小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌耐药性和基因型研究

目的探讨临海地区小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）的耐药性及耐药基因型分布情况。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因,并对产物进行测序分析基因型。结果113株肺炎克雷伯杆菌ESBLs和AmpC酶总检测率分别为29．20％和18．58％,其中单产ESBLs、单产AmpC酶和同产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为23．01％、12．39％和6．19％;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型：16株为DHA-1型,5株为ACT-1型。药敏试验：所分离的肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率很低,对大多β-内酰胺类抗生素耐药率较高,并且产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产ES-BLS和AmpC酶菌株中更为严重。结论临海地区小儿呼吸道分离的肺炎克雷伯杆菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高;AmpC酶以DHA-1基因型流行为主,产酶株呈现出高度多重耐药性。     

产ESBLs大肠埃希菌的AmpC基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌合并产AmpC酶的状况及基因型特点.方法 从近几年深圳市人民医院产ESBLs大肠埃希菌临床菌株中,筛选出对头孢西丁耐药菌株51株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,同时应用多重PCR检测菌株的AmpC酶基因,序列测定PCR阳性产物以确定其基因亚型.结果 51株菌中有49株至少检出一种ESBLs或AmpC基因.单ESBLs基因阳性菌株37株(72.5％),单AmpC基因阳性4株(7.8％),合并ESBLs和AmpC基因阳性的8株(15.6％).共有41株(80.4％)含CTX-M-14基因,4株含CTX-M-15,其他基因型ESBLs较少.2株检出两种ESBLs基因;一株同时检三种ESBLs基因.检出AmpC基因的菌株12株,其中10株为DHA-1型,2株为CMY-2型;其中6株DHA-1型及2株CMY-2型菌同时检出CTX-M-14基因.结论 该院头孢西丁耐药产ESBLs大肠埃希菌中大多数为单产ESBLs菌,主要为CTX-M-14型;少数同时产生ESBLs和AmpC酶,AmpC酶以DHA-1型为最常见.     

头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌AmpC基因和ESBLs检测及耐药性分析

目的了解深圳地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌头孢菌素酶(AmpC酶)基因型分布、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特点。方法收集深圳地区三家大型综合医院临床标本分离对头孢西丁耐药的肺炎克雷伯菌73株。用碱裂解法提取菌株的质粒,采用多重PCR扩增AmpC基因,应用DNA测序确定其基因型。并对所有菌株进行ESBLs表型确证试验;用K-B法对其进行药物敏感试验。结果 48株(65.8%)AmpC基因扩增阳性,经DNA测序显示,其中46株为DHA-1型,1株为CMY-2型,1株同时产DHA-1和CMY-2型;73株肺炎克雷伯菌中49株ESBLs阳性,其中36株AmpC基因和ESBLs均为阳性。AmpC和(或)ESBLs阳性菌株对多数药物的耐药率高于AmpC和ESBLs均阴性者。结论本地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶检出率高,基因型主要为DHA-1,同时产AmpC酶和ESBLs菌株较常见。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的ESBLs和头孢菌素(AmpC)酶基因型分布特点.方法 收集深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌临床菌株64株,PCR法分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,并进行DNA测序分型.同时应用多重PCR对其中的头孢西丁耐药株进行AmpC酶基因扩增,DNA序列确定其基因型.结果 64株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,61株(95.3％)检出至少一种ESBLs基因.其中51.6％ (33/64)检出SHV-12基因,46.9％(30/64)检出CTX-M-14基因.11株(17.2％)检出AmpC基因,其中10株为DHA-1型,1株为CYM-2型.19株(29.7％)检出2种以上的ESBLs或ESBLs合并AmpC基因.结论 该院产ESBLs肺炎克雷伯菌中,最常见的ESBLs基因型为SHV-12和CTX-M-14型;AmpC酶的主要基因型为DHA-1,菌株中同时产生多种β-内酰胺酶的较多.     

产科感染革兰阴性菌株产超β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解引起产科感染革兰阴性杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs）及耐药情况。方法采用ESBLs确认试验检测ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC和K-B进行药敏试验。结果 革兰阴性杆菌ESBLs、AmpC酶总检出率分别为32．0％、33．6％,单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs＋高产AmpC酶和ESBLs＋诱导AmpC酶菌株依次占11．9％、13．5％、14．1％和6．03％．总分离株对亚胺培南、头孢哌酮-他唑巴坦的耐药率分别为5．28％、6．54％,其次为头孢吡肟,为25．0％。单产酶株较非产酶株,双产酶株较单产酶株具有较高的耐药率。结论 产酶是产科感染革兰阴性菌株多重耐药的主要原因之一,亚胺培南和头孢哌酮-他唑巴坦、头孢吡肟（FEP）对其具有良好的抗菌活性。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的 了解下呼吸道感染肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和质粒AmpC酶的产生情况及耐药性,研究AmpC酶的基因型别.方法 用纸片扩散确证法检测ESBLs;用酶提取三维试验检测AmpC酶,聚合酶链反应（PCR）扩增AmpC酶的基因,DNA序列测定检测AmpC酶的基因型;K-B法检测细菌耐药性.结果 58株下呼吸道感染肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性21株,AmpC酶阳性5株,其中3株ESBLs和AmpC酶均阳性,5株AmpC酶阳性菌中,4株扩增出DHA基因,经测序均为DHA-1,1株扩增出MIR基因.产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株.结论 肺炎克雷伯菌中ESBL＊s和AmpC酶均有较高的检出率,AmpC酶以DHA基因型为主.产ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因.     

摩根摩根菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解摩根摩根菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）、金属酶（MBLs）、碳青霉烯酶（KPC）情况,并分析其对17种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs和AmpC及MBLs采用三维试验检测,碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测,并以K-B法测定17种常见抗菌药物的耐药性。结果 102株摩根摩根菌单产ESBLs 15株,检出率为14.71%;单产AmpC 8株,检出率为7.84%;单产金属β-内酰胺酶（MBLs）3株,检出率为2.94%;所有菌株中未检出碳青霉烯酶（KPC）;同产ESBLs及AmpC 6株,检出率为5.88%;未发现其他双产酶菌株。摩根摩根菌非产酶分离株对17种抗生素的耐药率均低于50.0%;摩根摩根菌产酶分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于15.0%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;对其余抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株（P〈0.05）。同产ESBLs＋AmpC与耐亚胺培南摩根摩根菌分离株呈多重耐药。结论我院摩根摩根菌分离株产生多种β-内酰胺酶,且对常用抗生素耐药性比较严重,建议临床医师合理使用抗生素,以免耐药菌株的产生。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解肺炎克雷伯菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC)、金属酶(MBLs)、碳青霉烯酶(KPC)情况,并分析其对19种常见抗菌药物的耐药性.方法 ESBLs和AmpC及MBLs采用三维试验检测,碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测,并以K-B法测定19种常见抗菌药物的耐药性.结果 582株肺炎克雷伯菌单产ESBLs 168株,检出率为28.86％;单产AmpC52株,检出率为8.93％;单产KPC 38株,检出率为6.53％;所有菌株中未检出MBLs;同产ESBLs及AmpC43株,检出率为7.39％;同产ESBLs及KPC 12株,检出率为2.06％,同产AmpC及KPC 10株,检出率为1.72％,未发现同产ESBLs、AmpC及KPC 3种酶菌株.单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs+ AmpC肺炎克雷伯菌分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于3.0％,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义(P＞0.05);对其余抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株(P＜0.01).另外,同产ESBLs+ AmpC肺炎克雷伯菌分离株与单产ESBLs、单产AmpC株相比,对头孢他啶、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明等多种抗生素表现为明显升高(P＜0.01或P＜0.05).单产碳青霉烯酶株、同产ESBLs及KPC、同产AmpC及KPC菌株对多粘菌素B的耐药率为28.94％～33.33％,其余抗生素的耐药率均高于50.0％;单产KPC株与非产酶菌株相比,对所有抗生素的耐药率均明显升高(P＜0.01).结论 肺炎克雷伯菌分离株产生多种β-内酰胺酶,且对常用抗生素呈高度耐药,建议临床医师合理使用抗生素,以免耐药菌株的产生.     

奇异变形杆菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解奇异变形杆菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC)、金属酶(MBLs)、肺炎克雷伯杆菌碳青霉烯酶(KPC)情况,并分析其对18种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs、AmpC和MBLs采用三维试验检测,KPC采用改良Hodge试验进行检测,并以K-B法测定18种常见抗菌药物的耐药性。结果 302株奇异变形杆菌单产ESBLs 60株,检出率为19.87%;单产AmpC 40株,检出率为13.25%;KPC 3株,检出率为0.99%;所有菌株中未检出金属β-内酰胺酶(MBLs);同产ESBLs及AmpC 36株,检出率为11.92%;未发现其他双产酶菌株。奇异变形杆菌非产酶分离株对常用抗生素(呋喃妥因、复方新诺明除外)的耐药率均低于50.00%;奇异变形杆菌产酶分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于10.00%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义(P0.05);对其余大部分抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株(P0.05)。同产ESBLs+AmpC与耐亚胺培南奇异变形杆菌分离株呈多重耐药。结论我院奇异变形杆菌分离株产生ESBLs、AmpC及KPC,且对常用抗生素耐药性比较严重,建议临床医师根据实验室药敏试验结果,合理使用抗生素。     

耐亚胺培南黄杆菌的耐药性分析

目的探讨耐亚胺培南黄杆菌的ESBLs和AmpC检出率和耐药率。方法采用ESBLs确认试验检测ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC,用K-B法进行药敏试验。结果1011株耐亚胺培南黄杆菌中,产ESBLs株787株,占77.8%;检出AmpC 549株,占54.3%;检出同产ESBLs AmpC株439株,占51.6%,其中ESBLs 高产AmpC 288株,占65.6%;ESBLs 诱导AmpC 151株,占34.4%;黄杆菌对β-内酰胺类抗生素、庆大霉素、阿米卡星的耐药率高,对氟诺唑酮类抗生素及加酶头孢菌素较敏感。结论产酶是黄杆菌多重耐药的主要原因之一,头孢哌酮/他唑巴坦、头孢吡肟对其具有良好的抗菌活性。     

头孢他啶耐药褪色沙雷菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解头孢他啶耐药褪色沙雷菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）及碳青霉烯酶情况,并分析其对14种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs、AmpC采用三维试验进行检测;碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测;药物敏感试验采用K-B法测定。结果 112株头孢他啶耐药褪色沙雷菌ESBLs、AmpC检出率较高;未发现同产ESBLs、AmpC及碳青霉烯酶3种酶的菌株。产ESBLs、AmpC褪色沙雷菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率低于6.00%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢比肟的耐药率均明显高于非产酶菌株（P〈0.01）。另外,同产ESBLs＋AmpC头孢他啶耐药褪色沙雷菌分离株与单产酶株相比,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢比肟、复方新诺等多种抗生素耐药率差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。碳青霉烯酶株对14种常见抗生素多重耐药或泛耐药。结论我院头孢他啶耐药褪色沙雷菌分离株对常用抗菌药物的耐药性较高,耐药性的产生与细菌产多种β-内酰胺酶有关。     

肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布检测与耐药特性的相关性研究

目的研究肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布与耐药特性的相关性。方法收集2008年1月至2013年12月临床分离的100株肺炎克雷伯菌,采用K-B法进行体外药敏试验,采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,采用聚合酶链式反应进行ESBLs酶及AmpC酶基因的检测。结果60株检测出ESBLs酶,其中60株内检出ESBLs基因阳性56株,主要为SHV型基因;检出AmpC酶的检测6株,主要为DHA型基因。其中两种基因同时阳性者1株。除哌拉西林/他唑巴坦,单产AmpC酶、ESBLs及两种基因同时阳性菌（SSBLs）对其他17种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株。结论医院肺炎克雷伯菌的主要耐药机制为ESBLs酶及AmpC酶基因。ESBLs耐药基因检出率高,ESBLs阳性株耐药率明显高于ESBLs基因阴性株。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关耐药基因的检测

目的对耐亚胺培南（IMP）的铜绿假单胞菌（IRPa）相关耐药基因进行检测。方法 2003年至2009年从临床标本中分离到（P.aeruginosa）共220株,采用三维试验筛选产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌,应用普通PCR和多重PCR分别检测碳青霉烯酶基因和质粒携带的C类头孢菌素酶（AmpC酶）耐药基因,应用荧光定量RT-PCR的方法检测oprD2基因的表达情况。结果共检出43株产β-内酰胺酶的菌株,其中产AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、金属β-内酰胺酶（MBLs）和未知酶菌株的构成比分别58.14%（25/43）、18.60%（8/43）、4.65%（2/43）和16.28%（7/43）。74株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中,有2株菌携带IMP-9基因,1株菌携带DHA质粒型AmpC酶基因,其他碳青霉烯酶基因检测为阴性。40株菌株oprD2基因表达蛋白量降低,34株oprD2基因表达蛋白量正常。结论 oprD2基因的突变或蛋白表达量降低是IRPa对亚胺培南耐药的主要原因,AmpC酶可水解亚胺培南可能与铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药有一定的关系,而KPC-1酶和MBLs在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制中不是主要因素。     

Molecular characteristics of extended-spectrum beta-lactamases and qnr determinants in Enterobacter species from Japan

The incidence of extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) has been increasing worldwide, but screening criteria for detection of ESBLs are not standardized for AmpC-producing Enterobacteriaceae such as Enterobacter species. In this study, we investigated the prevalence of ESBLs and/or AmpC β-lactamases in Japanese clinical isolates of Enterobacter spp. and the association of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants with ESBL producers. A total of 364 clinical isolates of Enterobacter spp. collected throughout Japan between November 2009 and January 2010 were studied. ESBL-producing strains were assessed by the CLSI confirmatory test and the boronic acid disk test. PCR and sequencing were performed to detect CTX-M, TEM, and SHV type ESBLs and PMQR determinants. For ESBL-producing Enterobacter spp., pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was performed using XbaI restriction enzyme. Of the 364 isolates, 22 (6.0%) were ESBL producers. Seven isolates of Enterobacter cloacae produced CTX-M-3, followed by two isolates producing SHV-12. Two isolates of Enterobacter aerogenes produced CTX-M-2. Of the 22 ESBL producers, 21 had the AmpC enzyme, and six met the criteria for ESBL production in the boronic acid test. We found a significant association of qnrS with CTX-M-3-producing E. cloacae. The 11 ESBL-producing Enterobacter spp. possessing bla(CTX-M), bla(SHV), or bla(TEM) were divided into six unique PFGE types. This is the first report about the prevalence of qnr determinants among ESBL-producing Enterobacter spp. from Japan. Our results suggest that ESBL-producing Enterobacter spp. with qnr determinants are spreading in Japan.     

生物被膜肺炎克雷伯菌产ESBLs的耐药性和基因型分析

目的检测临床分离的肺炎克雷伯菌在体外形成生物被膜后产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-Laetamases,ESBLs）的情况,分析及研究其耐药性和耐药基因的分型情况。方法采用改良平板法在体外建立肺炎克雷伯菌生物被膜模型,用三维试验确认产ESBLs菌株,用K-B法进行药敏试验,用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）进行blaSHV、blaTEM和blaCTX—M基因扩增,产物分别克隆人pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果临床筛选出的60株ESBLs阴性肺炎克雷伯菌有46株在体外成功建立了生物被膜模型,并有9株产生了ESBLs表型。产酶后菌株的耐药性明显高于产酶前。PCR结果显示9株细菌均携带SHV基因,有4株同时携带TEM基因,没有检出携带CTX-M基因的菌株。9株细菌的SHV基因分别属于SHV-5、SHV-12和SHV-28亚型。4株携带TEM基因的细菌均为TEM-1亚型。结论生物被膜的形成能够诱导肺炎克雷伯菌产生ESBLs。本实验中检出的产ESBLs的基因型都是由SHV-1突变产生的。生物被膜的形成和产生ESBLs的协同作用是生物被膜肺炎克雷伯菌耐药性增强的主要原因之一。     

铜绿假单胞菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解铜绿假单胞菌临床分离株ESBLs和AmpC酶的产生及对常用抗菌药物敏感性,指导临床合理选用抗生素。方法常规培养分离细菌,采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌;按NCCLS推荐的双纸片确证法和K-B纸片扩散法检测ESBLs和药敏试验;采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,确诊采用三维试验。结果铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶总检出率分别为40.8%和38.2%,其中,单产AmpC酶、单产ESBLs和同产AmpC酶+ESBLs检出率分别为19.7%、26.3%和14.5%。药敏试验显示:产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产AmpC酶和ESBLs菌株中更为严重。结论台州地区临床分离的铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶菌株检出率较高。产AmpC酶和ESBLs的菌株呈高度耐药,临床上对产酶菌株引起感染的治疗应根据细菌药敏试验结果,合理选择有效的抗菌药物联合治疗,减少产酶菌株的产生和流行。     

Antibiotic susceptibility of bacterial strains isolated from patients with various infections

AIMS: Isolates from various samples obtained during 1998 and 1999 were identified and their susceptibility to third-generation cephalosporins, monobactams and/or cephamycins studied along with any production of ESBLs. METHODS AND RESULTS: Of these samples, bacteria most frequently isolated by the conventional techniques and Vitek GNI card were Escherichia coli (37%), Klebsiella pneumoniae (27%) and Enterobacter cloacae (16%). Using disk diffusion and double-disk synergy tests, we found that 71% strains produced ESBLs and 18% strains produced ESBLs and cephamycinases. Banding patterns of PCR amplification with the designed primers showed that 57% strains were capable of harbouring bla(SHV) genes. The bla(TEM), bla(CMY) and bla(AmpC) genes were harboured by 55%, 31% and 12% strains, respectively. Forty-five percent of strains contained more than two types of beta-lactamase genes. In particular, one strain contained bla(TEM), bla(SHV), bla(CMY) and bla(AmpC) genes. CONCLUSIONS: The percentage of ESBL-producing strains was high. The most prevalent beta-lactamase gene was bla(SHV) gene. The bla(CMY) genes have been prevalent in cephamycin-resistant strains. The multidrug-resistant strains resistant to third-generation cephalosporins and cephamycins were detected in high percentage. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Resistance mechanisms to beta-lactams, comprising mostly extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production, lead to the resistance against even recently developed beta-lactams in enterobacteria, which is now a serious threat to antibiotic therapy. The high prevalence of bla(CMY) genes and multidrug-resistant genes may also cause therapeutic failure and lack of eradication of these strains by third-generation cephalosporins or cephamycins.