长链非编码RNA SNHG17通过抑制p57表达促进肺癌进展

目的:分析肺癌中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)与p57的表达相关性及功能联系。方法:通过starBase数据库分析SNHG17和p57在肺癌组织和正常组织中的表达差异;采用人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺癌细胞系A549、H1975进一步分析SNHG17和p57在肺癌细胞和正常肺细胞中的表达差异;采用qRT-PCR和Western印迹检测si-SNHG17在mRNA和蛋白表达方面对SNHG17和p57的影响;采用CCK-8法检测siSNHG17对A549细胞增殖的影响;采用Transwell法检测si-SNHG17对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:通过数据分析发现SNHG17在肺腺癌和肺鳞癌组织中显著高表达,而p57在肺腺癌和肺鳞癌组织中却显著低表达;与正常肺细胞相比,SNHG17和p57在肺癌细胞中的表达趋势与在肺癌组织中一致;SNHG17和p57的表达呈负相关;沉默SNHG17使p57的表达一定程度上调,A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制。结论:SNHG17在肺癌中高表达,促进肺癌细胞增殖,并通过调节p57的表达来抑制肺癌细胞的增殖和迁移。SNHG17和p57在肺癌中的具体作用机制仍有待进一步研究。     

lncRNA BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移

目的:研究长链非编码RNA BLACAT1在非小细胞肺癌发生和转移过程中的作用机制。方法:starBase软件分析TCGA数据库中肺腺癌及肺鳞癌与癌旁组织之间BLACAT1表达差异;qRT-PCR检测人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、NCI-H1299、NCI-H23和正常肺上皮细胞BEAS-2B中BLACAT1的转录水平差异,筛选BLACAT1高表达非小细胞肺癌细胞系;CCK-8检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;starBase软件预测BLACAT1作用的miRNA,采用qRT-PCR验证敲低BLACAT1对预测miRNA表达的影响,筛选与BLACAT1相互作用的miRNA,双萤光素酶报告基因实验验证结果;CCK-8检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western印迹检测非小细胞肺癌细胞转移相关基因的蛋白表达水平。结果:肺腺癌及肺鳞癌组织中BLACAT1表达量显著高于癌旁组织;非小细胞肺癌细胞A549的BLACAT1表达量最高;敲低BLACAT1降低A549细胞活力、迁移和侵袭能力;BLACAT1作为海绵吸附miR-374b-5p;敲低BLACAT1增加miR-374b-5p的表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论:BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移。     

细胞增殖相关基因Nek2的表达与宫颈癌发生的相关性研究

[目的]探究细胞增殖过程中中心体分离相关基因Nek2(NIMA-related kinase 2,Nek2)的表达水平以及抑制Nek2对宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响。[方法]采集未经放疗或化疗的正常宫颈组织50例,宫颈癌组织40例,提取标本组织总RNA,实时荧光定量PCR检测Nek2在病样组织中的表达水平,以正常宫颈组织作为对照分析Nek2与宫颈癌发生的相关性。以Nek2 siRNA转染Si Ha、He La和293FT(对照)细胞,CCK-8细胞增殖检测法分析细胞数量和对细胞增殖的抑制率,Transwell小室侵袭和Transwell迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力。[结果]Nek2 mRNA在宫颈癌的相对拷贝数(0.0119±0.00601)极显著高于(P0.01)正常宫颈组织(0.00133±0.00216),上调8.94倍。抑制Nek2的活性可显著抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P0.05),且抑制率显著高于非肿瘤细胞的抑制率。[结论]Nek2在宫颈癌组织中的表达水平显著提高,其通过促进癌细胞增殖、侵袭和迁移来促进肿瘤的发生,可作为宫颈癌治疗的候选靶标。     

p21在滋养细胞迁移和侵袭中的作用研究

目的探究p21基因在正常滋养细胞迁移和侵袭中的作用以及可能的机制。方法通过siRNA敲低滋养细胞HTR-8/SVneo中的p21基因。通过细胞增殖实验、划痕实验以及Transwell小室侵袭实验,来观察p21敲低的滋养细胞迁移和侵袭能力的变化。通过实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印记分析(Western Blot),在mRNA和蛋白质水平上检测p21敲低对ERK3和MMP2表达的影响。结果 p21敲低的滋养细胞迁移和侵袭能力显著减弱,但对细胞增殖无影响。ERK3及MMP2在mRNA和蛋白质水平上的表达都显著降低。结论以上结果说明p21基因能促进正常滋养细胞的运动能力,这种作用与调节ERK3和MMP2的表达有关。     

miR-143-3p通过靶向TAK1抑制肺癌增殖和侵袭

目的:分析miR-143-3p在肺癌细胞中的表达情况以及对肺癌进展的作用。方法:通过starBase数据库和肺癌病例组织检测分析miR-143-3p在肺癌组织和正常对照组织中的表达差异;分析miR-143-3p在肺癌细胞HCC27、H1975、A549和肺上皮细胞BEAS-2B中的mRNA水平差异;采用CCK-8法检测miR-143-3p对肺癌细胞增殖活性的影响;采用Transwell实验检测miR-143-3p对肺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过qRT-PCR检测miR-143-3p对整合素α6(ITGA6)、锚蛋白重复及PH结构域3(ASAP3)、黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)和转化生长因子β激活激酶1(TAK1)表达的影响;通过Western印迹检测miR-143-3p对TAK1蛋白表达的影响。结果:starBase分析和肺癌病例组织检测结果显示miR-143-3p在肺癌组织中低表达,同样地,miR-143-3p在肺癌细胞中的表达也显著低于正常肺上皮细胞;过表达miR-143-3p抑制了肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力;过表达miR-143-3p显著抑制TAK1的表达。结论:miR-143-3p在肺癌中通过靶向TAK1抑制肺癌的增殖和侵袭,miR-143-3p在肺癌进展中详细的分子作用机制和信号通路仍须进一步探讨。     

MMP-2 VEGF在肺腺癌细胞中的表达及其意义

目的研究探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在胸腔积液、痰液中肺腺癌细胞的不同表达及二者在肺癌细胞侵袭转移过程中的相互关系。方法选择胸腔积液、痰液共计264例癌性及异型增生细胞标本经免疫细胞化学方法分别检测MMP-2 VEGF的表达情况。结果免疫细胞化学结果显示:MMP-2在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为71.7%(99/138)、16.7%(6/36),在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为39.1%(27/69),统计结果显示MMP-2在恶性胸腔积液腺癌细胞中的表达率明显高于在异型增生的上皮、增生的上皮及痰腺癌细胞的表达率(P均0.05)。VEGF在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为89.1%(123/138)、33.3%(12/36),在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为47.8%(33/69),VEGF在恶性胸腔积液腺癌细胞中表达率明显高于在异型增生的上皮细胞、增生的上皮细胞及痰腺癌细胞的表达率(P均0.05),且MMP-2同VEGF总阳性表达率之间成正相关(r=0.867,P=0.049)。结果 MMP-2 VEGF在胸水腺癌细胞中高表达,可能与肺腺癌的转移、侵袭有关;两者联合做免疫细胞化学检查对肺腺癌细胞病理诊断有辅助意义。     

着丝粒蛋白U(CENPU)在卵巢癌中的高表达及其临床病理学意义

目的探索着丝粒蛋白U(centromere protein U,CENPU)在卵巢癌组织中表达情况和与卵巢癌细胞增殖和迁移的关系及其相关机制。方法应用免疫组织化学和Western blot检测卵巢癌组织和癌旁组织、卵巢癌细胞和正常卵巢上皮细胞中CENPU的表达;沉默卵巢癌细胞CENPU后,应用CCK-8、Transwell和划痕实验检测卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化,以Western blot检测p-PI3K和p-AKT的表达情况。结果相对于癌旁组织,卵巢癌组织中CENPU显著上调,且其表达与FIGO分期、肿瘤大小和淋巴结转移呈正相关。相对于正常卵巢上皮细胞,卵巢癌细胞中CENPU显著上调。敲低CENPU显著抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭,以及p-PI3K和p-AKT的表达。结论 CENPU在卵巢癌中表达上调;CENPU可能通过PI3K/AKT信号通路促进卵巢癌细胞的增殖和转移。     

长链非编码RNA BANCR在食管鳞癌中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探索长链非编码RNA BANCR与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma ESCC)临床病理特征以及预后的关系,以及对于ESCC细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响。方法:使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测ESCC组织及多个细胞系中BANCR的表达水平,分析其与临床病理特征及预后的关联,用小干扰RNA(si RNA)干扰BANCR后用CCK8法检测其对ESCC细胞生长的影响,使用transwell法检测对细胞侵袭和转移能力的影响。结果:相对于癌旁组织,有86%(123/142)的癌组织中BANCR表达量升高,BANCR在癌组织中的相对表达水平与肿瘤的组织学分级、TNM分期和淋巴结转移数量相关(P均0.05)。BANCR在本文涉及的八株ESCC细胞中的表达量均高于正常食管上皮细胞(Het1A)。在TE10和KYSE30细胞中敲降BANCR后可明显降低细胞生长速率,并抑制细胞的侵袭和迁移能力(P0.01)。结论:BANCR在ESCC组织和细胞中表达显著上调。并能增强ESCC细胞的增殖和侵袭能力,有希望成为一种新的辅助ESCC早期诊断和预后判断的肿瘤分子标志物。     

谷胱甘肽转移酶ω1基于酶活位点调控波形蛋白表达并促进肺腺癌恶性进展

摘要 目的：探究谷胱甘肽转移酶ω1（Glutathione S-Transferase Omega 1, GSTO1）关键酶活位点Cys32与肺腺癌恶性进展的关系与初步作用机制。方法：构建GSTO1野生型与酶活失活点突变C32A型过表达的肺腺癌细胞系,观察过表达细胞的形态变化及增殖能力的变化。以临床数据生物信息学分析探究GSTO1调控的促肿瘤蛋白,使用免疫印迹法验证该蛋白在GSTO1野生型与酶活失活点突变C32A型过表达的肺腺癌细胞系中的表达差异,并结合临床公共数据库分析该蛋白与患者预后的关联。结果：发现过表达野生型GSTO1能够引起肺腺癌细胞PC9的形态变化并促进PC9细胞增殖,而过表达C32A突变型GSTO1的PC9细胞与空载体组细胞形态及增殖能力相似;临床数据提示GSTO1与波形蛋白（Vimentin, VIM）表达呈现正相关,免疫印迹法显示野生型GSTO1过表达能够引起Vimentin蛋白表达上调,而C32A酶活失活点突变型GSTO1过表达无法引起Vimentin蛋白表达上调;通过临床样本数据观察GSTO1与Vimentin共同高表达的肺腺癌患者肿瘤恶性程度更高、发生转移的比例更大,同时无病生存期与总生存期更短。结论：GSTO1基于其酶活位点调控Vimentin表达,改变肺腺癌细胞形态并促进肺腺癌细胞增殖,研究结果为靶向GSTO1的肺腺癌治疗提供了新思路。     

TTK对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

该研究探讨了苏氨酸和酪氨酸激酶(threonine and tyrosine kinase,TTK)在膀胱癌中的表达情况及其在膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移中的作用。采用qRT-PCR和免疫组织化学分别检测TTK mRNA和蛋白在癌旁正常组织、非肌层浸润性膀胱癌组织、肌层浸润性膀胱癌组织中的表达水平;将TTK过表达质粒、TTK敲除质粒借助脂质体分别稳定转染膀胱癌HT-1376细胞;用qRT-PCR和Western blot检测转染后TTK mRNA和蛋白的表达情况;应用CCK法和EdU方法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况;transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力。结果显示:TTK mRNA和蛋白在癌旁正常组织、非肌层浸润性膀胱癌组织、肌层浸润性膀胱癌组织中的表达水平逐渐升高,3者之间差异有统计学意义(P0.05);过表达TTK后,HT-1376细胞增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞体外侵袭和迁移能力增强;而敲除TTK后,HT-1376细胞生长受抑制,细胞周期阻滞在G_0/G_1期,细胞凋亡率增加,细胞体外侵袭和迁移能力减弱。该研究结果提示,TTK的表达与膀胱癌的发生、发展有关;TTK能促进膀胱癌HT-1376细胞的增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡。     

间质表皮转化因子通过PI3K/AKT/MMPs信号通路促进肺腺癌细胞的侵袭转移

间质表皮转化因子（mesenchymal to epithelial transition factor,MET）在多种癌症中异常表达,影响肿瘤的发生发展,但MET影响肺腺癌的分子机制并不明确。本研究收集3例淋巴结转移的肺腺癌组织（lung adenocarcinoma tissues,LAD）和3例无淋巴结转移的肺腺癌组织,用于微阵列基因芯片分析。结果显示,与无淋巴结转移的肺腺癌组织相比,有淋巴结转移的肺腺癌组织中有1 314条mRNAs表达上调,400条mRNAs表达下调。其中,MET在有淋巴结转移的肺腺癌组织中表达显著升高。随机选取8个差异表达基因,对收集的潍坊医学院附属医院2014年2月至2017年2月间有淋巴结转移的肺腺癌组织和无淋巴结转移的肺腺癌组织各30例通过qRT -PCR实验进行微阵列基因芯片验证。结果显示,所选mRNAs的表达与微阵列结果一致,验证了微阵列基因芯片结果的准确性。通过Western 印迹进一步检测MET的表达。结果显示,相较于正常肺上皮细胞,肺腺癌细胞中MET的表达显著升高。利用质粒转染,敲减肺腺癌细胞A549中的MET,Transwell侵袭实验结果显示,敲减MET后肺腺癌细胞的侵袭能力明显降低;对各细胞组进行EGF（epidermal growth factor）处理并检测PI3K/AKT/MMPs信号通路,Western 印迹检测结果显示,敲减MET后,肺腺癌细胞中基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）和MMP-9的表达显著下降, AKT的磷酸化水平也显著下降。上述结果表明,MET可通过激活PI3K/AKT信号通路进而增加MMPs的表达促进肺腺癌的侵袭转移。     

肺鳞癌、腺癌组织中miRNA-210表达对预后影响的初步研究

目的:探讨肺鳞癌腺癌组织中mi RNA-210表达水平对预后的影响。方法:选取我院2004年至2007年接受手术治疗的肺鳞癌腺癌患者80例,采用定量RT-PCR测定的方法 mi RNA-210在肺癌组织中的表达,并分析其与患者临床病理特点及组织类型之间的关系。结果:定量RT-PCR测定结果显示,mi RNA-210与肺鳞癌腺癌患者的无病生存期和总生存期负相关(DFS,P=0.001;OS,P=0.004)。mi RNA-210与腺癌患者淋巴结转移(P=0.018)、晚期疾病(P=0.003)及较差的预后(P=0.002)显著相关。多因素Cox分析显示mi RNA-210是腺癌患者无病生存期的独立预后因子(P0.001)。结论:肺腺癌病人肿瘤组织重mi RNA-210可能为预后的生物标志物。     

BRD4在喉鳞状细胞癌病灶转移过程中的作用及机制研究

目的:探讨溴样结构域蛋白4 (Bromoid Domain Protein 4,BRD4)在喉鳞状细胞癌病灶转移过程中的作用及其机制。方法:收集本院2016年4月-2018年4月收治的87例喉鳞状细胞癌患者手术标本。qRT-PCR、Western blot和免疫组化染色检测患者肿瘤组织(Tumor Tissue)、癌旁组织(Adjacent Tissue)和正常组织(Normal Tissue)中BRD4表达;BRD4拮抗剂GSK525762A(500nmo L/L)处理喉鳞状细胞癌Hep2细胞,24、48和72 h后CCK-8检测细胞增殖;Trans-well细胞迁移实验和侵袭实验分别检测GSK525762A给药前后Hep2细胞迁移和侵袭能力;qRT-PCR和Western blot检测GSK525762A给药前后Hep2细胞BRD4、E-Cadherin、N-Cadherin和Twist蛋白表达。结果:喉鳞状细胞癌肿瘤组织中BRD4表达高于癌旁组织和正常卵巢组织(P0.05);GSK525762A给药处理后Hep2细胞增殖能力、迁移和侵袭能力及BRD4和上皮间质转化相关蛋白N-Cadherin和Twist表达均明显低于阴性对照组(P0.05),而E-Cadherin表达的表达明显升高(P0.05)。结论:BRD4可能通过抑制E-Cadherin的表达,增加N-Cadherin和Twist的表达,进而激活上皮间质转化,促进喉鳞状细胞癌转移。     

miR-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为研究

目的:探讨mi R-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为。方法:qRT-PCR法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织、肺癌细胞、正常肺上皮细胞中的mi R-199a-3p m RNA相对表达量。比较远处转移肺癌组织、未转移肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA相对表达量。qRT-PCR法、Western Blot法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织中的CBX7 m RNA及蛋白的表达水平。荧光素酶活性法检测mi R-199a-3p与靶基因CBX7的结合。比较mi R-199a-3p模拟物转染组与阴性对照组的肺癌细胞中的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平。CCK8实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞增殖的促进作用。Tranwell实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移能力的影响。结果:肺癌组织中mi R-199a-3p明显高于癌旁正常组织,发生远处转移的肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA的表达量明显高于未发生转移的肺癌组织,差异有统计学意义(P<0.001)。肺癌组织中CBX7m RNA、CBX7蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。荧光素酶活性法证实mi R-199a-3p可与靶基因CBX7结合抑制CBX7的表达。肺癌细胞中mi R-199a-3p m RNA的相对表达量明显高于正常肺上皮细胞,CBX7 m RNA相对表达量明显低于正常肺上皮细胞(P<0.05)。对于肺癌细胞,mi R-199a-3p模拟物转染组的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平均明显低于阴性对照组(P<0.001)。CCK8实验证实mi R-199a-3p能够促进肺癌细胞的增殖,Tranwell实验证实mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移具有积极的促进作用。结论:mi R-199a-3p在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用,能够通过抑制CBX7基因的表达,促进肺癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

血栓调节蛋白在胚胎肺及肺癌中的表达

目的研究血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)在胚胎肺、正常肺组织及肺癌组织中的表达。方法以不同周龄的胚胎肺组织、正常成人肺组织、肺癌组织为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测TM的存在。结果8、15、18、21、24、27、29周人胎肺组织中,TM在气管纤毛柱状上皮细胞、I型和Ⅱ型肺泡上皮细胞及软骨、结缔组织均呈阴性表达,围绕肺泡上皮细胞团周围的血管内皮细胞阳性表达。正常成人支气管纤毛柱状上皮细胞、肺泡上皮细胞不表达,但在血管内皮细胞呈阳性表达。TM在鳞状上皮不典型增生的细胞膜和细胞问桥表达,在肺鳞癌表达,阳性率为97．3％(34／35),在癌细胞膜和细胞问桥阳性表达,但腺癌、小细胞癌癌细胞不表达。结论TM在胚胎肺以及成人肺仅见于血管内皮细胞,在支气管上皮、肺泡上皮不表达。与其它的血管内皮细胞标记物不同,TM的表达在肺鳞癌与腺癌表扶明显不同．右助于鉴别肺鳞癌与肺腺癌．     

埃兹蛋白的表达与非小细胞肺癌转移的关系研究

目的:探究埃兹蛋白(Ezrin)的表达与非小细胞肺癌转移的关系。方法:通过免疫组化检测Ezrin在有无转移的非小细胞肺癌组织中的表达差异,通过细胞免疫组化、western-blot、RT-PCR检测Ezrin在不同转移潜能肺癌细胞系中的表达差异,通过transwell考察Ezrin对不同转移潜能癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:Ezrin蛋白在有转移的非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于无转移的肺癌组织,在高转移潜能肺癌细胞系中的表达高于低转移潜能细胞系,受抑制时会削弱高转移潜能肺癌细胞的迁移和侵袭能力,过表达时会增强低转移潜能肺癌细胞的侵袭和迁移能力。结论:Ezrin可能在非小细胞肺癌及其转移中发挥重要作用。     

下调脂肪酸合成酶表达对膀胱癌UMUC3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响*

目的: 研究脂肪酸合成酶(FASN)表达对膀胱癌UMUC3细胞增殖、迁移、侵袭的影响,探讨其内在可能机制。方法:免疫组化法检测30例膀胱癌和15例正常膀胱组织FASN蛋白的表达;用脂质体2000分别转染FASN siRNA和无义siRNA至UMUC3细胞,筛选、鉴定siFASN和siControl稳定的细胞,siFASN组细胞设为实验组,siControl组设为对照组;采用蛋白印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法分别检测siFASN组和siControl组细胞FASN蛋白及mRNA的表达,MTT法检测siFASN组和siControl组细胞增殖情况,划痕试验、Transwell试验分别检测siFASN组和siControl组细胞迁移、侵袭能力。结果:FASN蛋白在膀胱癌组织中过表达,且与病理分期、分级密切相关(P＜0.05)。与siControl组相比,siFASN组细胞FASN mRNA及蛋白表达下调(P＜0.05),细胞增殖活力明显下降(P＜0.05),迁移能力明显下降(P＜0.05),穿膜细胞数量明显减少(P＜0.05)。结论:FASN过表达在膀胱癌发生、发展中发挥重要作用,下调FASN表达能抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,抑制FASN表达有望成为一种新的膀胱癌治疗方法。     

UHRF1基因在乳腺癌循环肿瘤细胞中的表达研究

外周血液中乳腺循环癌肿瘤细胞的生物表征与转移性乳腺癌的严重程度密切相关,本研究的目的在于结合体外细胞实验探讨UHRF1基因对乳腺癌进展的意义。多重RNA原位分析乳腺癌循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)中UHRF1的表达;MTT法检测UHRF1基因转染对正常乳腺细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹检测UHRF1基因转染对正常乳腺细胞中Bax蛋白和Bcl-2蛋白的影响;Caspase-3检测试剂盒检测正常乳腺细胞中Caspase-3活性;Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测UHRF1基因转染对正常乳腺细胞侵袭和迁移能力的影响。研究发现,UHRF1 RNA水平在乳腺癌循环肿瘤细胞中高表达;UHRF1基因增加正常乳腺细胞增殖率;UHRF1基因降低正常乳腺细胞中Caspase-3活性;UHRF1基因降低正常乳腺细胞中Bax蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达;UHRF1基因增强正常乳腺细胞侵袭和迁移能力。本研究初步说明,UHRF1可促进正常乳腺细胞增殖,抑制正常乳腺细胞凋亡,增强正常乳腺细胞侵袭和迁移能力。     

bFGF 诱导肺腺癌细胞系A549 上皮间质转化

目的:探讨上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程在肺癌侵袭转移中的作用。方法:体外培养A549细胞,以bFGF(10ng/ml)进行干预后,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;间接免疫荧光观察上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物vimentin蛋白表达的变化;采用细胞划痕试验检测bFGF对A549细胞迁移能力的影响;采用transwell小室试验检测bFGF对A549细胞侵袭能力的影响。结果:bFGF(10ng/ml)干预后,在倒置相差显微镜下观察,A549细胞形态变成了梭形,形态如同成纤维细胞。间接免疫荧光显示A549细胞E-cadherin表达随时间延长逐渐减弱,而vimentin表达逐渐增强。细胞划痕试验显示,bFGF干预后细胞迁移能力提高。Transwell小室试验显示,bFGF干预后细胞侵袭能力提高。结论:bFGF在体外诱导肺腺癌细胞系A549细胞发生上皮间质转化,上皮间质转化是肺癌侵袭转移的重要机制之一。