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目的:建立一种经济、快速且高质量提取人体外周凝血DNA的方法。方法:摸索最佳的匀浆条件,对外周凝血块进行匀浆,采用Ⅺ法对匀浆液进行基因组DNA的提取,通过凝胶电泳、单重PCR和多重PCR检测凝血基因组DNA的提取产量和质量。并分别与常规的凝血基因组DNA提取方法,即蛋白酶K消化法,以及提取抗凝血基因组DNA的Ⅺ法进行比较分析。结果:最佳的匀浆条件为:39000map,15秒。在此条件下提取的基因组DNA完整性好,纯度和产量与蛋白酶K消化法提取凝血DNA和KI法提取抗凝血DNA的结果相比,没有统计学差异。单重PCR和多重PCR也获得了理想的扩增结果。结论:与常规的外周凝血提取方法相比(蛋白酶K消化法),本方法节省了时间和成本,能快速、经济、有效地提取外周凝血基因组DNA,可用于后续的科研和临床诊断需要,解决了部分科研机构血液基因组DNA的样本来源问题。 相似文献
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《基因组学与应用生物学》2017,(4)
水体沉积物为一新型微生物种质资源库,不依赖于培养的菌种多样性研究的首要条件是获取优质的基因组DNA。本研究以改进的氯仿异戊醇法、蛋白酶K+SDS法、玻璃珠+蛋白酶K+SDS法提取湖泊基因组DNA,并与试剂盒提取结果进行比较,为沉积物分子生态学的研究提供参考和借鉴。结果表明,改进后的氯仿异戊醇法提取的DNA纯度较低,腐殖质明显,纯化后PCR产量较低;蛋白酶K+SDS法获得的DNA完整性较好,浓度高,PCR扩增应用效果最好;玻璃珠+蛋白酶K+SDS法提取的基因组DNA效果次之;试剂盒法提取的基因组DNA浓度较低,片段长度略小。蛋白酶K+SDS法为除试剂盒外适合于湖泊沉积物基因组DNA提取的较好方法。 相似文献
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目的 为快速地提取到质量较好的黑翅土白蚁基因组DNA进行白蚁种群多样性的研究,对基因组DNA提取方法进行了比较与改进.方法 先初步采取CTAB法与蛋白酶K法对黑翅土白蚁基因组DNA的提取方法进行比较,再利用正交设计法对蛋白酶K法中裂解液、蛋白酶、RNA酶及作用时间4个因素进行优化.结果 蛋白酶K法获得的基因组DNA的质量与产量稍优于CTAB法;较佳的提取步骤组合为:裂解液150 μL,蛋白酶K 6μL,作用时间1h,RNA酶可不添加.结论 采用优化后的方法获得的基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到了清晰、稳定的扩增谱带,完全可用于相关后续实验. 相似文献
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采采用氧化硅超顺磁性纳米磁珠和自己设计的试剂体系及提取流程,建立了一种基因组DNA的快速提取方法,该方法以氧化硅磁珠为固相吸附载体,盐酸胍、 -巯基乙醇和SDS为主要裂解吸附试剂。以全血或培养细胞为实验材料进行基因组DNA的提取结果显示用本文建立的方法提取100 L小鼠抗凝血,可得2~3 g基因组DNA, OD260/OD280为1.8 ± 0.05,其纯度可满足后续的酶切和PCR生物操作要求。该方法整个提取过程只需12分钟,不需特殊实验条件同时可省略蛋白酶K的消化过程和离心操作,适用于一般实验室的需求,是一种操作简便、快速高效的提取方法。 相似文献
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一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法 总被引:9,自引:0,他引:9
以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0.9-3.25μg/μL,D260nm/D280nm值为1.79-1.87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增。因此,本方法能够从鱼类肌肉组织中获得较为纯净的基因组DNA,适于进一步的分子生物学研究之用。 相似文献
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目的:筛选能均衡地提取小鼠胚胎胃肠道微生物区系各种细菌总DNA的方法.方法:分别采用反复冻融法、CTAB -SDS法、柱式基因组DNA提取试剂盒法提取小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA,对其进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定、PCR扩增等质量检测.结果:CTAB -SDS方法提取的基因组DNA纯度较高,OD260/OD280平均值最高,为1.845,电泳条带清晰,能满足下游的PCR扩增等分子操作.结论:确定CTAB -SDS方法为提取小鼠胚胎胃肠道细菌基因组DNA的最佳方法,为研究不同种动物胚胎的肠道菌群的结构和多样性奠定了基础. 相似文献
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目的:在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法。方法:分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性。结果:相同处理量(108个)的革兰氏阳性菌(1株)、革兰氏阴性菌(4株)、古菌(1株)经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260/OD280的值更接近1.8-2.0(纯DNA的OD260/OD280在1.8-2.0之间),前者所提DNA回收率最大可达后者的16.7倍;煮沸裂解法只需较少菌(102个)便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏。结论:两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随菌浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间。 相似文献
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三种人全血基因组DNA提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:比较改良酚一氯仿抽提法、盐析法、试剂盒法从人全血中提取基因组DNA的效果,以期建立一种快速、经济的提取高质量基因组DNA的方法。方法:分别用上述三种方法从人全血中提取基因组DNA,通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、聚合酶链式反应(PCR)、限制性内切酶酶切检测提取的基因组DNA的产量、纯度和质量。结果:改良酚一氯仿抽提法与试剂盒法提取的基因组DNA相比,DNA的产量有统计学差异,DNA的纯度无统计学差异,但试剂盒法提取的基因组DNA有较明显的降解现象:盐析法与改良酚.氯仿抽提法、试剂盒法相比,基因组DNA的产量和纯度都存在统计学差异,并且基因组DNA聚合酶链式反应(PCR)扩增的稳定性也明显劣于另外两种方法;三种方法提取基因组DNA均能进行限制性内切核酸消化。结论:改良酚一氯仿抽据取法是一种经济、快速、高效、稳定提取人全血基因组DNA的方法,适用于批量临床标本处理。 相似文献
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Extremely Rapid Extraction of DNA from Bacteria and Yeasts 总被引:22,自引:0,他引:22
A very simple and rapid method for extracting genomic DNA from Gram-negative bacteria, Gram-positive bacteria and yeasts is
presented. In this method, bacteria or yeasts are lysed directly by phenol and the supernatant is extracted with chloroform
to remove traces of phenol. The supernatant contains DNA that is suitable for molecular analyses, such as PCR, restriction
enzyme digestion and genomic library construction. This method is reproducible and simple for the routine DNA extraction from
bacteria and yeasts. 相似文献
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Ruyi Xu Ping Ye Leiming Luo Hongmei Wu Jin Dong Xinxin Deng 《Molecular biotechnology》2010,46(3):258-264
Rapid purification of DNA from samples of highly clotted blood is a challenging problem due to the difficulty in recovering
and dispersing blood clots. We developed a new method for discarding the serum-separator gel and rapidly dispersing the blood
clots. A special disposable tip was inserted into the serum-separator gel so that the serum-separator gel could be discarded.
The blood clot obtained was dispersed into small pieces through a copper mesh (pore size, 250 μm) in a special dispersing
instrument by centrifugation. After lysis of red blood cells and white blood cells, genomic DNA was concentrated and desalted
by isopropanol precipitation. The mean yield of DNA purified from a 0.3-ml blood clot was 22.70 μg in 173 samples of clotted
blood cryopreserved for 1 month, and 19.02 μg in 1,372 samples of clotted blood cryopreserved for >6 months. DNA samples were
successfully performed through polymerase chain reaction, real time polymerase chain reaction, and melt curve analysis. Their
quality was comparable with that purified directly from EDTA-anticoagulated blood. The new method overcomes the difficulties
in recovering and dispersing blood clots, allowing efficient purification of DNA from samples of highly clotted blood. 相似文献
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A simple method for DNA extraction from marine bacteria that produce extracellular materials 总被引:9,自引:0,他引:9
We present a simple method for extracting DNA from the marine bacteria Hahella chejuensis, a Streptomyces sp., and a Cytophaga sp. Previously, DNA purification from these strains was hindered by the presence of extracellular materials. In our extraction method, the marine bacteria are lysed by freezing and grinding in liquid nitrogen, and treated with SDS. The extracted DNA is purified using a phenol/chloroform mixture, and precipitated in isopropanol. The extracted DNA is of high quality and suitable for molecular analyses, such as PCR, restriction enzyme digestion, genomic DNA blot hybridization, and genomic DNA library construction. We used this method to extract genomic DNA from several other marine bacteria. Our method is a reproducible, simple, and rapid technique for routine DNA extractions from marine bacteria. Furthermore, the low cost of this method makes it attractive for large-scale studies. 相似文献
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SDSC-TAB和高盐沉淀法提取香蕉枯萎病菌基因组DNA的比较 总被引:3,自引:0,他引:3
以香蕉枯萎病菌菌株为试验材料,采用SDS- CTAB法和高盐沉淀法提纯香蕉枯萎病菌基因组DNA。结果表明:高盐沉淀法是适合于香蕉枯萎病菌基因组DNA提取的方法。该方法提取的DNAOD2 60 2 80值显示产物纯度较高;经琼脂糖凝胶电泳得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,DNA浓度较高,基本无DNA碎带;不用RNase处理,已无RNA的干扰,无需任何纯化处理即可用于PCR扩增和RAPD分析。同时对DNA提取过程中的细节问题进行了探讨与分析。 相似文献