无血清培养中小鼠神经母细胞瘤细胞老化的研究

本文报道应用倒置相差显微术和显微荧光光度术观察无血清培养条件对ＮＢＡ２细胞突起数目和细胞内脂褐素荧光值的影响，以建立神经细胞老化实验研究模型。结果发现：存在着随无血清培养天数的增加，细胞内脂褐素荧光值累积性增加（Ｐ＜０．０１）和培养５天后细胞突起数目渐次性减少（Ｐ＜０．０１）的趋势。结果表明：这一趋势与哺乳类动物和人类老化研究中的神经细胞内脂褐素含量随增龄而增加及神经细胞突起在衰老过程逐渐少消失的     

脑啡肽对小鼠神经母细胞瘤细胞脂褐素影响的实验研究

本文应用小鼠神经母细胞瘤细胞Ａ２（ＮＢ－Ａ２）无血清培养建立的神经细胞老化实验研究模型,以显微荧光分光光度术测定单个细胞内脂褐素荧光值作为细胞老化指标,观察了脑啡肽（ＬＥ）对ＮＢＡ２细胞内脂褐素荧光值的影响。结果表明ＬＥ可显著降低细胞内的脂褐素荧光值（Ｐ〈０．０１）。提示ＬＥ可延缓ＮＢＡ２细胞的老化进程。     

无血清无饲养层条件下培养小鼠胚胎干细胞

目的研究在无血清无饲养层条件下小鼠胚胎干细胞的培养方法,为最终建立无血清无饲养层培养系统打下基础。方法比较小鼠胚胎干细胞ES-S8株在无血清培养体系和有血清培养体系中的生长情况,分析ES-S8细胞克隆形成效率,测定其生长速度;然后在撤去血清和饲养层的条件下培养ES-S8细胞,进行AKP染色和表面标记物SSEA-1免疫荧光检测。结果ES-S8细胞在无血清培养条件下细胞生长速度减缓,克隆形成率降低,但AKP染色、SSEA-1免疫荧光均显阳性;在无血清无饲养层条件下ES-S8细胞培养仍能形成克隆,且AKP染色、SSEA-1免疫荧光均显阳性。结论研究表明ES-S8细胞能够在无血清无饲养层的培养条件下生长,保持其良好的未分化特性。     

无血清培养HAb18细胞的生长代谢与抗体分泌特征

通过逐步降低血清浓度,HPLC氨基酸分析及正交实验筛选研制了HAb18杂交瘤细胞的无血清培养基。对在该无血清培养条件下的细胞进行了计数,对培养上清液进行了葡萄糖、谷氨酰胺、乳酸和氨浓度以及抗体分泌量和抗原结合活性测定,并对动力学参数进行了分析,结果表明HAb18细胞在无血清培养条件下达到的最大细胞密度和抗体分泌量分别为0.91×106个/ml和43.8mg/L;细胞比生长速率较在有血清条件下稍有下降,而抗体合成速率提高(0.0207/h比0.0218/h,0.387pg/cell/h比0.218pg/cell/h,P<0.01)。无血清培养时葡萄糖和谷氨酰胺消耗无明显变化,但乳酸浓度降低,氨浓度升高;此外,分泌抗体的抗原结合活性增加。研究无血清培养条件下的HAb18细胞生长代谢和抗体分泌特征可为建立HAb18无血清悬浮流加培养工艺打下基础。     

温度、血清以及肝素等因素对TAT穿膜效应的影响

目的:探讨在不同实验条件下,二甲基亚砜(DMSO)预处理培养细胞对TAT穿膜效率的影响.方法:体外培养Caski、4549、HepG2及COS7细胞株在不同实验条件下与荧光标记多肽TAT或无意义肽NCO共孵育.荧光显微镜观察TAT-FTTC的穿膜效率及其胞内定位;荧光酶标仪定量测定细胞内荧光强度.结果:10%DMSO预处理37℃和4℃下各细胞株后,TAT-FITC均可高效穿膜入胞,且胞浆、胞核巾均匀分布,胞核浓度高于胞浆;相同条件下未见NCO-FITC穿膜进入细胞.无血清组(Caski:1881±66、HepG2:2112±74、A549:2126±59)血清组较有血清组(Caski:1312±90、HepG2:1308±11、A549:1370±22)细胞内荧光强度大,且有显著差异(P<0.05).抑制剂Heparin存在时,Caski细胞荧光强度则明显减弱(加肝素组:1208±29,加肝素组:895±56;P<0.05).结论:10%DMSO预处理不同培养细胞在37℃和4℃条件下均可提高TAT的穿膜效率,血清和Heparin可减弱DMSO的穿膜增强效应.     

脂质体介导的C2C12肌细胞瞬时转基因技术

C2C12细胞是常用于研究的肌细胞,广泛适用于肌肉再生、肌肉疾病、糖脂代谢以及药物研究实验。由于肌细胞结构较特殊,基因转染不容易成功。本文介绍脂质体介导的肌细胞瞬时转基因技术,国内外未见详细报道。我们实验室经优化细胞密度、质粒DNA纯度以及转染最佳时间等条件,并改变底物和稀释液的成份,将细胞分成几组:1底物Opti-MEM+稀释物DMEM组;2底物Opti-MEM+稀释物Opti-MEM组;3底物无血清DMEM+稀释物无血清DMEM组;4底物无血清DMEM+稀释物Opti-MEM组;5底物含10%FBS的DMEM+稀释物DMEM组进行转染。24 h后荧光倒置显微镜观察各组荧光表达情况,48 h Western Blot检测GFP蛋白表达。结果 C2C12细胞瞬时转染的细胞数量和荧光强度达到理想效果。其中第3组GFP蛋白表达水平明显高于第5组(p0.05)。这是一种方便有效的脂质体介导C2C12细胞转基因技术。     

免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓源运动神经元的方法探讨

目的探讨应用免疫磁珠法分选脊髓源性运动神经元的实验条件,为研究运动神经元的特性,培养和移植创造有利条件。方法取孕16天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织,制备成单细胞悬液,应用免疫磁珠分选系统,在无血清限定性培养基条件下获得相对纯化的运动神经元。应用运动神经元特异的胆碱乙酰转移酶（ChAT）抗体对培养细胞进行免疫细胞化学鉴定。结果分离纯化的细胞在体外可以存活,经免疫荧光检测,ChAT阳性率可达95%。结论本实验提供了一种有效的纯化脊髓运动神经元的方法,纯化所得的运动神经元可用于进一步的运动神经元的后续实验研究。     

动物细胞无血清培基及其应用

动物细胞无血清培养是当今生物科学领域中的重要研究课题之一。无血清培基可以是完全采用已知分子结构和构型的成分组成的低蛋白或无蛋白培基,因而它不仅为研究和阐明细胞生长、增殖和分化的调节机制提供有力的工具,而且也为现代生物技术,尤其是细胞工程的应用准备了更好的条件。近几年来,有关动物细胞无血清培基的研究和应用的发展很快,本文就其现状作一概述。     

动物细胞无血清培养基及其应用

动物细胞无血清培养基及其应用陈昭烈,肖成祖（军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１）动物细胞无血清培养是当今生物科学领域中的重要研究课题之一。由于无血清培基可以是完全采用已知分子结构和构型组分的低蛋白或无蛋白培基。因而它不仅为研究和阐明细胞生长、增殖和分化的调节机制提供了有力的工具,而且为现代生物技术,尤其是细胞工程的应用准备了更好的条件。     

香菇中麦角钙化甾醇含量的测定及其在人体内的传输机制

在阳光照射和自然阴干两种干燥方式下,测定了香菇中麦角钙化甾醇的含量。在不同实验条件下,测定了麦角甾醇转化为麦角钙化甾醇的转化率。在模拟生理条件下,通过荧光光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱、位点竞争实验、紫外可见吸收光谱和分子对接方法对麦角钙化甾醇与人血清白蛋白相互作用过程中的机制和构象变化进行了系统研究,从而揭示了麦角钙化甾醇在体内的传输机制。结果表明,阳光照射能够提高香菇中麦角钙化甾醇含量。麦角甾醇在溶液状态下经过紫外光照射4h,麦角甾醇转化为麦角钙化甾醇的转化率为21%。荧光光谱表明麦角钙化甾醇通过静态猝灭机制猝灭人血清白蛋白的内源荧光。在288K时有利于麦角钙化甾醇与人血清白蛋白的结合,在较高温度下麦角钙化甾醇不能与人血清白蛋白结合。热力学参数分析和分子对接结果表明,疏水作用、氢键和范德华力是结合过程中的主要作用力。位点竞争实验和同步荧光光谱表明位点I是麦角钙化甾醇和人血清白蛋白相互作用的主要结合位点。结合过程中能够发生能量转移,结合距离是3.46nm。结合过程轻微地改变人血清白蛋白的结构和微环境。     

不同发育时期的鸡胚色素上皮对体外视网膜细胞生长的作用(简报)

眼正常发育中,色素上皮层和视刚膜之间在结构上存在着紧密的接触,功能上也相互依赖,但色素上皮的作用不甚清楚。很多脊椎动物的视网膜如果失去了与色素上皮层的紧密     

生长期-定时一年生植物群体光合产物的最优分配策略的理论分析

本工作建立了一个一年生植物群体的生长模型,利用以梯度法为基础的离散系统最优控制的计算方法,计算并分析了一年生植物群体光合产物的营养器官间分配的最优策略,以及这一策略对植物群体最大生长速率和消光系数的依赖关系。用Pontryagin最小值原理和奇异最优控制的条件证明了光合产物的最优分配方法是:在营养和生殖生长并行阶段,群体叶片的死亡量恰好等于新形成量,植物干重随时间线性增加。     

新生小鼠兴奋性氨基酸转运蛋白家族成员cDNA的克隆和分析

兴奋性氨基酸转运蛋白家族包含几种结构相似的膜蛋白,它们在终止谷氨酸的突触传递作用,维持神经系统正常的递质水平起重要作用.为了在同一物种中研究这些蛋白和基因的功能,本工作对新生小鼠脑的兴奋性氨基酸转运蛋白家族成员进行了克隆,获得了3个谷氨酸转运蛋白亚型(mGLAST-1,mGLT-1,mEAAC1)和一个中性氨基酸转运蛋白(mASCT1)的cDNA,其中在小鼠中mASCT1序列为首次发表.序列分析表明,mASCT1cDNA的长度为3787bp,编码一个532个氨基酸箴基的蛋白,和人的ASCT1蛋白序列有89.3%的同源性,用非洲爪蟾卵母细胞表达系统证实了它具有转运丝氨酸的活性.同时,我们的研究表明,兴奋性氨基酸转运蛋白mRNA的5'UTR和3'UTR普遍存在组成和长度的不均一性,这种现象可能提示该家族成员的基因表达具有转录后调控机制.     

小鼠膀胱上皮的中间层细胞中存在Uroplakins

本文运用超薄切片、冰冻蚀刻及免疫胶体金标记等多种电镜技术并结合免疫组化、免疫荧光染色技术,直观地显示出小鼠膀胱上皮的中间层细胞存在Uroplakins,并在梭形泡膜上形成了与表层细胞类似的AUM结构,而且梭形泡的AUM结构也结合在中间纤维上。蛋白质免疫印迹反应进一步证实中间层细胞含有与表层细胞相同的Uroplakin Ⅰ和UroplakinⅢ等AUM蛋白的主要成份,从而为AUM的发生及其与细胞分化关系的研究提供了重要的实验证据。     

糖尿病大鼠模型额叶神经元内生长抑素表达的原位杂交研究

研究生长抑素神经元在糖尿病大鼠模型额叶表达的变化。SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立速发型糖尿病大鼠模型,4周时运用原位杂交组织化学方法检测大鼠额叶生长抑素mRNA阳性神经元的变化,并与正常大鼠比较。糖尿病大鼠成模4周时大脑额叶生长抑素mRNA阳性神经元显著减少,其单位面积内的阳性细胞数、阳性细胞的光密度及阳性细胞平均细胞面积均比正常大鼠相同区域减少,两者差异有显著性意义(P<0.01)。本研究表明糖尿病大鼠额叶生长抑素神经元mRNA表达的减少,可能是糖尿病患者发生痴呆等糖尿慢性脑病的相关因素之一。     

COMPARATIVE POPULATION DYNAMICS OF FUR SEALS

The population sizes, trends, exploitation, and life history parameters for the ten fur seal species and subspecies are summarized. The largest population is that of Arctocephalus pusillus pusillus with approximately two million seals, and the smallest is A. townsendi with approximately 7,000 individuals. Most populations are legally protected, although controlled harvesting may occur. None of the fur seal populations is currently known to be decreasing. Data are presented for parameters related to the survival of pups, juveniles, adults, and territorial males, and to reproduction, including the age of attainment of territorial status, aggregation sizes, age of first parturition, pregnancy rates, sex ratios of young animals, and information on the birth seasons of the different species. Since pinnipeds are often of concern in fisheries management, their daily consumption rates are of importance, and consequently data on body masses are summarized and the paucity of data on consumption rates as a function of body mass noted. A simplified age-structured model is developed, and the results of this model are compared with results from more detailed models based on two published life tables for Callorhinus ursinus. This comparison shows that the use of the simplified age-structured model is justified to explore changes in population growth rate. However, the simplified model does show exaggerated age structure effects compared to the more detailed models. This model is used to compare the population dynamics of those species for which sufficient data are available. Areas in which limited, or no, data are available for the different fur seal species are highlighted.     

安祖花人工种子的研制

用安祖花叶片作为外植体,诱导产生致密愈伤组织,将安祖花致密愈伤组织切成规则小块,用(MS+0.1 mg/L NAA)培养基预培养半个月,诱导根的发生。再用继代培养基包埋培养物进行固定化培养,经1月后筛选具不定根的培养物,采用再包埋方法制成人工种子。当这种人工种子播于有菌土壤时可得到63%的成活率(转株率)。我们认为致密愈伤组织中不定芽和愈伤组织间发生的是生物学接触,不定芽的初始生长由愈伤组织通过生物学途径提供营养,从而大大提高了人工种子的活力。用含不定芽的致密愈伤组织作为培养物,对于人工种子的机械化生产和田间应用具有参考价值。     

钙调素对细胞周期的调节

RC3细胞是一种用真核表达载体1~(CaM)转染NIH 3T3细胞建成的可调钙凋素(Calmodulin,CaM)高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松(Dexamethasome,DXM)作用下,RC3细胞可高表达CaM。CaM的过表达使G_1期细胞减少,S期细胞增加;CaM拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)则使G_1期细胞增加,S期细胞减少。高表达CaM使细胞分裂指数提高,G_2期细胞减少,有丝分裂前期细胞增加,M中期细胞比例下降。而TFP处理则使分裂指数下降,G_2期细胞增加,M前期细胞减少,M中期细胞增加。实验结果表明CaM在G_1/S、G_2/M和M中期/M后期3个位点上对细胞周期进行调控;通过加速G_1至S期,G_2至M期和M中期至M后期的进程,使细胞倍增时间缩短,促进细胞增殖。本工作表明,RC3细胞作为CaM表达可调细胞模型,是研究细胞周期调控的有力工具。