低频脉冲磁场对大鼠心肌微血管内皮细胞增殖和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨低频磁场对大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)增殖和缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法:设不同照射强度为(08.mT组,1.4mT组,1.8mT组)为照射组.不加磁场干预为对照组.照射条件;磁场频率为15Hz,强度分别为0.8mT、1.4mT、1.8mT,照射时间为4 h/d,连续照射7d.应用MTT法检测CMECs增殖,采用Western blot检测Cx43蛋白表达.结果:生长曲线结果显示,磁场能够促进CMECs增殖.1.4mT组照射第2d后CMECs生长速度加快,在第3d开始进入对数生长期,在第4d生长最为旺盛之后进入生长平台期,第2～7d与对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而且细胞生长曲线明显前移并且峰值增高.1.4mT组、1.8mT组CMECs增殖与对照组比较显著升高(P＞0.05).磁场照射后Cx43表达明显上调,1.4mT组、1.8mT组Cx43蛋白的表达均明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),0.8mT组cx43蛋白的表达与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).而Cx43蛋白的表达1.4 mT组和1.8mT组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:低频脉冲磁场能促进CMECs增殖与增强细胞活力,上调Cx43表达,其在分子水平上的可能作用机制表现为对Cx43的有效调控.     

极低频磁场对人肝癌细胞生长、代谢及细胞周期的影响

目的研究一定参数的极低频磁场对人肝癌细胞(SK-HEP-1)在诸多方面的影响。方法在整个SK-HEP-1细胞的培养周期中用50Hz,20mT的极低频磁场对其进行作用,并检测作用后细胞的增殖活性、生长动力学、代谢以及细胞周期的变化。结果50Hz,20mT的极低频磁场对SK-HEP-1细胞的生长与代谢有抑制作用,并能阻碍其有丝分裂的进行。结论50Hz,20mT的极低频磁场为治疗人类恶性肿瘤提供了一种可能的手段。     

极低频磁场对人肝癌细胞生长、代谢及细胞周期的影响

目的：研究一定参数的极低频磁场对人肝癌细胞（SK-HEP-1）在诸多方面的影响。方法：在整个SK-HEP-1细胞的培养周期中用50Hz,20mT的极低频磁场对其进行作用,并检测作用后细胞的增殖活性、生长动力学、代谢以及细胞周期的变化。结果：50Hz．20mT的极低频磁场对SK-HEP-1细胞的生长与代谢有抑制作用,并能阻碍其有丝分裂的进行。结论：50Hz,20mT的极低频磁场为治疗人类恶性肿瘤提供了一种可能的手段。     

弱极低频磁场对Actin骨架组装效率的频率窗口效应初探

前期研究发现,50 Hz弱磁场辐照能明显降低细胞的微丝含量和组装效率,对actin骨架形态也有明显影响.电磁生物学效应是否与辐照场频率相关,一直受到研究者的关注.单体球状肌动蛋白(G-actin)是带电结构,电磁场频率会影响其振荡频率并对微丝聚合效率产生影响.本文从细胞骨架形态和蛋白质两层次,采用免疫荧光技术考察0.4 m T,在35~140 Hz范围内5个频率的极低频磁场(ELF-MF)对FL细胞中纤维状肌动蛋白(F-actin)含量的影响,并采用荧光共振能量转移技术(FRET)验证效应最明显的频率对离体G-actin组装效率的干扰程度.结果显示,相比假辐照组,细胞中F-actin含量在50 Hz辐照组下降了(34.66±3.14)%,110 Hz次之,而另外3组(35、70和140 Hz)无显著性差异.同时利用FRET方法验证,在50 Hz磁场辐照下,离体环境中G-actin组装成F-actin的效率较假辐照组、35和70 Hz组显著降低.经初步分析,G-actin在弱ELF-MF中受到以洛伦兹力和感生电场力的合力为主的相关电磁力干扰,致使组装效率下降,且由于工频磁场周期与微丝组装周期的特殊相干性,在50 Hz频率附近可能存在一个外磁场干扰actin骨架组装的频率窗口.     

葛根素对极低频电磁辐射下HFSF细胞中MMP-2 与COL1A1 的影响

目的：研究葛根素对极低频电磁场(ELF-EMFs)诱导的人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与I型 胶原(COL1Al)的影响。方法：体外培养HFSF 细胞，并将其分为对照组、辐射组、葛根素组，通过明胶酶谱法检测MMP-2的活性， Western-Blot 检测MMP-2、COL1A1 蛋白的表达。结果：暴露于0.2 mT、50Hz 的电磁辐射系统24 h 后，HFSF 细胞(辐照组)MMP-2 酶活性较对照组增高20%，MMP-2 蛋白表达升高45%，而COL1A1的蛋白表达下降40%，差异有统计学意义(P<0.05)；而与辐射 组比较，葛根素组HFSF细胞MMP-2 酶活性下降33 %，MMP-2 蛋白表达降低44.1 %，COL1A1 蛋白升高80%，差异有统计学意 义(P<0.05)。结论：极低频电磁辐射可提高HFSF 细胞中MMP-2 的活性与蛋白表达，抑制COL1Al的合成，葛根素可在一定程度上 逆转这一作用。     

不同强度50 Hz脉冲电磁场促进大鼠颅骨成骨细胞矿化成熟最佳参数的筛选

为研究不同强度脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields,PEMFs)对大鼠颅骨成骨细胞（rat skull osteoblasts,OB）增殖及成熟矿化的影响,将大鼠颅骨成骨细胞随机分为 7 组. 检测大鼠颅骨成骨细胞的增殖,细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性变化,细胞沉积钙盐的情况,组织化学染色以及成骨细胞内标志性分子表达量的改变.结果显示,0.6 mT组促细胞增殖作用最强（P <0.01）;0.6 mT、1.8 mT、3.0 mT和3.6 mT均能提高ALP活性,其中0.6 mT ALP活性最高（P＜0.01）;在磁场处理4 ～12 d时细胞沉积钙盐逐渐增加,6种强度的脉冲电磁场均能促进钙盐沉积,尤以0.6 mT水平最高; ALP 染色、茜素红染色0.6 mT 组均显著高于对照组（P<0.01）;0.6 mT组 Bmp-2和Collagen-1 mRNA 的表达明显（P<0.01）高于对照组,磁场处理组Rankl mRNA 的表达均比对照组低. 0.6 mT 50 Hz 脉冲电磁场是促进成骨细胞增殖和矿化成熟的最佳参数,这为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了治疗参数的基础支持.     

极低频电磁场对骨肉瘤细胞的体外生物效应研究

目的:通过研究极低频电磁场对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607-F4的细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期及侵袭能力的影响,达到筛选最佳极低频电磁场参数的目的。方法:体外培养人骨肉瘤细胞,按不同频率5 Hz、15 Hz、30 Hz、40 Hz、50 Hz,不同磁场强度0.1 m T、1 m T、5 m T、10 m T分组进行干预,每天辐照1次,每次3小时,连续3天,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定骨肉瘤细胞增殖活性(OD值),并计算肿瘤细胞抑制率,初步筛选出两组最佳的电磁场参数。采用流式细胞技术(Annexin V-FITC和PI双标)检测细胞凋亡情况和细胞周期变化。采用Transwell小室并通过结晶紫染色观察细胞侵袭情况。结果:MTT法检测细胞增殖活性(OD值),将磁场组与对照组进行比较,SPSS 19.0统计软件进行数据分析,结果显示不同磁场干预组组间OD值差异明显,有统计学意义(P0.05),磁场组较对照组OD值低,有统计学意义(P0.05);流式细胞技术(FCM)测定结果显示,两组磁场组间骨肉瘤细胞凋亡比例存在差异,且高于正常组,有明显统计学意义;电磁场组15 Hz,0.1 m T骨肉瘤细胞G1期百分比明显高于对照组和电磁场组50 Hz,1 m T,S期百分比则降低;侵袭实验中穿过小室的细胞数量明显低于后两者。结论:通过筛选得出极低频电磁场15 Hz,0.1 m T对骨肉瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并可诱导或促使骨肉瘤细胞凋亡,减缓其侵袭能力,但其具体作用机制有待进一步研究。     

小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF-7乳腺癌细胞增殖

雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病毒介导及抗性筛选构建了LRP16基因被稳定抑制的 2个MCF 7细胞系 ,针对绿色荧光蛋白的干扰序列作为阴性对照 .Northern印迹实验检测了LRP16基因在各个细胞株中mNRA的水平 ,与对照组细胞比较 ,针对LRP16基因不同位置的 2个小干扰RNA可分别将该基因抑制 90 %和 6 0 % .细胞增殖试验结果显示 ,MCF 7细胞中LRP16基因表达抑制率越高 ,细胞增殖速率减慢越显著 (P <0 0 5 ) ;软琼脂集落形成试验结果显示 ,抑制LRP16基因在MCF 7细胞中表达 ,限制了细胞锚定非依赖性生长 ;细胞周期分析结果表明 ,LRP16基因抑表达使MCF 7细胞G1 S周期转换受抑 ;Western印迹结果表明 ,LRP16基因表达抑制的细胞中细胞周期蛋白E及细胞周期蛋白D1蛋白水平显著下调 ,但未检测到P5 3及Rb蛋白表达水平的影响 .雌二醇刺激的增殖实验结果显示 ,抑制LRP16基因表达没有消除MCF 7细胞的反应性增殖特征 .上述结果表明 ,LRP16基因表达量与MCF 7细胞增殖能力密切相关 ,抑制其表达可有效限制MCF 7细胞的增殖能力 ,提     

不同强度静电磁场对体外培养骨髓间充质干细胞增殖与分化的影响

本实验研究不同强度静电磁场对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化作用. 体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传代后随机分为6组,分别用强度为0（对照组）、0.9、1.2、1.5、1.8和2.1 mT的静电磁场处理,每d每次处理30 min. 在磁场处理后的9~10 d ,骨髓间充质干细胞开始出现钙化小颗粒. 0.9 mT组抑制骨髓间充质干细胞增殖,1.5到2.1mT组促进骨髓间充质干细胞增殖. 在磁场处理后的12 d和15 d ,1.5和1.8 mT组极显著地增加了碱性磷酸酶(AKP)活性. 采用AKP组织化学染色和钙化结节染色对骨髓间充质干细胞成骨性分化进行鉴定,AKP组织化学染色和钙化结节染色都呈现了极强的阳性结果,尤以1.5 mT和1.8 mT阳性染色面积最大. 在SEMFs处理后的48 h 和96 h ,1.5 mT和1.8 mT组胶原I(collagen-Ⅰ)和骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2, Bmp-2) 基因表达水平显著高于对照组.在SEMFs处理后的12 d, BMP-2蛋白表达量高于对照组. 研究表明,0.9 mT 组抑制骨髓间充质干细胞增殖,1.5 mT到2.1 mT组不同强度静电磁场促进体外培养骨髓间充质干细胞的增殖. 磁场组能促进骨髓间充质干细胞成骨性分化,其中尤以1.5 mT和1.8 mT组促进大鼠骨髓间充质干细胞分化作用效果最为明显.     

一种新型抗结核先导化合物S28 对结核分枝杆菌蛋白质组表达的影响

目的 探讨从化合物库中高通量筛选得到的、可有效抑制结核分枝杆菌生长和繁殖的新型活性化合物S28 的作用机制及其可能的作用靶点。方法 采用双向电泳技术, 比较分析活性化合物作用于结核分枝杆菌H37Ra 前、后的全细胞蛋白表达差异。结果 13 个蛋白质斑点表达下调, 对其中6 个改变明显的蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸/ 电离飞行时间质谱分析, 成功测定2 个蛋白质斑点。数据库检索分析确定这2 个差异蛋白点分别为延长因子Tu 和短链脱氢酶, 是参与蛋白质翻译和氧化呼吸、能量代谢等生理过程的重要蛋白。结论 为 进一步深入探索新型抗结核活性化合物的作用机制和可能的靶点提供研究基础和方向。     

过表达外源M-CSF促进MCF7细胞增殖

为探讨过表达外源巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对细胞增殖的影响,将重组载体 pCMV/cyto/myc-M-CSF转染MCF7细胞、G418筛选,RT-PCR、Western 印迹和免疫荧光鉴定M-CSF的mRNA表达、蛋白表达及定位,通过计算细胞倍增时间、MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响. 结果表明,转染M-CSF的MCF7细胞过表达M-CSF-mRNA及蛋白,并且定位表达于细胞质;与转染空载体及未转染M-CSF组细胞比较,转染M-CSF的MCF7细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的MCF7细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强;以上结果提示,胞质过表达M-CSF可促进MCF7细胞的增殖.     

极低频正弦磁场对大鼠痛阈及氨基酸神经递质的影响

目的:探讨极低频正弦磁场对痛阈的影响以及脑内氨基酸神经递质在磁场镇痛中的作用。方法:20只SD大鼠暴露于55.6Hz、8.1mT正弦磁场中并利用辐射热甩尾法检测痛阈,同时用高效液相色谱检测暴露第11天和第14天大脑皮层和延髓谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果:与对照组相比大鼠磁场暴露第10天和第11天痛阈明显提高(P0.05)。第11天大脑皮层和延髓的γ-氨基丁酸水平有明显改变(P0.05)。结论:极低频正弦磁场有镇痛作用,调节γ-氨基丁酸可能是其作用机制之一。     

幽门螺杆菌毒素蛋白CagA诱导的蛋白的差异表达分析及其基因在胃癌组织中的表达

为了研究胃癌细胞中幽门螺杆菌(Hp)毒素蛋白CagA诱导的蛋白差异表达及其基因在人胃癌组织中的表达,用Hp感染胃癌细胞系SGC 7901和AGS及用含CagA基因的表达载体稳定转染SGC 7901细胞, 构建3组实验模型.提取各组细胞的总蛋白进行双向凝胶电泳,筛选3组重叠的差异表达蛋白质斑点进行质谱鉴定.共获得135个差异表达的蛋白质,其中上调蛋白质73个,下调蛋白质62个. 鉴定出10个差异表达蛋白质, 其中有6个差异表达蛋白是首次发现,它们主要参与细胞的能量代谢和信号转导等.最后定量检测了这10个差异表达蛋白基因在人胃癌组织中的表达, 发现有4个基因高表达和1个基因低表达. 本结果将为研究幽门螺杆菌感染引起胃癌的分子机制提供新的线索.     

环状GMP-AMP合成酶高表达对乳腺癌细胞上皮间质转化的影响*

目的: 探讨环状GMP-AMP合成酶(cGAS)高表达对乳腺癌MCF7细胞发生上皮间质转化(EMT)的影响。方法: 构建稳定高表达cGAS的慢病毒载体并转染MCF7细胞;转染后细胞分别培养12 h,24 h,48 h,72 h,每组实验重复三次,采用MTT检测cGAS对MCF7细胞增殖的影响; transwell法检测高表达cGAS对MCF7细胞迁移能力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法分析EMT相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达情况。结果: 与对照组比较,cGAS上调后MCF7细胞增殖能力显著增强(P＜0.05);细胞形态学观察显示cGAS上调后诱导MCF7细胞EMT发生,细胞形态由鹅卵石样变为梭形;transwell实验结果显示,cGAS上调导致MCF7细胞迁移能力增强(P＜0.05);Western blot结果表明,cGAS上调后上皮标记蛋白E-cadherin表达下降(P＜0.05),间质标记蛋白N-cadherin表达增加(P＜0.05)。结论: cGAS上调可增强乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,诱导乳腺癌细胞EMT发生。     

不同上样方式对蛋白质组双向电泳图谱质量的影响比较

蛋白质组技术难点之一是如何获取尽可能多的细胞或组织的蛋白信息.双向电泳蛋白斑点数目直接反映了实验蛋白质组信息的完整性.除样品制备外,蛋白上样方式对双向电泳图谱的质量和完整性有直接的影响.实验论文从以下3个方面考察不同的蛋白上样方式对双向电泳图谱的影响;即：水化上样与杯上样;一次上样与重复上样;以及酸性端加样与碱性端上样.实验结果发现;蛋白上样量较大时,杯上样方式的图谱斑点数目较水化上样方式明显增多;样品蛋白浓度较高时,稀释多次上样明显优于一次性浓缩蛋白上样;蛋白裂解液(MCF7乳腺癌细胞)在酸性端加样对偏碱性蛋白的分离未发现明显优势.相反,在等电聚焦伏小时(Vh) 足够的前提下,碱性端加样对偏碱性端蛋白反而有利,表现为斑点数目较多,而且等电点方向拖尾减轻.实验结果对提高双向电泳的质量以及相关蛋白质组信息的完整性提供了有益的技术参考.     

体外培养大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤的研究

目的：研究大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤后形态学及蛋白质组学表达变化。方法：建立体外培养星形胶质细胞液压冲击损伤模型。原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞,随机分为损伤组与对照组,对照组给予（0.2±0.01）MPa液压冲击损伤,损伤后不同时间点观察细胞形态学变化;双向凝胶电泳技术分析液压冲击损伤后蛋白质组学表达变化。结果：星形胶质细胞在液压冲击损伤后发生了显著的形态学改变,损伤后2h星形胶质细胞出现了细胞水肿、细胞皱缩、细胞连接断开和坏死,损伤后24h、48h细胞胞体肥大、突起增粗明显,部分区域细胞反应性增生明显。液压冲击损伤后,星形胶质细胞蛋白质表达谱发生了显著改变,损伤后有13个蛋白点表达发生显著改变,其中5种蛋白得到质谱鉴定,分别是肌动蛋白结合蛋白、破解蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、NADH脱氢酶10亚基和膜联蛋白1。结论：液压冲击损伤能够引起星形胶质细胞发生显著的形态学改变和蛋白质谱表达改变,损伤后表达改变的蛋白质可能与星形胶质细胞的损伤后应激反应相关。     

LRP16对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

用Northern印迹方法检测雌二醇 (17β E2 )对LRP16mRNA表达的时间及剂量依赖性调控作用 .构建LRP16基因启动子序列调控的萤光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和 β(ERα和ERβ)表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞后测定萤光素酶活性 .将LRP16基因的表达载体转染MCF 7细胞 ,测定过表达LRP16对细胞的生长特性的影响 .17β E2 使MCF 7细胞中LRP16mRNA表达水平增加 ,增加幅度未显示出 17β E2 培养时间和剂量的依赖性 .pS0 与ERα表达载体共转染细胞的相对萤光素酶活性较非共转染组 (对照组 )及pS0 ERβ表载体共转染组升高 5～ 10倍 .LRP16基因过表达促进MCF 7细胞的增殖 .研究表明 ,雌激素可能通过ERα上调乳腺癌MCF 7细胞LRP16基因的表达并促进细胞增殖     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对肿瘤多药耐药细胞敏感性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肿瘤多药耐药细胞敏感性的影响。方法:采用MTT法观察TSA对敏感细胞MCF7和多药耐药细胞MCF7/DOX存活率的影响;采用琼脂糖凝胶电泳、Western印迹和实时荧光定量PCR观察DNA梯带形成和凋亡相关蛋白的表达以及乙酰化H3和H4的表达。结果:TSA浓度为20~200 nmol/L时,MCF7组细胞存活率均显著高于MCF7/DOX组,当TSA浓度为50和100 nmol/L时差异最为显著;琼脂糖凝胶电泳表明,TSA浓度为50和100 nmol/L时,与MCF7组相比,MCF7/DOX组产生了更显著的DNA梯带,同时caspase-6及凋亡标志蛋白PARP表达水平高于MCF7组;2株细胞中乙酰化H4和H3没有显著差别,实时荧光定量PCR检测得到相同结果。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过激活caspase-6促进多药耐药细胞MCF7/DOX凋亡而抑制其增殖,与MCF7相比,TSA对MCF7/DOX细胞更为敏感,但原因并非H3、H4乙酰化的差异表达。TSA具有克服肿瘤细胞多药耐药性的应用前景。     

苜蓿雄性不育植株与可育植株现蕾初期花蕾蛋白质组比较

采用双向凝胶电泳对现蕾初期苜蓿雄性不育植株(Ms-4)及其可育植株(MF)花蕾蛋白质进行了分离,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。通过ImageMaster 2D软件对Ms-4和MF银染图谱分析发现,两者在等电点5~7、分子量20~60 kD范围内蛋白质斑点分布最多,可识别的总蛋白质点数均在6 000个左右,其中差异表达的蛋白质点数为98个;进一步通过质谱分析成功鉴定了22个差异蛋白点。利用Blast2GO程序对 22个蛋白点进行功能注释和代谢途径分析发现,核酮糖羧化酶小亚基、尿苷三磷酸-葡萄糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶等蛋白在光合作用、碳水化合物代谢、多细胞生物有机体的发育等过程中起着重要的作用,同时参与了细胞质、细胞壁等组成,并具有绑定、催化、结合和水解等功能。研究结果初步推断,在苜蓿花药发育过程中,蛋白的缺失及表达量的变化可能会使与花粉发育有关的能量缺失,物质合成发生改变,导致雄性不育。     

家蚕蛹期雌雄生殖腺蛋白质双向电泳比较分析

分析家蚕Bombyx mori雌雄生殖腺细胞蛋白质,有利于发现性别分化相关的功能蛋白质,探讨生殖腺发育相关基因的表达调控机理。本研究利用蛋白质双向凝胶电泳和图像分析技术,分析家蚕蛹期第2天的雌雄生殖腺细胞蛋白质。结果表明: 在雄蚕生殖腺蛋白质电泳图谱中共检测到435个蛋白斑点,其中特异性蛋白斑点73个,占总蛋白斑点数的16.8％;雌蚕生殖腺的电泳图谱中有417个蛋白斑点,其中特异性蛋白斑点55个,占总蛋白斑点数的13.2％。雌雄能匹配的蛋白斑点有362对,匹配率达85.0％。