溴化乙锭诱导无线粒体DNA宫颈癌HeLa细胞系的构建和鉴定

[目的]构建和鉴定由溴化乙锭(EB)诱导的无线粒体DNA(mtDNA)宫颈癌ρ~0HeLa细胞系,探讨mtDNA与宫颈癌发生的关系。[方法]采用含50ng/ml溴化乙锭、100μg/ml丙酮酸钠和50μg/ml尿嘧啶核苷的高糖DMEM完全培养基中传代培养HeLa细胞。低剂量EB连续诱导60d后,采用营养缺陷鉴定、PCR和WesternBlot鉴定无mtDNA的ρ~0HeLa细胞系;采用透射电子显微镜观察ρ~0HeLa细胞内线粒体形态变化;采用CCK8法测定ρ~0HeLa细胞增殖曲线。[结果]经溴化乙锭诱导60d,可以培养出具有尿嘧啶核苷依赖性的无mtDNA宫颈癌HeLa细胞系。普通PCR和qPCR结果均显示,低剂量EB诱导60d的ρ~0HeLa细胞中mtDNA完全缺失。WesternBlot结果显示,HeLa细胞中能表达核编码的NDUFA9蛋白,也能表达线粒体编码MT-ND1蛋白。而ρ~0HeLa细胞中已无MT-ND1蛋白表达,但核编码的NDUFA9蛋白能够正常表达。透射电子显微镜观察显示,ρ~0HeLa细胞内部分出现空泡改变,线粒体嵴被破坏。CCK8细胞增殖实验结果显示,ρ~0HeLa细胞系生长速度显著低于正常HeLa细胞系,且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]无mtDNA的宫颈癌HeLa细胞系的建立,为后续研究mtDNA突变和线粒体功能在宫颈癌发生发展中的作用及机制奠定了基础。     

雌激素对肺腺癌细胞系A549中NOK表达量的影响

目的:探讨雌激素对肺腺癌细胞系A549中NOK基因表达的影响,为研究雌激素与NOK基因在非小细胞肺癌转移中的作用提供参考依据。方法:用MTT法绘制肺腺癌细胞系A549的生长曲线,确定A549的指数增长期;用浓度梯度为1×10~(-10)-1×10~(-6)mol/L的雌激素在指数增长期刺激细胞,12 h后换液,24 h后提取总RNA及总蛋白,用q-RT-PCR及Western-blot检测各组细胞中NOK表达量。结果:A549细胞系的指数增长期为第3天;雌激素刺激细胞之后,NOK表达量普遍增高,低浓度时,NOK表达量随雌激素浓度增高而增高,高浓度时,NOK表达量随雌激素浓度增高而降低,但依然高于正常水平,组间有统计学差异,其中,当浓度为1×10~(-8)mol/L时,NOK表达量最高。结论:雌激素在一定浓度范围内可以促进肺腺癌细胞系A549中NOK基因的表达。     

Smac调控Caspase-3对耐药肺腺癌细胞株生物活性及相关信号的研究

摘要 目的：探讨Smac基因调控Caspase-3表达对紫杉醇耐药肺腺癌细胞株生物活性及经典凋亡信号通路的作用机制。方法：取构建好的耐药A549细胞,将其分为A549细胞（LC）组、A549细胞+Smac-NC（SN）组、A549细胞+Smac抑制剂（SI）组、A549细胞+Smac激动剂（SM）组、A549细胞+Caspase-3-NC（CN）组、A549细胞+Caspase-3抑制剂（CI）组、A549细胞+Caspase-3激动剂（CM）组、A549细胞+Smac激动剂+Caspase-3激动剂（MM）组;Real-time PCR法检测正常肺上皮细胞及4种肺腺癌细胞系中Smac、Caspase-3表达水平,将阴性对照、Smac、Caspase-3类似物转染至紫杉醇耐药肺腺癌细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测经典凋亡信号通路表达,并分析Smac与Caspase-3的相关性。结果：肺腺癌细胞系中的Smac、Caspase-3 mRNA表达量显著低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B（P＜0.05）,其中A549的Smac、Caspase-3 mRNA值最小（P＜0.05）,因此选取其作为此次实验细胞;LC组与SN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与SN组相比,SI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与SI组相比,SM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;LC组与CN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CN组相比,CI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与CI组相比,CM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;SM组与CM组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CM组相比,MM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;Smac与Caspase-3呈现正相关（r=0.470,P=0.002）,组间具有显著差异。结论：Smac基因可显著改善紫杉醇耐药肺腺癌细胞株细胞生物活性,并激活经典凋亡信号通路,其作用机制可能与调控Caspase-3表达有关。     

吞噬细胞运动蛋白1通过NF-κB/snail信号通路促进肺腺癌细胞A549的上皮-间质转化

吞噬细胞运动蛋白1(engulfment and cell motility 1,ELMO1)在许多恶性肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用,但其在肺腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究旨在探讨ELMO1在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用,为临床预防肺腺癌的侵袭和转移提供理论和实验依据。Western印迹结果显示,ELMO1在人正常肺上皮细胞BEAS-2B中的蛋白质表达水平低,而在人肺腺癌细胞A549中表达水平高。si ELMO1/A549细胞组中ELMO1的表达水平明显降低。用白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)刺激肺腺癌细胞A549 24 h后,趋化运动实验结果显示,IL-8浓度为100 ng/m L时为最适刺激浓度,此时肺腺癌细胞A549具有最强的趋化运动能力,增高或降低IL-8的浓度时细胞的趋化运动能力均下降。Transwell侵袭实验结果显示,用IL-8刺激24 h后,si ELMO1/A549细胞相比于Scr/A549细胞组的侵袭转移能力明显减弱。Western印迹结果显示,与未用IL-8刺激或用IL-8和抑制剂BAY11-7082同时刺激的相比,si ELMO1/A549细胞较Scr/ELMO1A549细胞组E-cadherin蛋白的表达上调,Vimentin蛋白的表达下调,p-IκBα、细胞核中snail的蛋白质表达水平均降低。综上所述,ELMO1可以通过NF-κB信号通路影响snail的转核,从而促进肺腺癌细胞A549的上皮-间质转化。     

维甲酸对A549细胞增殖和凋亡及Skp2、p27^kip1蛋白表达的影响

目的探讨维甲酸对A549细胞增殖和凋亡及相关基因表达的影响。方法MTT法观察ATRA对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪、AO/EB荧光双染法检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测ATRA处理前后A549细胞Skp2、p27^kip1蛋白表达的情况。结果ATRA处理后①MTT法结果显示ATRA对A549细胞具有增殖抑制作用,在一定范围内呈时间-剂量依赖性。②AO/EB荧光双染色法观察到ATRA 25μmol/L作用A549细胞48h后,即可发现典型的凋亡形态学改变。③流式细胞仪结果出现凋亡峰,与对照组细胞相比,实验组细胞周期延长,主要表现为G0/G1期细胞比例增加,同时S期细胞比例减少。④免疫细胞化学结果显示,ATRA 25μmol/L处理细胞48h后,维甲酸处理组Skp2有明显下调,p27^kip1则明显上调。结论ATRA具有抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与下调Skp2,上调p27^kip1蛋白的表达水平有关。     

miR-190-5p靶向抑制PHLPP1的表达促进肺腺癌A549细胞增殖和转移

miR-190-5p是小分子非编码RNA，参与调控肺腺癌细胞的增殖和转移。对miR-190-5p调控肺腺癌细胞的增殖和转移的机制深入研究会帮助了解到肺腺癌的发生机制和探究潜在的药物干预靶点。本文研究了miR-190-5p对肺腺癌A549细胞的增殖和转移的影响，解释了miR-190-5p促进肺腺癌生长的机制；通过感染miR-190-5p的慢病毒表达系统，克隆了稳定过表达miR-190-5p的肺腺癌A549细胞系；通过生物信息学方法和荧光素酶报告实验确认了miR-190-5p的靶基因。结果发现，稳定过度表达的miR-190-5p能促进A549细胞的增殖和转移；确定了miR-190-5p的靶点是PH域富含亮氨酸重复的蛋白磷酸酶1(Leucine-rich repeat-rich protein phosphatase 1 in the PH domain,PHLPP1),miR-190-5p降低PHLPP1蛋白水平；稳定表达的miR-190-5p增加了A549细胞中E盒结合锌指蛋白1(E box-binding zinc finger protein1,TCF8/ZEB1)、锌指转录因子(Z...     

IL-8对肺腺癌A549细胞迁移的影响及其机制探讨

探讨IL-8对肺腺癌A549细胞迁移的影响及其可能机制。用MTT法选择了合适的IL-8使用浓度。分别用划痕试验及Transwell试验证明了IL-8可以促进肺腺癌A549细胞的迁移。Westernblot结果表明:(1)IL-8可以促进MMP-2蛋白的表达,而对MMP-9的表达无明显影响;(2)IL-8可促进JNK/SAPK磷酸化蛋白的表达;(3)抑制剂(SP600125)可以阻断IL-8对MMP-2蛋白表达的影响。划痕试验从反面验证了低表达的MMP-2可以抑制A549细胞的迁移。表明IL-8可通过JNK/SAPK信号通路调控MMP-2蛋白的表达,进一步促进肺腺癌A549细胞的迁移。     

MiR-186-5p通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化

先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化。我们首先分析了miR-186-5p在人肺癌细胞中的表达。荧光定量PCR（QRT-PCR）结果显示,与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺腺癌细胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表达量明显降低。为研究miR-186-5p在肺腺癌细胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表达载体,实现了在A549细胞中的过表达。基因转染结合Transwell侵袭结果显示,与对照质粒转染的A549细胞相比,过表达miR-186-5p的A549细胞的体外侵袭能力明显下降。Western印迹检测细胞中EMT相关标志物揭示,GV369-miR-186-5p转染的A549细胞中的上皮-钙黏着蛋白（E-cadherin）表达明显上调,而神经-钙黏着蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（vimentin）表达明显下调。同时,GV369-miR-186-5p转染引起其靶基因--垂体肿瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1）编码蛋白在A549细胞中明显降低。重要的是,过表达miR-186-5p与敲减PTTG1均可导致上皮-钙黏着蛋白表达上调,而神经-钙黏着蛋白和波形蛋白下调|而miR-186-5p和PTTG1表达载体共转染后,3种EMT相关标志物在A549的表达与对照细胞的表达无明显差异,提示过表达PTTG1可抵消miR-186-5p对EMT相关标志物表达的影响。综上所述,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制EMT的发生,进而抑制肺腺癌细胞的侵袭转移。     

激活谷氨酸促代谢型受体8促进肺腺癌A549细胞凋亡

本文旨在检测谷氨酸促代谢型受体(metabotropic glutamate receptors,mGluR)各亚型在肺腺癌A549细胞中的表达,并进一步探讨呈高表达的mGluR8和mGluR4激活对A549细胞体外生长的影响。采用real-time PCR技术检测A549细胞mGluR各亚型的m RNA表达,采用免疫组化技术检测A549细胞以及肺腺癌组织mGluR8和mGluR4蛋白表达。采用CCK-8试剂盒检测细胞生长,EdU掺入检测细胞DNA合成率,hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞的凋亡的变化,分别观察mGluR8的激动剂(S)-3,4-DCPG及mGluR4的激动剂VU0155041对A549细胞生长的影响。结果显示:A549细胞I组促代谢型受体mGluR1和mGluR5m RNA呈低水平表达,II组促代谢型受体mGluR2和mGluR3 mRNA无表达,III组促代谢型受体mGluR4、mGluR6、mGluR7和mGluR8 m RNA均有表达,其中以mGluR8的m RNA表达水平最高,mGluR4表达次之;A549细胞及部分患者肺腺癌组织上有mGluR4和mGluR8的蛋白表达。VU0155041对A549细胞的体外生长无明显影响,而(S)-3,4-DCPG呈剂量依赖性抑制A549细胞的生长,并促进其凋亡。这些结果揭示mGluR8激活具有抑制肺癌细胞生长作用,为肺癌防治的研究提供新的线索。     

稳定高表达人ERP57基因A549细胞株的建立及其对CRT表达的影响

建立稳定高表达人ERP57蛋白的A549细胞株,并观察对CRT表达的影响。采用巢式RT-PCR从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人ERP57 cDNA,构建ERP57真核表达质粒(pcDNA3.1(+)/ERP57)脂质体转染A549细胞。经G418筛选,获得高表达人ERP57蛋白的A549细胞株。通过Western blotting检测细胞中ERP57及CRT蛋白表达情况。成功获得稳定高表达ERP57蛋白的人A549细胞株,CRT表达量无明显改变。成功获得稳定高表达ERP57蛋白的人A549细胞株,证实细胞中高表达ERP57对CRT表达量无明显影响。     

基于Oncomine和TCGA数据挖掘分析MTERF2在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:探究人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在胰腺癌中的表达及临床意义。方法:检索Oncomine数据库中的MTERF2信息,对其在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达进行荟萃分析;从美国癌症基因组图谱(TCGA)中下载胰腺癌数据集MTERF2 RNA Seq V2数据及临床病理资料;利用R 2.15.3软件分析MTERF2表达量与临床病理参数的相关性及预后;利用Kaplan-Meier生存函数分析MTERF2表达量和胰腺癌患者预后的关联。结果:Oncomine数据库中共收集了586个不同类型的研究结果,其中关于MTERF2表达有统计学差异的研究有58个,MTERF2表达增高的研究有26个,表达减低的研究有32个。共有9项研究涉及MTERF2在胰腺癌组织和正常组织中的表达,包括226例临床样本,与对照组相比,MTERF2在胰腺癌中低表达(P=7.34×10-6)。TCGA胰腺癌数据集中共收集179例具有临床病理参数的病例及其对应的MTERF2 mRNA表达量。剔除病理参数不详或不完整的病例,利用R 2.15.3软件分析发现,MTERF2 mRNA表达量与胰腺癌患者T分期、M分期、癌症类型及原发部位存在显著相关(均P<0.05),而与患者的年龄、性别、N分期、AJCC病理分期、等级、组织学类型及饮酒史无显著相关(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,胰腺癌患者MTERF2的表达水平与总生存率(OS)无显著相关性(P>0.05),而与无病生存率(DFS)显著相关(P<0.001)。结论:Oncomine和TCGA数据挖掘显示,人MTERF2在胰腺癌组织中低表达,且MTERF2表达量与胰腺癌患者总生存率无显著相关性,与无病生存率有显著相关性。     

30种滇西植物β-羟高铁血红素形成抑制活性

疟疾是严重危害人类健康的寄生虫病之一,据世界卫生组织报道每年有数十万人因疟疾而死亡,我国疟疾防治工作虽然取得了长足发展,但在中国云南边境地区和中国西藏林芝地区本地疟疾病例依然存在,再加上西藏自治区和云南省地理位置特殊,与周边疟疾高发的国家接壤,边民来往十分频繁,传染源输入无法杜绝。为了发现植物来源的新型抗疟疾天然产物,该研究依次用75%乙醇和蒸馏水对30种滇西植物进行回流提取,并采用β-羟高铁血红素形成抑制实验对这些样品进行抗疟活性筛选。结果表明:在供试的30种植物中,玉叶金花、回心草以及云南甘草等19种植物粗提物具有不同程度的β-羟高铁血红素形成抑制活性,具有抗疟活性的植物种类涉及17个科、19个属。其中,虾子花、东方紫金牛、姜花水提物以及反瓣老鹳草地下部分醇提物的活性较好,其IC50值分别为796.0、951.0、1033.0、1388.9μg·mL^-1,值得进一步深入研究。虾子花、东方紫金牛的HPLC分析结果显示,其活性成分应为酚性成分。     

云南卵翅蝗属二新种(直翅目,蝗总科)

记述卵翅蝗属Caryanda St(a)tl,1878 2新种,印氏卵翅蝗Caryanda yini Mao et Ren,sp.nov.和尾齿卵翅蝗Caryanda dentata Mao et Ou,sp.nov.;为便于比较补充记述了上述2种的近似种德宏卵翅蝗Caryanda dehongensis Mao,Xu et Yang,2003的雄性外生殖器.模式标本及本文使用的其它标本均保存于大理学院生命科学与化学学院.     

中遁蛛属1新种记述（蜘蛛目：巨蟹蛛科）

记述产于我国南方的中遁蛛属1新种,滇中遁蛛Sinopoda yunnanensis sp.nov。     

中国蝗虫一新纪录属和三新种(直翅目,斑腿蝗科)

记述了中国斑腿蝗科Catantopidae 1新纪录属拟庚蝗属Genimenoides Henry,1934,1新种条纹拟庚蝗Genimenoides vittatum sp.nov.;庚蝗属Genimen Bolivar,19182新种版纳庚蝗Genimen bannanum sp.nov.和郑氏庚蝗Genimen zhengi sp.nov.。编写了拟庚蝗属已知种检索表和庚蝗属中国种检索表。模式标本保存于大理学院生命科学与化学学院。     

miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:以非小细胞肺癌A549细胞为模型,探讨miR-490-3p在肺癌发生发展过程中的作用及其调控机制。方法:通过miRBase数据库获得miR-490-3p序列,设计miR-490-3pmimics并转染A549细胞,CCK8、细胞划痕及Transwell实验分别检测miR-490-3p过表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用miRwalk在线工具预测miR-490-3p可能的调控基因,通过实时荧光定量PCR及Western印迹对候选调控基因进行筛选,最后通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-490-3p与调控基因之间的靶向关系。结果:过表达miR-490-3p可显著抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力;在预测的miR-490-3p候选靶基因中,选择与细胞增殖、迁移等表型相关的RASAL2、TGFBR1、PAPPA、HMGA2、TGFA靶基因进行实时荧光定量PCR及Western印迹筛选,结果仅TGFBR1基因在mRNA和蛋白水平的表达与miR-490-3p水平呈负相关,且双萤光素酶报告实验证实miR-490-3p可直接与TGFBR1的3'-UTR结合并抑制其表达。结论:miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1的表达抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和侵袭。     

云南卯翅蝗属一新种记述(直翅目:斑腿蝗科)

One new species of Caryanda Stal, namely C. dehongensis, sp. nov. fromsouthwestern Yunnan Province is described in the present paper. Type specimens are kept inthe Department of Life Sciences and Chemistry, Dali College, Yunnan.     

云南卵翅蝗属一新种记述 (直翅目:斑腿蝗科)

记述采自滇西南地区德宏的卵翅蝗属Caryanda 1新种:德宏卵翅蝗Caryanda dehongensis, sp. nov., 模式标本保存于大理学院生命科学与化学系。 德宏卵翅蝗Caryanda dehongensis,新种(图1~4) 本新种近似于方板卵翅蝗Caryanda quadrata Bi et Xia 和大尾片卵翅蝗C. macrofurcula Mao et Ou,但以以下特征区别于后二种:1)体较大,♂19.5~20.0 mm,♀22.5~25.5 mm;2)前胸背板沟前区长为沟后区长的2.4(♂)或2.8(♀)倍;3)雄性次末节背板后缘具三角形小尾片;4)雄性肛上板长盾形,后缘中央三角形突出;5)雌性下生殖板后缘接近平直。 正模:♂,云南德宏(24.7°N,98.2°E),2002-Ⅷ-20,李燕珍采;副模:2♂♂4♀♀,云南德宏(24.7°N,98.2°E),2002-Ⅹ-01,李燕珍、徐吉山、杨国辉采。     

头细蛾专性授粉体系中区域性共生多样化研究

头细蛾属昆虫与叶下珠科植物互利共生体系中头细蛾复合体的区域性物种组成的具体情况是互利共生多样性研究模型选取的重要参考指标。本研究通过对全世界头细蛾属昆虫与叶下珠科植物协同进化体系中非一对一互利共生关系进行系统的整理,并对小果叶下珠Phyllanthus microcarpus、黑面神Breynia fruticosa、圆果算盘子Glochidion sphaerogynum、革叶算盘子Glochidion daltonii 4种植物相关的互利共生模式在不同分布区头细蛾物种成分以及种群动态进行研究。结果显示:在广西小果叶下珠居群上共生3种头细蛾,这3种头细蛾在同年的第一个世代只出现2种,在云南和海南小果叶下珠上全年只发现2种,而在广州目前饲养的头细蛾成虫更是仅有叔头细蛾1种;革叶算盘子在云南和四川有2种共生头细蛾,而在广西和海南均仅有1种;在海南和厦门黑面神与喙果黑面神共享2种头细蛾,而在广西和广东黑面神上仅发现1种头细蛾;圆果算盘子是目前发现共生头细蛾物种最复杂的寄主植物,在海南记载有4种头细蛾,但在云南圆果算盘子上仅发现优头细蛾1种。4种寄主植物相关的互利共生体系中头细蛾物种组成在不同的分布地均发生了不同程度的区域性共生多样化,甚至在同一地区的不同世代之间也存在着头细蛾物种数量的变化,这对于深入理解具有互利共生关系的物种间协同进化多样性形成机制具有重要的意义。