物的0.5%,pH为8.75,水解温度60 ℃,水解时间90 min.酶解后期,添加蛋白酶Umamizyme进行复合酶水解,其产物具有多肽含量高、风味协调等特点.     

用废啤酒酵母制备碱不溶性葡聚糖的研究

研究了用碱法及酶－碱法从啤酒厂排弃的酵母泥中制备碱不溶性葡聚糖的工艺。对NaOH及蛋白酶用量的影响,NaOH作用时间、浓度、作用次数等因素的影响进行了较系统的探讨。先用蛋白酶处理酵母可减少NaOH用量从而减轻环境污染。对多糖产品进行了定性定量分析,得到的产品主要为β（1→3）-D-葡聚糖。     

风味酶控结合乳化修饰技术制备多肽脱苦豆乳（粉）工艺

基于传统湿法制备豆乳（粉）工艺基础,采用连续密闭蒸煮浓缩、麦芽糊精/β-环糊精乳化及风味蛋白酶低限制性酶解风味修饰处理技术制备多肽脱苦强化型豆乳（粉）,研究风味修饰联控技术制备工艺对豆乳（粉）中多肽得率、苦味值的影响,并确定最佳加工工艺。采用响应面优化分析法对低酶—风味修饰联控制备多肽脱苦豆乳（粉）工艺进行优化,确定最佳工艺参数为风味蛋白酶添加量0.5%、限制性酶解时间18 min、麦芽糊精与β-环糊精添加量比值为2.5∶1、麦芽糊精与β-环糊精总添加量为16%,此条件下多肽得率达到最高为10.21%,并消除豆乳苦味。通过各理化性质发现,风味蛋白酶酶解修饰与麦芽糊精/β-环糊精乳化修饰具有协同作用。     

蛋白鲜味肽调味品生产工艺初探

蛋白二次酶解技术生产蛋白鲜味肽能够在保有传统鲜味的同时,有效提高蛋白质得率,利于人体吸收。试验根据不同水产品的呈味特点,选择沙丁鱼和对虾为实验原料,利用复合蛋白酶对原料进行初步定向酶解并超滤,制备具有独特风味的短肽。采用响应面法优化酶解水产蛋白工艺,水解度作响应值,以探究酶添加量、酶解温度、时间及pH值对鲜味肽得率的影响,得到初步酶解制备鲜味肽最优工艺条件：复合蛋白酶加酶量3.3%、温度57℃、酶解时间3.5h、pH为7.1。