基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化

利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究, 分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369, 其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明, 突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变: T61C/C147T/A334G/T371A, 其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示, 3个突变氨基酸分别位于第1个a螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个b折叠之间的转角以及第5个b折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后, 酶学性质测定表明: 突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍, Km值由8.24 mmol/L降低至7.17 mmol/L; 在pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。     

上海部分地区小于5岁儿童轮状病毒及星状病毒性腹泻的临床分析

目的 了解上海地区≤5岁的患急性稀水样便腹泻患儿中轮状病毒感染及星状病毒感染的流行情况及其临床特征。方法 留取2006年6月~2007年3月复旦大学附属儿科医院门诊、住院及医院内感染腹泻患儿的部分粪便标本，应用免疫层析胶体金法检测轮状病毒。排除轮状病毒感染后，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测星状病毒。本实验主要研究对象为年龄≤5岁，病程≤2周，大便培养无条件致病菌生长患儿。结果 共收集724例急性腹泻粪便标本，年龄≤5岁人群轮状病毒阳性检出率42.5%，约85%患儿年龄≤2岁；病例全年均有发生，发病高峰主要集中在2006年12月~2007年1月。共240例急性腹泻轮状病毒阴性粪便标本中，年龄≤5岁人群星状病毒阳性检出率11.6%，53.6%患儿年龄≤2岁；观测期间病例散发，发病高峰主要集中在2006年10月~2007年1月。结论 轮状病毒是上海地区婴幼儿病毒性腹泻的重要病原，部分患儿伴肠道外损伤。星状病毒是上海地区婴幼儿病毒性腹泻的又一重要病原。     

FAO和CITES公约对水生物种保护管理的异同

FAO和CITES均注重生物多样性保护, CITES通过限制贸易的方式保护生物多样性, FAO则更注重通过科学的渔业管理保障渔业产业的可持续发展。两个组织在水生物种保护管理问题上的管理理念和管理手段各有侧重、互为补充。近年来, FAO和CITES就CITES水生物种管理问题展开了合作, 但合作存在着责任定位交叉、所依据的技术标准不尽统一、CITES部分管理条款在应用上存在较大争议等问题。本文比较分析了FAO和CITES在重要水生物种管理问题上存在着的共性和差异, 旨在为国内水生生物保护管理、政府履约及中国在国际经济活动中维护合法权益提供技术参考和依据。     

布拉酵母对炎症性肠病的治疗作用

炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病, 其病因与发病机制尚未完全明确。大量研究表明, 肠道微生物在炎症性肠病的发生、发展中发挥重要作用。布拉酵母是一种有益于人体健康的肠道微生物, 研究发现能有效改善炎症性肠病症状, 可能与其抑制肠道致病菌、增强肠屏障功能、调节肠道黏膜免疫反应等有关。     

生物柴油新原料——微生物油脂

生物柴油是替代传统石化能源的重要途径,但高昂的原料油成本限制其进一步应用。微生物油脂具有价格低廉、供给充足和不占用耕地资源等优点,是理想的生物柴油原料油脂。对微生物油脂组成成分,提取和测定方法等方面进行详细介绍,并重点综述转座标签育种、代谢通路调控育种、转录因子调控育种和发酵过程优化等技术在提高细胞油脂积累量方面的应用进展,探讨以微生物油脂为新原料制备生物柴油的优点及可行性。     

犬传染性肉瘤与原位移植性动物肿瘤模型

犬传染性肉瘤是犬类动物生殖系统自然发生的肿瘤,其具有独特的同种与异种移植特性。本文着重从肿瘤细胞的生物学特性探讨肿瘤模型的建立,该模型具有可靠的稳定性、模拟性及接种的多样性,能够在难以接种肿瘤的器官及大动物体内建立较为理想的原位移植性肿瘤模型,为临床及影像学科开展原位肿瘤方面的研究提供了较好的实验基础。     

儿童幽门螺杆菌感染与胃肠外疾病相关性的研究进展

幽门螺杆菌（Hp）感染是儿童慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要原因。有证据显示Hp感染在一些胃肠外疾病中也起一定作用,特别是Hp感染与儿童缺铁性贫血、特发性血小板减少性紫癜、生长发育障碍等有较为密切的关系。本文就近期Hp感染与胃肠外疾病的研究进展作一综述。     

益生菌在炎症性肠病中的治疗作用

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。随着对肠道微生物群在IBD发病机制中作用的认识不断深入,近年来益生菌广泛应用于IBD治疗。大量临床试验结果表明,益生菌治疗IBD的疗效主要体现在对UC和贮袋炎的治疗,对CD的疗效不明确。益生菌治疗IBD可能通过促进肠道微生物群平衡、改善肠道屏障功能、调节肠道黏膜免疫及营养物质代谢等途径。     

萜类生物合成的基因操作

萜类是一组结构迥异的化合物家族,其中很多具有较大的应用价值,如青蒿素和紫杉醇等,它们在多种微生物和植物中合成,但其天然产量低。萜类代谢工程通过DNA重组技术改造萜类合成细胞中的代谢途径,以提高萜类最终产量或在不含萜类的生物中合成萜类,为促进有用萜类合成提供了新的机会。以萜类化合物生物合成途径的基因转移与表达为切入点,综述了目前在微生物及植物中应用代谢工程提高萜类产量的研究进展。     

青蒿素合成cDNA和新EST的克隆及其低温诱导表达的定量分析

为了开展基于青蒿发育特异及环境诱导转录物组学的新基因分离与鉴定，本研究采集经低温处理的盛花期青蒿（Artemisia annuzl）叶片提取总RNA，并进行全长cDNA表达序列标签（expressed sequence tags，EST）克隆，经测序和同源性检索后提交GenBank．在已注册的75个序列中，共有4个全长cDNA与青蒿已知基因高度同源，其余71个EST在青蒿基因中无测序记录，但其中有34个序列与其他植物基因同源，包括24个已知蛋白编码序列和10个未知蛋白编码序列，另外37个序列在任何植物基因中均无测序记录，为首次克隆的植物新基因．为了研究青蒿基因对极端环境胁迫的响应模式，采用半定量PCR（semi．quantitative PCR，SQ－PCR）对冷处理前后青蒿试管苗中青蒿素合成基因ADS，CYP71AVl和CPR的表达水平进行了测定．结果显示，ADS和CYP71AV1基因受冷胁迫强烈诱导，但CPR基因未受明显影响．同时还发现这种冷胁迫诱导作用可被Ca^2＋通道抑制剂氯化镧（LaCl3）或Ca^2＋螯合剂EGTA所阻遏，表明Ca^2＋ -CaM信号转导通路可能参与冷胁迫诱导ADS和CYP71AV1基因的表达．对冷胁迫青蒿试管苗的实时荧光定量PCR（real—time fluorescent quantitative PCR，RFQ—PCR）测定结果表明，CaM基因的表达水平上调2．5倍，从而印证了上述CaM介导信号转导与冷胁迫诱导基因表达之间相关的推论．利用RFQ－PCR对7个新分离青蒿EST进行了功能注释，结果显示，D／LTSRP，UBE,AR／DAP和POD1基因的冷胁迫诱导表达水平分别上调约8．0，5．0，2．3和1．5倍，而CHI和RGP基因的表达无明显上调或下调．本研究首次在转录水平上对青蒿素合成基因及青蒿新EST的冷胁迫诱导表达模式进行了初步探讨，有助于深入了解青蒿素合成与累积的内在规律及其协同调节机制，为促进青蒿的遗传性状改良及代谢工程指导的育种工作打下基础．