椰扁甲啮小蜂寄生后椰心叶甲蛹血淋巴蛋白质双向电泳图谱分析

分析昆虫被寄生蜂寄生后血淋巴蛋白质组分及组分含量变化,从蛋白质水平分析寄生蜂寄生引起寄主昆虫的生理变化,有利于探索寄生蜂调控寄主的机理。以椰心叶甲Brontispa longissima和椰扁甲啮小蜂Tetrastichus brontispae为研究材料,采用蛋白质双向电泳技术及图像分析技术分析了椰心叶甲蛹被椰扁甲啮小蜂寄生后不同时期血淋巴蛋白质图谱及其变化情况。结果表明:寄生后0.5, 1, 2, 3和4 d,被寄生蛹血淋巴共检测到的蛋白斑点数分别为982, 926, 712, 636和680个,其中特异性蛋白斑点的数量分别为650, 400, 336, 229和150个;同期未被寄生蛹血淋巴共检测到的到的蛋白斑点数分别为645, 817, 640, 873和940个,其中特异性蛋白斑点的数量分别为313, 291, 264, 466和410个;被寄生蛹和同期未被寄生蛹能匹配的蛋白斑点分别为332, 526, 376, 407和530对。被寄生蛹血淋巴蛋白斑点数量的异常变化表明寄主的生理功能受到了严重的影响。     

利用基因与环境互作控制家蚕性别

S伴、K05、伴1、S1、D01 5个蚕品种,在胚胎期对高温干燥的催青条件表现敏感性,农 4、新九、限抗对高温干燥催青条件有较高的耐受能力,当用新九的雌与S伴、K05、伴1、S1、D01的雄蛾杂交时,其杂种一代的蚕卵,在高温干燥条件下催青,雌蚕因在胚胎发育过程中对环境条件表现敏感而不能孵化,雄蚕则能正常孵化,因而利用基因与环境的相互作用可以控制家蚕的性别。雌蚕高温干燥条件的敏感性,主要发生在胚胎发育至后期阶段。对S伴等5个温敏性品种的亲缘关系进行RAPD分析,经统计计算,相似率在63.04%~76.47%之间。 Abstract:The silkworm embryo of the varieties,sBan,K05,Ban1,S1 and D05 was sensitive to the high temperature and low humidity incubating condition,while that of Nong4,Xinjiu and Xiankang was more endurable.By crossing the female Xinjiu with the male of sensitive varieties,such as sBaa,K05,Ban1,S1 or D05,their female progenies were sensitive to the high temperature and low humidity during incubation and could not hatch,while the males could hatch normally.Experiment showed that silkworm sex could be controlled by the interaction between gene and environment. The sensitive period was at late stage during the embryo development.The RAPD analysis showed that the similarity index of the five temperature-sensitive varieties of sBan,K05,Ban1,S1 and D05 was 63.04-76.47%.     

柞蚕抗菌肽CA1的分离

应用FPLC、HPLC系统配合MALDI TOF MS等技术 ,分离得到一个以灭活的Escherichiacoli诱导产生的具有明显杀菌活性的柞蚕抗菌肽CA₁。自动蛋白质序列分析仪测定其一级结构为WNPFKELERAGSRVRDAIISAGVAVATVAQATAILK ,含有 36个氨基酸残基 ,经联机检索 ,与cecropinD有 88%的同源性 ,仅有 4个氨基酸残基的差异 ,其中铰链区第 2 1～ 2 3位氨基酸为AGV ,与已知柞蚕抗菌肽A、D铰链区AGP有所不同 ,提示抗菌肽存在多态性。     

饥饿胁迫下家蚕5龄起蚕中的蛋白表达谱及BmLp-c6的转录分析

【目的】分析家蚕Bombyx mori受饥饿胁迫后的蛋白质谱变化,探索其耐受饥饿的机理。【方法】以家蚕品种932为实验材料,利用双向电泳和质谱技术检测5龄起蚕经过24 h饥饿胁迫的蛋白质谱差异变化,利用荧光定量PCR技术分析Bm Lp-c6的转录表达。【结果】经比对饥饿蚕和正常取食蚕的血淋巴蛋白谱,饥饿蚕有62个特异蛋白点。蛋白点的等电点在4.22~6.98之间,分子量分布在20.81~144.69 k Da间。选取只在饥饿时出现的特异蛋白点No.7111进行质谱鉴定,根据其氨基酸序列进行引物设计,获得了目的基因Bm Lp-c6,经与载体p ET-21d(+)连接重组后,成功获得诱导表达。经实时荧光定量PCR分析,当5龄起蚕受到饥饿胁迫影响时,Bm Lp-c6基因在血淋巴中大量转录表达,但在中肠中的转录表达水平却极低。【结论】家蚕5龄起蚕在饥饿胁迫下,血淋巴中的蛋白质谱发生变化,Bm Lp-c6会大量转录表达。     

家蚕hsp70启动子的克隆及功能研究

该研究通过PCR的方法克隆得到家蚕热激蛋白70基因(Bombyx mori hsp70)的5'侧翼的两个长度分别为538 bp和305 bp的序列hsp70-538和hsp70-305。生物信息分析结果表明这两段序列在TATA序列的上游存在保守的热激元件HSE(heat shock element)CTnGAAnnTTCnAG。采用双荧光报告基因技术研究表明这两段序列在BmN细胞中都表现出热激活性,转基因家蚕实验证明hsp70-305在家蚕个体中也具有热激活性,可以认为这两个片段具有hsp70热激启动子特性。     

转基因植物核酸成分检测技术研究进展

首先对转基因核酸成分检测的靶序列特征进行了阐述,对转基因植物核酸成分的定性、定量检测技术研究进展进行了综述,包括基于PCR的检测技术、基于等温核酸扩增的检测技术、基因芯片检测技术、基于高通量测序和新型转基因核酸检测技术(如生物传感器技术、毛细管电泳技术和纳米刻度技术等),重点介绍了各种检测技术的原理、特点、研究现状和发展动态,并对各种方法的优缺点进行了比较。     

昆虫表皮蛋白及其基因表达调控机理的研究进展

昆虫表皮蛋白(insectcuticular proteins,ICP)是结构蛋白,它和几丁质一起组成昆虫抵御外界环境的屏障——角质层。根据保守性基序的不同,ICP可分为CPR、CPF、CPFL、CPG和CPT5家族。它们都有独特的结构与性质。环境、激素、转录因子和内含子等共同影响昆虫表皮蛋白基因(insect cuticular protein genes,ICPG)的表达,进而使ICPG具有时期和组织特异性。ICP和ICPG被认为是研究昆虫蜕皮与变态的调控机理和理解昆虫发育期角质层在生物化学、物理化学以及结构上的修饰的重要模型,受到越来越多的重视。本文综述了ICP的分类以及环境、激素、转录因子和内含子等对ICPG表达的调控。     

CP7菌株抗菌物质对真菌的活性及其作用机制研究

旨在研究多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CP7菌株分泌的抗菌物质对玉米大斑菌和白色念珠菌的活性作用。结果显示,CP7菌抗菌物质对玉米大斑菌和白色念珠菌的菌丝、孢子生长有强烈的抑制作用,CP7菌抗菌物质处理后,玉米大斑菌的菌丝出现畸形、扭曲,细胞外壁皱缩,原生质发生凝聚,产生空泡,细胞器消溶,核区出现核固缩等现象;白色念珠菌的细胞壁和细胞膜模糊,原生质有凝聚现象,细胞器消溶,细胞核变形。推测CP7菌株抗菌物质是破坏真菌的细胞壁和细胞膜结构,形成通道,引起内容物外渗,破坏细胞内部结构,使原生质凝聚,细胞核固缩,最终使菌体死亡。     

家蚕细胞周期蛋白基因BmCcnl1的克隆及表达分析

家蚕Bombyx mori由受精卵到完成胚胎发育孵化的过程中, 细胞进行大量的分裂和分化, 然而滞育性卵的胚胎细胞分化至G2期便停滞在此阶段。为了探索这一发育阶段细胞内的分子调控, 本研究以人Homo sapiens的细胞周期蛋白基因cyclin L1为模板, 成功克隆了家蚕同源基因BmCcnl1（GenBank登录号: FJ889988）。BmCcnl1基因开放阅读框（open reading frame, ORF）全长1 254 bp, 编码417个氨基酸。利用Protean软件分析得出BmCcnl1蛋白预测分子量为49 kDa, 等电点为9.84。利用DNA重组技术构建了BmCcnl1基因的重组表达载体pET-21d-BmCcnl1, 对其进行原核表达, 其表达的蛋白以包涵体形式存在。利用RT-PCR技术分析了BmCcnl1基因在胚胎发育过程中的转录水平, BmCcnl1基因在非滞育性卵的胚胎发育阶段基本保持相对稳定的转录表达, 而滞育性卵从蛾体产下经过72 h后已经检测不到BmCcnl1基因的转录。结果提示, BmCcnl1基因与胚胎期滞育及非滞育性卵的发育调控相关。对该基因的克隆和表达分析为今后研究家蚕胚胎发育及细胞周期调控奠定了基础。     

家蚕胚胎期对高温干燥催青耐受性的遗传分析

本文运用完全双列杂交的方法,估测了家蚕在胚胎期对高温干燥催青条件耐受性的有关遗传参数。家蚕种对高温干燥催青的耐受性,在原种间和杂交组合间有明显差异。耐受性是一种遗传性性状,由遗传基因控制。经估算的广义遗传力大于狭义遗传力。有超显性现象。控制家蚕对高温干燥催青的耐受性的基因数目不少于两个。显性效应大于加性效应。显性效应为非单向性的。显性位点上的基因分布为不对称性。 Abstract:Some genetic parameters about endurance of silkworm to high temperature and low humidity condition during embryo stage were calculated in complete diallel crossing(6×6).There was clear variation in the endurance of both parents and F1 to the incubating condition of high temperature and low humidity.Endurance is a supper-dominant character controlled by genes not less than two.The generalized heritability is greater than narrow heritability .The effects of dominant genes were non-unidirection,with the dominant effect greater than additive effect.The distribution of genes on the location of the dominance is not symmetric.