一例虹鳟低死亡率疾病的病原学及病理学研究

为确定病原类型和造成虹鳟低死亡率的原因,研究对患病虹鳟进行了病理学观察、病毒的分离和鉴定以及动物感染实验。临床检查发现发病虹鳟体色变黑,肌肉和腹壁点状出血。病理学观察发现虹鳟造血器官脾和肾间组织严重坏死。通过反转录PCR法检测坏死组织和病变细胞中传染性造血器官坏死病毒、出血性败血病毒和传染性胰腺坏死病毒,并对得到的371 bp大小片段进行测序和构建进化树分析,发现感染病原为传染性造血器官坏死病毒。同时,给体重为1.5 kg健康虹鳟腹腔注射104 TCID50的组织滤液,累计死亡率达到35%。除此之外,将组织滤液接种到鲤鱼上皮瘤细胞系后出现了特征性病变。在实验过程中未发现细菌或寄生虫感染。结果证实引起虹鳟低死亡率的病原为传染性造血器官坏死病毒。     

池塘养殖斑鳢弹状病毒的分离与初步鉴定

从患暴发性死亡的斑鳢病灶中分离出一株弹状病毒。 取病鱼肝、脾、肾组织过滤液接种EPC、FHM细胞, 连续传至第3代后28℃培养35h出现细胞病变(CPE), 测得病毒半数细胞感染量为10-5.746/0.1 mL。将病变细胞制成超薄切片, 透射电镜下观察到细胞质中存在大量呈子弹状的病毒颗粒, 大小约53 nm140 nm。用上述组织过滤液及F3代细胞培养病毒液回归感染健康斑鳢均能显示与自然发病鱼相似的症状, 死亡率达100%。根据鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus, SCRV)N蛋白保守序列设计的引物对斑鳢病毒的基因组RNA进行RT-PCR扩增, 得到大小约400 bp的阳性片段。对该片段克隆、测序后与GenBank中序列进行BLAST比对, 发现该基因序列与SCRV同源性最高, 为94%。选取GenBank中已登录的病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鳢弹状病毒(SHRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、鳜鱼弹状病毒(SCRV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、狂犬病毒(RV)、牙鲆弹状病毒(HIRRV)相关序列构建系统进化树, 结果表明, 该基因序列与SCRV聚为一支。由于该病毒粒子的形态大小与SCRV(100 nm200 nm)存在一定差异, 暂将其命名为斑鳢弹状病毒(CHRV)。       

虹鳟传染性胰脏坏死病病毒（IPNV）的初步研究

山西省虹鳟试验场用从日本引进的鱼卵孵化的虹鳟稚鱼暴发流行病,死亡率高达90％以上,经组织培养分离到病毒,能在鲑鳟细胞系中产生细胞病变,形成直径0．5－1mm的空斑。感染健康虹鳟稚鱼能复制出与天然发病相同的症状和死亡率,病毒对氯仿不敏感,耐酸,耐热,病毒负染后电镜观察为直径55－65mm的二十面体颗粒,无囊膜,具单层衣壳,经血清学鉴定为传染性胰脏坏死病病毒（Infectious pancreatic necrosis virus简称IPNV）在血清学交叉中和反应中与抗IPN－SP株的抗血清有强烈的交叉反应,提示可能为IPN－SP株。     

用虹鳟鱼苗确认IHN用重组疫苗的效果

日本水产公司开发出抗传染性造血器官环死病毒(IHNV)的重组疫苗。虹鳟鱼苗容易感染这种病毒。所以用虹鳟进行预防感染实验。实验结果,实验组比对照组生存率高。于9月25日～26日在三重县伊势市召开的日本鱼病学会上发表了该成果。     

对虾病毒病害的研究进展

随着对虾养殖业的发展,其病害亦日趋突出。对虾病原的研究,特别是病毒性病原的研究,是当前我国发展对虾养殖业的重要课题,它对虾病的防治与检测提供重要的科学依据。为此,我们对近十多年来已发表的有关对虾病毒方面研究的论文和资料作一概述,希望能对同行的研究工作有所稗益。l对虾病原的研究l．且国外已发现的对虾病毒种类自1974年Cou。h【‘’报道了第一种对虾病毒以来,共发现了15种病毒或似病毒颗粒：对虾杆状病毒（BP）、对虾中肠腺坏死病毒（BMNV）、斑节对虾杆状病毒（MBV）、对虾传染性皮下与造血器官坏死病毒（IHHNV）…     

传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）感染途径,宿主范围及对温度敏感性的研究

传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）无细菌滤液通过肌肉注射、划痕浸泡、腹腔注射和口服等四种感染途径,人工感染健康鳜鱼（Sinipercachuatsi）,四种途径都能引起典型的传染性脾肾坏死病毒病。通过腹腔注射感染途径,病毒滤液在25～34℃条件下,能引起健康鳜鱼发病。另外,用病毒滤液感染尼罗非鲫（Oreochromis。niloticus）、草鱼（Ctenopharyngodonidellus）、乌鳢（Ophiocephalusargus）、大口黑鲈（Micropterussalmoides）和尖吻鲈（Latescalcarifer）五种鱼,大口黑鲈能够感染成功,为ISKNV的宿主,而其它鱼不能感染成功,不是ISKNV的宿主。     

中国本溪虹鳟一株弹状病毒的分离及初步研究

１９９０年４月,辽宁省本溪市虹鳟鱼种场的虹鳟稚鱼爆发大规模疾病,死亡率近１００％。取病鱼组织处理后接种于鱼类细胞,出现明显的细胞病变,测定细胞培养物中的病毒滴度,最高达１０￣（６．３）ＴＣＩＤ＿（５０／０．１ｍｌ）。感染病毒的细胞用１％营养琼脂糖覆盖后可形成０．５－１．５ｍｍ的蚀斑。分离到的病毒对氯仿敏感,不耐热、不耐酸,在细胞内复制的最适温度为１５℃。室内人工感染的虹鳟稚鱼能复制出与天然发病相同的症状。对感染病毒的细胞制成超薄切片,透射电镜观察,病毒长为１３１－１７３ｎｍ,平均１４８ｎｍ,直径为５８－９１ｎｍ,平均７１ｎｍ,形状为子弹状,表明是弹状病毒,有囊膜及纤突。采用挑斑法得到了纯化的病毒株,暂称之为传染性造血器官坏死症病毒中国本溪株ＩＨＮＶ－Ｂ。     

传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)感染途径、宿主范围及对温度敏感性的研究

传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)无细菌滤液通过肌肉注射、划痕浸泡、腹腔注射和口服等四种感染途径,人工感染健康鳜鱼(Siniperca chuatsi),四种途径都能引起典型的传染性脾肾坏死病毒病.通过腹腔注射感染途径,病毒滤液在25～34 ℃条件下,能引起健康鳜鱼发病.另外,用病毒滤液感染尼罗非鲫(Oreochromis niloticus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、乌鳢(Ophiocephalus argus)、大口黑鲈(Micropterus salmoides)和尖吻鲈(Lates calcarifer)五种鱼,大口黑鲈能够感染成功,为ISKNV的宿主,而其它鱼不能感染成功,不是ISKNV的宿主.     

实时定量RT-PCR检测鱼类传染性造血器官坏死病毒方法的建立与应用

建立了Taqman 实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV).选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针.以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量RT-PCR反应以确定检测灵敏度.病毒浓度在5×106 -5个拷贝,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为5个拷贝.根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线.该方法具有特异性,对鲤春血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症(VHSV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、EPC细胞系、牙鲆的核酸都没有扩增反应.在50批待检样品中,有3批鱼类感染IHNV,利用标准曲线进行了定量分析.实时定量RT-PCR检测IHNV方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在鱼病的快速检测上具有重要意义.     

鳜传染性脾肾坏死病毒研究进展

自1994年以来,鳜传染性脾肾坏死病毒病每年给我国鳜养殖业造成数亿元的经济损失,严重制约着鳜鱼养殖业的发展,目前已被列为国际兽医局(International Epizootic Office,OIE)申报疫病。其病原传染性脾肾坏死病毒因广泛的宿主范围和极高的致死率,越来越得到研究者的关注。本综述对近年来有关传染性脾肾坏死病毒的病原特性、功能基因、检测方法和疫苗研制等研究进行概述、归纳与简评,旨在为鳜传染性脾肾坏死病毒研究提供借鉴。     

多重RT-PCR同时检测鉴别三种对虾病毒的研究与应用

根据基因库中对虾桃拉综合征病毒（TSV）、白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）的基因序列,分别设计了三对特异性引物,通过对多重RT—PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时检测鉴别TSV、WSSV和IHHNV的多重RT—PCR。该技术对同一样品中的TSV RNA、WSSV DNA和IHHNV DNA模板进行扩增,结果均同时得到3条大小与实验设计相符的231bp（TSV）、593bp（WSSV）和356bp（IHHNV）的特异性多重RT—PCR扩增带,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到10pgTSV RNA、100pg WSSV DNA和100pg IHHNV DNA。临床检测试验结果表明,该技术对TSV、WSSV和I—HHNV的检出率明显高于传统的临床症状观察和组织病理学检查,提示该技术适用于这三种病毒的临床快速检测和鉴别诊断。     

弹状病毒研究的新进展Ⅰ.病毒的基因结构

弹状病毒组是与人类疾病及工农业生产密切相关的一个重要病毒组,例如VSV（水泡性口膜炎病毒）引起的家畜口膜炎,RV（狂犬病毒）引起的狂犬病,IHNV（传染性造血器官坏死病毒）引起的鲑鱼造血器官坏死病,以及对我国农业生产有重大危害的小麦丛矮病毒引起的小麦丛矮病和由水稻黄矮病毒引起的水稻黄矮病等。弹状病毒可以从两个方面的特征区别于其它病毒：首先是形态特征,大多数弹状病毒有子弹状形态,少数为两个子弹状以底部相连的杆状形态;其次,弹状病毒基因组由一条不分节段的负链RNA构成。目前已知的弹状病毒超过100种。弹状病毒…     

PCR法检测对虾皮下和造血器官坏死杆状病毒

皮下和造血器官坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）［１］、对虾杆状ＤＮＡ病毒（ＰＲＤＶ）［２］和白斑杆状病毒（ＷＳＢＶ）［３］是近年来引起全球对虾暴发性死亡的病原。这三种病毒同属杆状病毒属Ｃ杆状病毒亚群中的新病毒,在流行病学和病理学特征上十分类似,因此,我们...     

家兔急性出血性传染病的病毒分离、纯化和鉴定(简报)

自从去年以来,在我国一些地区的家兔饲养群中发生了一种急性传染性疾病,病程短,死亡率高,濒死前体温升高1—2℃,稽留8—24小时。病死兔经解剖检查,主要病变是多种器官和组织出现(氵弥)散性或灶状出血。我们对病变器官如肝、肺、肾等的超薄切片曾作电子显微镜观察,发现在病变细胞的胞质中存在很多病毒样颗粒(图1)。张哲夫等也有相同的报道。为了弄清这种颗粒的性质,及其与家兔的这种传染性疾病确切的病因关系,本文报道我们在病毒的分离、纯化、鉴定和家兔感染的一些实     

1996年中国对虾暴发性流行病病毒病原研究

１９９６年６月至８月,青岛地区养殖的中国对虾大面积暴发流行病,死亡率达９０％以上。发病对虾典型表征为甲壳白斑。病虾鳃组织匀浆滤液经微孔滤膜过滤除菌后,注射给健康对虾进行人工感染试验,９天内累计死亡率达１００％,发病症状及体征与自然发病对虾相似。电镜下自然发病对虾鳃、胃、头胸甲下表皮、淋巴样器官、触角腺等组织细胞核内发现大量杆状病毒,未见包涵体;人工感染对虾相同组织中可见大量同样病毒。切片中病毒粒子     

禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠后多器官病变初探

为了研究禽流感H5N1病毒在各个器官的增殖和病理变化,在生物安全实验室,我们将禽流感H5N1病毒通过尾静脉接种BALB/C小鼠。结果小鼠在不经过适应的情况下,直接感染发病,甚至死亡。在观察的7天内,感染小鼠临床症状主要表现呼吸急促,体温、体重下降。尸检表现肺出血,心外膜坏死以及肝脏的坏死。组织病理检查表现心、肝、肺等多器官的病变。肺的病变伴有纤维化的弥漫性肺泡损伤;心肌外膜大量淋巴细胞浸润、坏死;肝细胞大量坏死,淋巴细胞浸润。心、肝的坏死病变在H5N1禽流感病毒相关的研究中未见报道。经过对各个组织器官的病毒载量的检测,未发现病毒在各个病变组织中的复制。免疫组化的检测,各个组织中也未检出阳性的细胞反应。因此,我们认为H5N1禽流感病毒感染小鼠引起多个器官组织的损伤,甚至死亡,不是病毒在器官的复制,而可能是病毒感染小鼠,产生炎症细胞因子的高度表达,损伤多个器官组织所致。     

大鳄龟感染蛙病毒的PCR检测及组织病理分析

2013年3月成都市某海洋馆送检2只发病大鳄龟(Macrochelys temminckii),临床特征表现为:精神状态萎靡,爬行无力,对外界刺激反应迟钝;颈部和四肢局部红肿,腹甲溃烂,严重部位甚至穿孔,最后死亡。为明确患病大鳄龟的病因,进行了细菌学、组织病理学和PCR检查。细菌学检查阴性;病理组织学观察发现,大鳄龟多组织、器官均发生严重病变,尤其是肾、肝、肺和心的损伤最为严重,表现为明显的变性、坏死和炎症细胞浸润,并在一些病变组织细胞浆内见嗜酸性或嗜碱性包涵体。针对蛙病毒(Ranavirus)病毒的特异性PCR检测扩增出蛙病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因500 bp目的片段,测序后的DNA序列与Gen Bank中已知核酸序列进行Blast比对,发现其与Gen Bank中的蛙病毒主要衣壳蛋白基因同源性达95%~99%。根据组织病理特点及PCR检测结果推测大鳄龟的死亡是感染蛙病毒所致。     

用酶联免疫吸附试验快速检测虹鳟的传染性胰脏坏死病病毒

我国于1987年从进口的虹鳟中分离了传染性胰脏坏死病病毒(Infectious pancreatic necrosis virus简称IPNV),并进行了血清学鉴定。由于病鱼没有特有的临床症状,所以迅速查找鱼体内特异性的病毒是十分必要的。       

SARS-CoV恒河猴模型动物中组织病理学动态变化

目的在感染的8只恒河猴的SARS-CoV模型动物中,观察肺等组织中出现的系列病理学改变,为针对抗SARS药物筛选、疫苗评价中的免疫病理反应等奠定实验依据。方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第5、7、10、15、20、30和60天,分别安乐处死动物,组织病理取材,制片,观察。结果经病毒分离和RT-PCR证实动物感染是成功的。系列病理改变表明,早期肺组织可见间质性肺炎,水肿、结构破坏、出血,巨噬细胞浸润;后期出现内皮细胞受损及再生,透明膜形成,小血管玻璃样变,肺组织纤维化及肺气肿形成,肺泡网状纤维和弹力纤维破坏并增生等,脾脏、淋巴结生发中心早期有萎缩,后期有恢复等病理学改变均和SARS患者相似。结论感染恒河猴出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,为进一步研究该病毒的病原特性、发病机理、药物筛选、疫苗评价等方面的研究奠定了重要基础。