维甲酸对肝癌细胞HepG2糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D表达及细胞生物学特性的影响

应用MTT、流式细胞仪、免疫印迹法检测全反式维甲酸(ATRA)单独或联合糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(GPI-PLD)特异性抑制剂1,10-二氮杂菲对肝癌细胞HepG2生物学特性的改变.ATRA使肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达及酶活性上调,并呈现剂量和时间依赖性.ATRA可抑制肝癌细胞HepG2增殖,使肝癌细胞Caspase-3表达水平显著增加,Bcl-2表达水平下调,促进肝癌细胞凋亡(P<0.05).ATRA联合1,10-二氮杂菲诱导组细胞,Bcl-2、细胞增殖活性较ATRA单独诱导组显著增强,Caspase-3、凋亡率显著下降.维甲酸可促进肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达上调,高活性的GPI-PLD有助于维甲酸抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡.     

槲皮素对结肠癌细胞生长的影响

通过MTT试验观察槲皮素对结肠癌细胞系RKO生长的影响;通过流式细胞仪技术观察槲皮素对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RT-PCR和western印迹技术,确定槲皮素对p21、p27和p53表达的影响.MTT法显示槲皮素加药组生长抑制作用明显,且具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,经5μmol/L槲皮素作用后细胞周期明显阻滞在G0/G1期;5、10、20μmol/L3个剂量组的细胞凋亡率分别为23.4%、24.2%、47.9%,而对照组为13.2%;p21和p27的mRNA及蛋白质表达水平上调,促凋亡蛋白p53表达水平上调.因此,槲皮素对RKO生长有明显的抑制作用,槲皮素可能通过上调p21和p27表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期,可能通过上调促凋亡蛋白p53表达诱导RKO细胞发生凋亡.     

丙戊酸钠抑制A549细胞生长

目的研究丙戊酸钠对肺癌A549细胞增殖和细胞周期的影响。方法MTT检测生长抑制,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blot检测p21WAF1/CIP1蛋白表达。结果丙戊酸钠以剂量依赖性方式抑制A549细胞生长;丙戊酸钠上调G0/G1期比例,下调S期和G2/M期,不影响细胞凋亡;丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1蛋白表达。结论丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1表达,使细胞阻滞于G0/G1期,抑制A549细胞生长。     

维甲酸对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响

目的:研究维甲酸对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响,以探索其对成骨肉瘤细胞的生物学效应.方法:以1μmol/L维甲酸处理人成骨肉瘤MG-63细胞,生长曲线测定,流式细胞仪分析、光镜观察和免疫细胞化学检测等研究维甲酸对MG-63细胞的生长曲线、细胞周期和相关癌基因、抑癌基因表达的影响,并对其作用机理进行初步分析.结果:维甲酸处理7天后,MG-63细胞生长抑制率达到42.2%,G0/G1期比例达到61.8%,细胞形态铺展,排列趋于规则,癌基因c-myc、c-fos的表达降低.而抑癌基因Rb、p27表达上调.结论:1μmol/L维甲酸可以有效抑制细胞的增殖活动,改变细胞恶性形态特征,下调癌基因c-myc、c-fos和上调抑癌基因Rb、p27的表达,从而对人成骨肉瘤细胞分化具有诱导作用.     

ATRA促进DDP对肺腺癌细胞A549凋亡作用机制的研究

探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对顺铂(cisplatin,DDP)抑制肺腺癌细胞株(A549)增殖的影响及其机制。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)以及流式细胞术检测DDP、ATRA处理前后A549凋亡率及维甲酸受体-β(retinoic acid receptorβ,RARβ)mRNA、凋亡抑制蛋白Survivin mRNA的转录情况。结果表明DDP对A549有抑制作用,且呈剂量依赖性。ATRA小于0.4 mmol/L抑制作用不明显,ATRA达到0.4 mmol/L及更高浓度时,抑制作用显著,且呈剂量依赖性。qRT-PCR结果显示DDP组RARβmRNA及Survivin mRNA均降低。ATRA组RARβmRNA增加,而Survivin mRNA降低;联合用药组较空白组RARβmRNA降低,较DDP组RARβmRNA提高,而Survivin mRNA均降低。流式结果显示联合用药组较单独用药组凋亡率明显增高。ATRA上调RARβ并下调Survivin,提高A549化疗敏感性,强化DDP化疗作用。     

曲古霉素A抑制肺癌细胞增殖的分子机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖抑制作用及机制.方法:以不同剂量TSA(0.1μM,0.5pM和1μM)处理A549细胞.MTT法检测细胞增殖情况,碘化丙啶(PI)染色结合流式细胞仪检测细胞周期,Westem blot法检测P21蛋白表达,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位和细胞凋亡.结果:TSA剂量依赖性抑制肺癌A549细胞增殖,表现为细胞周期阻滞于G2/M期,同时P21蛋白表达增高;此外,TSA还可以剂量依赖性的促进A549细胞凋亡,伴有线粒体膜电位下降.结论:TSA促进NSCLCA549细胞周期阻滞和凋亡,从而抑制其增殖.     

葛根素对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用

目的：观察葛根素对人非小细胞肺癌A549细胞生长的抑制作用及其机制。方法：体外培养人非小细胞肺癌细胞（A549）,不同浓度（60 μg/ml,120 μg/ml,240 μg/ml）葛根素处理24 h后;采用CCK-8法观察葛根素对细胞的增值抑制作用;吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）双染法及AnnexinⅤ-PI双染流式细胞术检测药物作用前后A549细胞的形态学变化及凋亡状况;Western blot法检测Apelin/APJ蛋白水平的变化。结果：CCK-8法检测结果说明葛根素能抑制A549细胞的增值,具有浓度和时间依赖关系;流式细胞术进一步证实葛根素具有诱导细胞凋亡的作用,与A549细胞组比较,葛根素各处理组Apelin/APJ蛋白水平均有不同程度下调。结论：葛根素可能通过调节Apelin/APJ蛋白的表达诱导A549细胞凋亡。     

澳洲茄边碱通过Caspase3蛋白诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡作用

运用中药龙葵提取物澳洲茄边碱处理人肺腺癌A549细胞,研究其对A549细胞的抑制及凋亡作用,探讨澳洲茄边碱对肺腺癌的作用机制。通过细胞增殖抑制实验检测不同浓度澳洲茄边碱对A549细胞增殖的影响,采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡蛋白Caspase3的表达水平,采用流式细胞术测定处理后A549细胞的凋亡水平及细胞周期变化。结果显示,不同浓度澳洲茄边碱均能抑制A549的增殖,呈浓度效应;用不同浓度澳洲茄边碱处理A549细胞24h后,Western blot结果显示,随药物浓度增大,凋亡蛋白Caspase3水解程度增高,对A549凋亡作用明显增强;流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,20μmol·L-1澳洲茄边碱处理A549细胞后,细胞发生明显凋亡,其中早期凋亡细胞比例为25.35%,晚期凋亡细胞比例为11.47%;流式细胞术检测细胞周期的结果显示,20μmol·L-1澳洲茄边碱处理A549细胞后,细胞周期阻滞于G2/M期。本研究结果表明,澳洲茄边碱通过激活细胞凋亡通路中的Caspase3蛋白触发细胞凋亡,同时将A549细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,抑制人肺腺癌细胞A549的生长。     

人参皂苷Rh2对肺癌A549细胞miR-16和Bcl-2表达与生长的影响研究

目的探讨人参皂苷Rh2(G-Rh2)诱导人肺癌细胞A549凋亡作用及机制研究。方法采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的G-Rh2处理A549细胞,MTT法于不同时间点测定G-Rh2对A549的生长抑制作用;倒置显微镜观察G-Rh2对A549细胞作用后的形态改变;Annexin-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Real-time PCR和Western-blot法分别检测G-Rh2对A549细胞中miR-16和Bcl-2蛋白表达的影响。结果与阴性对照组相比,不同浓度G-Rh2能够抑制A549肺癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性;GRh2作用后,A549细胞凋亡率明显增加,miR-16的表达显著增加,而Bcl-2蛋白表达显著降低。结论G-Rh2能够显著抑制A549肺癌细胞增殖并通过上调miRNA-16,下调Bcl-2的表达发挥治疗肺癌的作用。     

Nucleostemin siRNA对肝癌细胞HepG2增殖的影响

Nucleostemin(NS)作为核仁蛋白,在神经干细胞、胚胎干细胞以及某些肿瘤细胞中均高表达,在多种肿瘤细胞增殖和凋亡调控中具有重要作用.本文通过瞬时转染NS siRNA降低NS的表达,以探究NS对HepG2细胞增殖和凋亡的影响.结果显示,下调NS表达使HepG2细胞增殖加快,G₁期细胞减少,S期及G₂/M期细胞增加,凋亡减少. 激光共聚焦实验表明,NS与S期激酶相关蛋白2 (S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在HepG2细胞中存在共定位现象; Co-IP实验证明,NS与Skp2能相互作用|NS下调后,Skp2出核仁的数量增加,p27和p53表达降低. 总之,下调NS可促进HepG2细胞中Skp2从核仁逸出,p27降解增强,同时p53表达下降,或由此促进HepG2细胞增殖,抑制其凋亡.     

肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR与5-氟尿嘧啶联合应用对A549细胞增殖的影响

目的:观察重组蛋白肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR与化疗药物5-氟尿嘧啶联合使用在体外对人非小细胞肺癌细胞株A549的作用,为IFN-α2a-NGR的临床实验设计提供实验依据。方法:不同浓度的肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR、5-氟尿嘧啶单独及联合作用于细胞株A549,通过MTT法检测单药及联合用药对细胞增殖的影响,经AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒染色、流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜观察药物作用的细胞形态。结果:IFN-α2a-NGR与5-氟尿嘧啶联合作用于A549细胞株时,其细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均较单独作用时高,具有统计学显著性差异(P<0.05);荧光显微镜观察可见药物作用后细胞形态改变。结论:肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR与5-氟尿嘧啶联合使用具有协同抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

RGD肽对肺癌A549 细胞增殖侵袭能力的影响及其机制研究

目的:研究RGD肽对肺癌A549细胞增殖凋亡及侵袭迁移的影响,并探讨其作用机制。方法:不同浓度RGD肽处理肺癌A549细胞后,MTT检测肺癌细胞的增殖能力,流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡及周期分布,Transwell检测其迁移及侵袭能力的变化,Western blot检测RGD肽对肺癌A549细胞MMP2、MMP9的表达水平影响。结果:当RGD肽浓度增加至50 mg/L时,肺癌A549细胞增殖明显受到抑制,且这种抑制作用呈剂量依赖关系;RGD肽组A549细胞G0/G1期细胞比例增高,细胞凋亡率由(6.1±0.1)%增至(15.2±0.5)%;在迁移和侵袭试验中,RGD肽组A549细胞的穿膜细胞数分别由123±10和43±10降至45±5和18±5;RGD肽组A549细胞MMP2、MMP9表达水平显著降低。结论:RGD肽对肺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用,并促进其凋亡,可能与RGD肽改变其周期分布有关,RGD肽可明显抑制A549细胞的迁移及侵袭,可能与其下调MMP2、MMP9的表达相关。     

金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的:研究金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长及凋亡的影响及其可能的机制。方法:取对数生长的肺癌A549细胞,分为对照组、紫杉醇组、金松双黄酮组、金松双黄酮联合紫杉醇组。采用MTT法研究金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测A549细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞的生长抑制率高达64.81%,显著强于单纯紫杉醇作用组(P0.05),且两药合用可显著升高肺癌A549细胞的凋亡率(P0.01),并抑制凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白的表达,上调Bax的表达。结论:金松双黄酮联合紫杉醇能够增强紫杉醇对肺癌A549细胞生长的抑制作用,促进细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡基因Bc1-2、Bax的蛋白表达有关。     

黄芩苷干预甲型H1N1流感病毒感染诱导的A549细胞周期分布及凋亡

以甲型H1N1流感病毒作为刺激因素,在人肺腺癌A549细胞培养内采用MTT比色法和细胞病变(CPE)法观察黄芩苷不同作用时间的抗病毒效率;以碘化丙啶(Propidium iodide,PI)单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数和对细胞增殖的影响,以Hoechst33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,并采用免疫荧光实验测定膜受体通路Caspase 8和线粒体通路Caspase 9及作为细胞凋亡标志的Caspase 3的活性。结果显示:流感病毒感染36h后宿主细胞周期阻滞于S期(P<0.05),并在G0期细胞峰前出现一个亚二倍体细胞峰(凋亡细胞峰)。A549细胞中Caspase 8/3活性明显升高,但标记Caspase 9活性的荧光亮度增强不明显。黄芩苷对甲型流感病毒感染诱导的细胞损伤有较好的保护作用,最大剂量的黄芩苷100μg/mL无毒,可抑制病毒细胞病变的产生,50~100μg/mL治疗组可明显调节流感病毒感染诱导的细胞周期分布(P<0.05),细胞凋亡现象明显减少,100μg/mL黄芩苷治疗组Caspase 8/3活性显著降低,接近正常对照组细胞水平,有剂量依赖性。实验说明:黄芩苷可拮抗甲型流感病毒H1N1细胞病变,调控细胞周期分布,并通过抑制Caspase 8的激活,进一步抑制Caspase 3活性,从而发挥抗病毒作用。     

全反式维甲酸联合替莫唑胺对胶质瘤U251细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）联合替莫唑胺（TMZ）对胶质瘤细胞株U251增殖及凋亡的影响。方法：体外培养胶质瘤细胞株U251,分为ATRA组、TMZ组、ATRA＋TMZ组和空白对照4组,应用MTT法测定U251细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,westernblot法检测细胞维甲酸受体β（RARβ）蛋白和凋亡相关蛋白Caspase．3蛋白的表达情况。结果：对照组、ATRA组、TMZ组及ATRA＋TMZ组的细胞生长抑制率分别为（1．72±0．12）％、（9．87±0．87）％、（23．87＋1．32）％及（35．74±1．44）％,ATRA＋TMZ组的细胞生长抑制率显著高于单独应用TMZ（P〈0．01）。对照组、ATRA组、TMZ组及ATRA＋TMZ组的细胞凋亡率分别为（1．32±0．11）％、（4．16±0．35）％、（8．44±0149）％、（15．27±1．03）％,ATRA＋TMZ组的凋亡率显著高于单独应用TMZ有更高的凋亡率（P〈0．01）。对照组、ATRA组、TMZ组及ATRA＋TMZ组RARp蛋白相对表达量分别0．452±0．054、0．837±0．068、0．195±0．021、0．376±0．039,ATRA＋TMZ组RARβ蛋白相对表达量显著高于TMZ组（P〈0．01）。ATRA＋TMZ组Caspase．的3蛋白表达相对水平为（0．832±0．059）,明显高于ATRA组（0．334±0．041）及TMZ组（0．521＋0．032）,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论：全反式维甲酸联合替莫唑胺能更有效抑制U251细胞的增殖,增加其凋亡率,这可能与其增加RARβ和Caspase-3蛋白的表达抑制U251细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

重组人凋亡素2 配体对放射线诱导肺腺癌A549 细胞凋亡作用的研究

目的:研究凋亡素2配体(Apo-2 ligand,Apo-2L),或称肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing lig-and,TRAIL)在体外对人肺腺癌A549细胞系的放射增敏作用的研究。方法:MTT法检测Apo-2L单药或与放射线联合对腺癌A549细胞的抑制率,将细胞分为4组,对照组、Apo-2L组、Apo-2L+放射照射组、单纯照射组,200ng/ml、286 ng/ml的Apo-2L作用24小时后给予放射照射,照射剂量分别为:(1Gy、1.4 Gy、1.8Gy、2 Gy、3 Gy),然后进行流式细胞仪分析照射后24h各组细胞凋亡率变化。结果:MTT结果显示,腺癌A549细胞的抑制率与Apo-2L的浓度成正相关,凋亡素2配体作用24h后IC50为286ng/ml.流式细胞仪分析显示286ng/ml的Apo-2L处理24h后,细胞凋亡率从(6.68)%上升至(50)%,照射后24h Apo-2L+照射组凋亡率明显升高,为72.790%,对照组0.1185%,Apo-2L组50%,单纯照射组51.5067%。结论:Apo-2L在体外对腺癌A549细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,并且Apo-2L联合放射线可以明显提高腺癌A549细胞的凋亡率。     

穿膜素TAT介导的KDR-siRNA慢病毒载体的构建及其靶向肺癌A549细胞的抗肿瘤作用

为了构建TAT与KDR-siRNA慢病毒载体,观察其对肺癌细胞株 A549的体外靶向抗肿瘤作用,利用重组技术构建TAT-KDR siRNA慢病毒载体并转染人肺癌细胞株 A549。实时荧光定量PCR、Western blot检测KDR基因水平变化;流式细胞仪、MTT 法、集落形成试验检测其对A549细胞株细胞凋亡、细胞增殖和克隆形成的影响;细胞黏附实验评价其肿瘤靶向性。其抗癌作用主要表现为可有效地抑制A549细胞KDR基因表达、细胞增殖和克隆形成,促进细胞凋亡,并具有肿瘤靶向性作用。因而认为,TAT与KDR靶向siRNA慢病毒载体具有显著的肿瘤靶向性和抗肿瘤活性。     

牛至油体外抗肿瘤活性研究

目的观察牛至油对肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法采用MTT法检测不同浓度的牛至油对体外培养的多种肿瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。结果不同浓度牛至油作用后,人肝癌细胞系HepG2、人子宫颈癌细胞系JTC-26和肺癌细胞系A549出现增殖阻滞。MTT法确定牛至油对肝癌HepG2的IC50为118μg/ml;人子宫颈癌JTC-26的IC50为118μg/ml;肺癌A549的IC50为59μg/ml。结论牛至油具有体外抗肿瘤活性。     

Involvement of TRPC Channels in Lung Cancer Cell Differentiation and the Correlation Analysis in Human Non-Small Cell Lung Cancer

The canonical transient receptor potential (TRPC) channels are Ca²⁺-permeable cationic channels controlling the Ca²⁺ influx evoked by G protein-coupled receptor activation and/or by Ca²⁺ store depletion. Here we investigate the involvement of TRPCs in the cell differentiation of lung cancer. The expression of TRPCs and the correlation to cancer differentiation grade in non-small cell lung cancer (NSCLC) were analyzed by real-time PCR and immunostaining using tissue microarrays from 28 patient lung cancer samples. The association of TRPCs with cell differentiation was also investigated in the lung cancer cell line A549 by PCR and Western blotting. The channel activity was monitored by Ca²⁺ imaging and patch recording after treatment with all-trans-retinoic acid (ATRA). The expression of TRPC1, 3, 4 and 6 was correlated to the differentiation grade of NSCLC in patients, but there was no correlation to age, sex, smoking history and lung cancer cell type. ATRA upregulated TRPC3, TRPC4 and TRPC6 expression and enhanced Ca²⁺ influx in A549 cells, however, ATRA showed no direct effect on TRPC channels. Inhibition of TRPC channels by pore-blocking antibodies decreased the cell mitosis, which was counteracted by chronic treatment with ATRA. Blockade of TRPC channels inhibited A549 cell proliferation, while overexpression of TRPCs increased the proliferation. We conclude that TRPC expression correlates to lung cancer differentiation. TRPCs mediate the pharmacological effect of ATRA and play important roles in regulating lung cancer cell differentiation and proliferation, which gives a new understanding of lung cancer biology and potential anti-cancer therapy.