lncRNA BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移

目的:研究长链非编码RNA BLACAT1在非小细胞肺癌发生和转移过程中的作用机制。方法:starBase软件分析TCGA数据库中肺腺癌及肺鳞癌与癌旁组织之间BLACAT1表达差异;qRT-PCR检测人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、NCI-H1299、NCI-H23和正常肺上皮细胞BEAS-2B中BLACAT1的转录水平差异,筛选BLACAT1高表达非小细胞肺癌细胞系;CCK-8检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;starBase软件预测BLACAT1作用的miRNA,采用qRT-PCR验证敲低BLACAT1对预测miRNA表达的影响,筛选与BLACAT1相互作用的miRNA,双萤光素酶报告基因实验验证结果;CCK-8检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western印迹检测非小细胞肺癌细胞转移相关基因的蛋白表达水平。结果:肺腺癌及肺鳞癌组织中BLACAT1表达量显著高于癌旁组织;非小细胞肺癌细胞A549的BLACAT1表达量最高;敲低BLACAT1降低A549细胞活力、迁移和侵袭能力;BLACAT1作为海绵吸附miR-374b-5p;敲低BLACAT1增加miR-374b-5p的表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论:BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移。     

Periostin在非小细胞肺癌中的高表达可增强肺癌细胞的增殖和侵袭能力

为了研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的血浆和肺癌组织中Periostin蛋白表达水平以及对癌细胞增殖和侵袭的影响。本研究选取了40例非小细胞肺癌患者作为研究组,同时选取40例同期体检的健康人群作为对照组,采用Real-time PCR的方法比较肺癌患者和健康人群的血浆中,以及肺癌患者的癌组织和癌旁正常组织中Periostin表达水平;采用小分子干扰RNA(small-interfering RNA,si RNA)抑制非小细胞肺癌细胞系A549中Periostin的表达,使用CCK-8法检测A549增值能力的变化,使用Transwell方法观察A549侵袭能力的变化。研究结果显示,Periostin蛋白在非小细胞肺癌患者的血浆中表达水平显著高于正常人群(p0.05),同时在肺癌组织中的含量显著高于癌旁组织(p0.05);导入Periostin的si RNA后,A549细胞的增殖和侵袭能力显著下降(p0.05)。本研究表明,Periostin在非小细胞肺癌患者的血浆和肺癌组织中表达量提高,可以增强肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

长链非编码RNA SNHG1促进肺癌细胞增殖

近年来,大量证据表明长链非编码RNA (long non-coding RNAs, lncRNAs) 在肿瘤发生发展中发挥重要的作用。本研究通过生物信息学预测发现,核仁小分子RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene 1,SNHG1)无蛋白质编码功能,且主要定位于细胞质。qRT-PCR结果显示,SNHG1在肺癌细胞中的表达量显著高于正常肺上皮细胞。在肺癌细胞NCI-H1299中,敲低SNHG1发现,该细胞增殖能力明显下降;在正常肺上皮细胞BEAS-2B中,过表达SNHG1可显著促进该细胞的增殖能力。深入研究发现,SNHG1可上调CDK4和下调p27kip1在蛋白质水平的表达,而对其mRNA水平表达量无影响。此外,在肺癌临床组织中也发现SNHG1高表达,且高表达的SNHG1与肺癌瘤体大小、TNM分期和远端转移正相关,而与患者年龄及吸烟史无关。综上所述,SNHG1在肺癌中高表达,通过上调CDK4和下调p27kip1推进肺癌进程。     

miR-143-3p通过靶向TAK1抑制肺癌增殖和侵袭

目的:分析miR-143-3p在肺癌细胞中的表达情况以及对肺癌进展的作用。方法:通过starBase数据库和肺癌病例组织检测分析miR-143-3p在肺癌组织和正常对照组织中的表达差异;分析miR-143-3p在肺癌细胞HCC27、H1975、A549和肺上皮细胞BEAS-2B中的mRNA水平差异;采用CCK-8法检测miR-143-3p对肺癌细胞增殖活性的影响;采用Transwell实验检测miR-143-3p对肺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过qRT-PCR检测miR-143-3p对整合素α6(ITGA6)、锚蛋白重复及PH结构域3(ASAP3)、黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)和转化生长因子β激活激酶1(TAK1)表达的影响;通过Western印迹检测miR-143-3p对TAK1蛋白表达的影响。结果:starBase分析和肺癌病例组织检测结果显示miR-143-3p在肺癌组织中低表达,同样地,miR-143-3p在肺癌细胞中的表达也显著低于正常肺上皮细胞;过表达miR-143-3p抑制了肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力;过表达miR-143-3p显著抑制TAK1的表达。结论:miR-143-3p在肺癌中通过靶向TAK1抑制肺癌的增殖和侵袭,miR-143-3p在肺癌进展中详细的分子作用机制和信号通路仍须进一步探讨。     

miR-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为研究

目的:探讨mi R-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为。方法:qRT-PCR法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织、肺癌细胞、正常肺上皮细胞中的mi R-199a-3p m RNA相对表达量。比较远处转移肺癌组织、未转移肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA相对表达量。qRT-PCR法、Western Blot法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织中的CBX7 m RNA及蛋白的表达水平。荧光素酶活性法检测mi R-199a-3p与靶基因CBX7的结合。比较mi R-199a-3p模拟物转染组与阴性对照组的肺癌细胞中的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平。CCK8实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞增殖的促进作用。Tranwell实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移能力的影响。结果:肺癌组织中mi R-199a-3p明显高于癌旁正常组织,发生远处转移的肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA的表达量明显高于未发生转移的肺癌组织,差异有统计学意义(P<0.001)。肺癌组织中CBX7m RNA、CBX7蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。荧光素酶活性法证实mi R-199a-3p可与靶基因CBX7结合抑制CBX7的表达。肺癌细胞中mi R-199a-3p m RNA的相对表达量明显高于正常肺上皮细胞,CBX7 m RNA相对表达量明显低于正常肺上皮细胞(P<0.05)。对于肺癌细胞,mi R-199a-3p模拟物转染组的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平均明显低于阴性对照组(P<0.001)。CCK8实验证实mi R-199a-3p能够促进肺癌细胞的增殖,Tranwell实验证实mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移具有积极的促进作用。结论:mi R-199a-3p在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用,能够通过抑制CBX7基因的表达,促进肺癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

人类复制因子C4在肺腺癌进展中的初步功能探究

目的:分析人类复制因子C第四大亚基(RFC4)在肺腺癌组织和细胞中的表达,探究其在肺腺癌进展中的作用。方法:通过starBase分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中RFC4在肺腺癌组织中的表达;通过Kaplan-Meier plotter分析RFC4与肺腺癌的预后关系;利用人肺腺癌细胞A549、H1437和人正常肺上皮细胞BEAS-2B分析RFC4在肺腺癌细胞中的表达情况;转染RFC4 siRNA后,利用CCK-8法和Transwell法检测RFC4 siRNA对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:RFC4在肺腺癌组织中高表达,并与肺腺癌预后有较强的相关性,RFC4表达越高,肺腺癌患者的总生存期和无复发生存期就越低,预后较差;同样地,RFC4在肺腺癌细胞系中的表达也高于正常肺上皮细胞;RFC4 siRNA降低了肺腺癌细胞中RFC4的表达,使肺腺癌细胞的增殖、迁移侵袭能力下降。结论:RFC4在肺腺癌细胞中高表达,并促进了肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,涉及的详细分子机制还须进一步探究。     

miR-195-5p在结直肠癌和肺癌细胞中的功能差异性研究

目的:分析miR-195-5p在结直肠癌和肺癌组织及相应肿瘤细胞中的表达差异和功能差异。方法:通过starBase数据库调取癌症基因组图谱(TCGA)中miR-195-5p表达数据,分析其在结直肠癌和肺癌组织中的表达差异;采用人结直肠癌细胞系SW620、小鼠结直肠癌细胞系MC38、人肺癌细胞系A549和小鼠肺癌细胞系344SQ进一步分析miR-195-5p在不同肿瘤细胞中的表达差异;采用CCK-8法检测miR-195-5p过表达对SW620和A549细胞增殖的影响;采用Transwell实验检测mi R-195-5p过表达对SW620和A549细胞侵袭与迁移能力的调控差异。结果:生物信息学分析结果显示miR-195-5p在结直肠癌组织中显著高表达,而在肺癌组织中的表达量却低于正常对照;与组织表达结果类似,结直肠癌细胞中miR-195-5p的表达量显著高于肺癌细胞;过表达miR-195-5p抑制人肺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭,而在人结直肠癌细胞SW620中结果却截然相反。结论:miR-195在不同类型的肿瘤中表达不同,功能也存在差异,不能简单地概括为一种抑癌因子或致癌因子,miR-195在肿瘤中的作用仍有待进一步研究。     

circ＿0015756通过调控miR-515-5p/HMGB3轴影响肺癌细胞增殖、凋亡和迁移

为探讨环状RNA 0015756(circ_0015756)对肺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制,该研究采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析肺癌组织和癌旁组织中circ_0015756和微小RNA(miR)-515-5p的表达水平。同时,将circ_0015756小干扰RNA(si-circ_0015756)、miR-515-5p模拟物、si-circ_0015756+miR-515-5p抑制物分别转染肺癌细胞A549,采用四甲基偶氮唑蓝实验、平板克隆实验检测A549细胞的增殖能力,采用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率,采用划痕愈合实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移能力。蛋白质印迹法测定高迁移率族蛋白3(HMGB3)的表达水平。双荧光素酶分析circ_0015756与miR-515-5p、miR-515-5p与HMGB3的靶向关系。结果显示,肺癌组织中circ_0015756的相对水平显著高于癌旁组织(P0.05),miR-515-5p的相对水平显著低于癌旁组织(P0.05)。干扰circ_0015756表达后A549细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-515-5p的相对水平显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。过表达miR-515-5p后A549细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。抑制miR-515-5p表达明显减弱干扰circ_0015756表达对A549细胞增殖、集落形成、迁移以及HMGB3蛋白表达的影响(P0.05)。circ_0015756与miR-515-5p直接结合,miR-515-5p与HMGB3直接结合。总之,干扰circ_0015756通过靶向上调miR-515-5p/HMGB3轴抑制肺癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的:研究转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭作用的影响。方法:采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞WSTF高表达细胞系A549-WSTF和空质粒对照细胞系A549-control。细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;Trans-well迁移实验和侵袭实验观察WSTF对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot验证A549-WSTF细胞WSTF蛋白水平显著高于对照细胞A549-control,P=0.0004。WSTF高表达明显促进了肺癌细胞的增殖能力(1-4天P值分别为0.002、0.0004、0.0002和3.21×10-5)和克隆形成能力(P=0.004);WSTF过表达还显著促进了肺癌细胞从trans-well小室迁移到下室的作用,其OD570值分别为0.626±0.013(A549-WSTF)和0.322±0.010(A549-control),P=2.37×10-5;WSTF还促进肺癌细胞穿透基质胶迁移到下室,其OD570值分别为0.600±0.027(A549-WSTF)和0.333±0.017(A549-control),P=0.0004。结论:WSTF可以促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力而发挥促癌作用。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对肺癌细胞的抗癌作用及机制

前人研究发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)具有较好的抗癌活性,然而其对肺癌的抗癌作用机制尚不清楚。本研究旨在揭示N-CWS对肺癌细胞的抗癌作用及机制。通过平板克隆形成实验测定N-CWS对人肺腺癌细胞系A549菌落形成的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低A549细胞的菌落形成能力(p0.05)。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定N-CWS对肺癌细胞增殖能力的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低EdU阳性细胞比例(p0.05)。通过Transwell小室和伤口愈合实验评估N-CWS对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,发现N-CWS以A549浓度依赖性方式降低细胞的侵袭和迁移数量及伤口愈合百分比(p0.05)。通过qRT-PCR和Western blotting检测N-CWS对A549细胞E-cadherin、IL-6和MMP-9表达的影响,发现N-CWS以浓度依赖性方式上调了A549细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达(p0.05),但以浓度依赖性方式下调了IL-6和MMP-9的m RNA和蛋白表达(p0.05)。本研究证实红色诺卡氏菌细胞壁骨架可按照浓度依赖性方式降低肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其抗癌机制与上调E-cadherin和下调IL-6和MMP-9有关。     

北京4种鸟类分布新纪录

报道了斑鱼狗(Ceryle rudis)、白斑军舰鸟(Fregata ariel ariel)、棕背伯劳(Lanius schach schach)、乌鸫(Turdus merula)4个北京鸟类的新分布记录.以上鸟类未记载于<北京鸟类志>、<北京脊椎动物检索表>和相关文献中,为近年来北京地区新发现的鸟类,在<中国鸟类...     

抗肿瘤药物Rigosertib研究进展

Rigosertib是一种非ATP竞争性多激酶抑制剂,具有显著的抗有丝分裂和抗癌活性,可诱导多种肿瘤细胞增殖停滞和凋亡,对正常细胞增殖的影响很小。Rigosertib已作为高危骨髓增生异常综合征患者的治疗药物应用于Ⅲ期临床试验。本文就Rigosertib的分子作用机制、体内外抗肿瘤活性以及临床试验等方面的研究进展做简要综述。     

胆囊结石患者血清microRNA表达谱及其意义

目的:建立胆囊结石患者与健康人的血清microRNA(miRNA)表达谱,并分析其差异miRNA功能。方法:收集解放军总医院诊治的胆囊结石患者的血清(试验组)及健康人的血清(对照组),采用miRNA测序技术,建立胆囊结石患者的miRNA表达谱,并通过qPCR技术验证其差异miRNA,利用生物信息学技术预测其差异miRNA的生物功能。定量资料以x±s描述,两组数据间比较采用t检验。结果:试验组与对照组miRNA表达谱序列分别为14 899 245和11 783 121个,miRNA种类分别为686和633个,其差异表达miRNA为16个,均为下调。GO分析显示差异miRNA的靶基因在细胞过程上富集于细胞转化、生物调节和代谢过程等,在细胞组成上富集于细胞成分和细胞器成分等,在分子功能上富集于结合和活性催化等;KEGG功能分析显示差异miRNA的靶基因主要参与环腺苷酸、催产素、生物节律等代谢通路。利用qPCR方法验证miR-1228、miR-1249、miR-3614和miR-766在2组间差异趋势与测序结果基本一致,其中miR-1228、miR-3614和miR-766在2组间存在统计学差异,而miR-1249无统计学差异。结论:血清中的差异miRNA在胆囊结石的形成中可能发挥重要作用,其对胆囊结石疾病的防治具有重要意义。     

人重链铁蛋白偶联HER2抗体的纯化及其在成像中的初步应用

目的:利用临床常用抗体将人重链铁蛋白(HFn)纳米材料更好地靶向肿瘤,以期改善肿瘤的靶向成像或药物治疗,促进蛋白类纳米材料向临床转化。方法:在大肠杆菌内表达纯化得到HFn,以抗人表皮生长因子受体2抗体(anti-HER2)作为模型抗体,用双功能交联剂马来酰亚胺-聚乙二醇-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(Mal-PEG-NHS)将HFn与anti-HER2偶联形成HFn/anti-HER2复合物;标记荧光后,观察其不同时间内在HER2阳性乳腺癌荷瘤小鼠内的分布,判断其作为靶向肿瘤药物的可能性。结果:通过尺寸排阻凝胶色谱纯化的靶向复合物HFn/anti-HER2保留典型的对称球状结构,粒径大小为16.88±0.49 nm,较HFn粒径7.11±0.1 nm增加;HFn/anti-HER2组在肿瘤部位的荧光强度是对照组HFn的3倍,说明可以通过偶联抗体提升HFn的靶向性。结论:构建了人重链铁蛋白与抗体的复合物,提升了铁蛋白的靶向性。抗体铁蛋白复合物为铁蛋白类靶向成像及治疗药物的开发提供了新的思路。     

高标准基本农田建设对耕地生态系统服务价值的影响

耕地不仅有粮食生产功能,更具备重要的生态功能。高标准基本农田建设是保障国家粮食安全的重要战略举措,可以提升耕地质量、增强耕地抗灾能力和耕地生态系统服务能力。以北京市为例,在确定不同等级耕地生态系统服务价值的基础上,通过预测法计算高标准基本农田建设能提升的耕地等级,在此基础上测算耕地生态系统服务价值的提升程度,以此定量化高标准基本农田建设对耕地生态系统服务价值的影响。研究发现,通过高标准基本农田建设,北京市耕地等级可以平均提高2.28个利用等,耕地生态系统服务价值由原来的48.83×10~8元提升到52.22×10~8元,说明高标准基本农田建设在提高区域生产能力的同时,也能明显的提高区域生态水平。研究为定量化测算高标准基本农田建设造成的生态系统服务价值变化提供了思路。     

北京发现凤头鹰和黑翅鸢

报道了凤头鹰(Accipiter trivirgatus)和黑翅鸢(Elanus caeruleus)2个北京鸟类分布新记录。以上鸟类未见于《北京鸟类志》、《北京脊椎动物检索表》等文献记载。《中国鸟类分布与分类名录》上所列其分布区中也不包括北京。以上鸟类是北京地区近年来新记录到的猛禽。     

LncRNA SNHG17 promotes gastric cancer progression by epigenetically silencing of p15 and p57

Long noncoding RNAs (lncRNA) are attractive biomarkers and therapeutic targets because of their disease- and stage-restricted expression. Small nucleolar RNA host gene 17 (SNHG17) belongs to a large family of noncoding genes hosting small RNAs, with its expression pattern and biological function not clarified in gastric cancer (GC). Thus, we conducted this study to investigate the functional significance and the underlying mechanisms of SNHG17 in GC progression. Our results showed that SNHG17 expression was upregulated in GC tissues and cells, and its high expression was significantly correlated with increased invasion depth, lymphatic metastasis, and advanced TNM stage. The expression of plasma SNHG17 was also found upregulated in patients with GC compared with healthy controls, with a moderate accuracy for diagnosis of GC (area under the receiver operating characteristic curve = 0.748; 95% CI, 0.666–0.830). Gain- and loss-of-function of SNHG17 revealed that SNHG17 promoted GC cell proliferation, cell cycle progression, invasion, and migration and inhibited apoptosis. Mechanistic investigations showed that SNHG17 was associated with polycomb repressive complex 2 and that this association was required for epigenetic repression of cyclin-dependent protein kinase inhibitors, including p15 and p57, thus contributing to the regulation of GC cell cycle and proliferation. Furthermore, rescue experiments indicated that SNHG17 functioned as an oncogene via activating enhancer of zeste homolog 2 in GC cells. Our study provides a new perspective for SNHG17 acting as a noncoding oncogene in GC tumorigenesis, and it may serve as a novel early diagnostic marker and potential target for the treatment of GC.     

RNA interference-mediated simultaneous silencing of four genes using cross-shaped RNA

The structural flexibility of RNA interference (RNAi)-triggering nucleic acids suggests that the design of unconventional RNAi trigger structures with novel features is possible. Here, we report a cross-shaped RNA duplex structure, termed quadruple interfering RNA (qiRNA), with multiple target gene silencing activity. qiRNA triggers the simultaneous down-regulation of four cellular target genes via an RNAi mechanism. In addition, qiRNA shows enhanced intracellular delivery and target gene silencing over conventional siRNA when complexed with jetPEI, a linear polyethyleneimine (PEI). We also show that the long antisense strand of qiRNA is incorporated intact into an RNA-induced silencing complex (RISC). This novel RNA scaffold further expands the repertoire of RNAi-triggering molecular structures and could be used in the development of therapeutics for various diseases including viral infections and cancer.