氟康唑体外诱导白假丝酵母菌耐药基因表达的研究

目的 对白假丝酵母菌耐药机制进行研究.方法 将临床分离对氟康唑敏感的白假丝酵母菌种,经体外诱导产生耐药.半定量PCR检测敏感株、耐药株、回复敏感株多药耐药基因CDR1、CDR2、MDR1和转录调控因子TAC1编码基因表达水平的变化,并对TAC1编码基因进行测序.结果 与敏感株和回复敏感株比较,耐药株CDR1、CDR2相对表达量增高,发现1株TAC1 N977D氨基酸置换.结论 氟康唑体外诱导白假丝酵母菌产生耐药的机制与CDR1、CDR2表达相关.TAC1基因突变在诱导耐药中的机制有待进一步研究.     

应用流式细胞术对白假丝酵母菌耐药机制的研究

目的 探讨流式细胞术研究白假丝酵母菌耐药机制的可行性.方法 临床分离对氟康唑敏感的白假丝酵母菌种,经体外诱导产生耐药.应用荧光染料PI(碘化丙啶)和罗丹明123染色,通过流式细胞术检测敏感株、耐药株、回复敏感株的细胞周期和药物外排活性.结果 与敏感株和回复敏感株比较,耐药株增殖活性明显下降,但是药物外排活性显著增强.结论 应用氟康唑能够体外诱导白假丝酵母菌产生耐药.流式细胞术应用于白假丝酵母菌增殖活性和药物外排活性研究是可行的.     

白假丝酵母菌突变株ORF19.2500的功能研究

目的筛选50株白假丝酵母菌基因缺失菌,寻找出对白假丝酵母菌生物被膜形成相关基因,进一步探究白假丝酵母菌生物膜的致病机制。方法利用培养生物被膜的方法筛选50株基因缺失菌;利用XTT法验证所筛选出的白假丝酵母菌突变株ORF19.2500生物被膜形成缺陷;进一步观察ORF19.2500基因缺失菌生长、菌丝形成。结果用XTT法证明白假丝酵母菌突变株orf19.2500生物膜形成缺陷,且生长曲线和滴琼脂平板的方法均提示其生长速率减慢。在spider培养基上白假丝酵母菌突变株orf19.2500不能诱导菌丝形成,但在YPD+10%小牛血清则菌丝形成正常。结论白假丝酵母菌突变株orf19.2500可利用spider培养基缺陷而影响其酵母、菌丝二态性的转化,及其生物被膜的形成。     

蒙古戈壁地区自然发酵乳中乳酸菌的分离鉴定

从采集自蒙古国戈壁地区的6份自然发酵乳中分离到14株乳酸菌,经过形态特征,生理生化特性,糖发酵试验和乳酸旋光性的测定,鉴定结果:乳酸球菌5株,包括Lactococcus lactissubsp.cremoris 1株,Pedio-coccus.(后缩写为Ped.).urinaeequi3株,Pediococcus.pentosaceus1株;乳杆菌9株,包括Lactobacillus.(后缩写为L.)helveticus8株,Lactobacillus.delbrueckii.subsp.bulgaricus1株。蒙古国戈壁地区自然发酵乳中的优势菌为Lactobacillus.helveticus,其次为Pediococcus.urinaeequi。     

芒果苷协同氟康唑抗耐药白念珠菌作用研究

目的研究芒果苷与氟康唑合用对唑类耐药白念珠菌协同抗真菌的作用和机制。方法采用棋盘式微量稀释法测试芒果苷协同氟康唑对22株耐药白念珠菌的最小抑菌浓度MIC80;时间-杀菌曲线探究两药联用对4株耐药白念珠菌生长的抑制作用;药物生长抑制实验实验探究不同浓度芒果苷和不同浓度氟康唑协同抗耐药白念珠菌药效;通过实时定量RT-PCR检测两药联用时耐药基因CDR1、CDR2、MDR1表达水平。结果芒果苷联合氟康唑可产生协同抗唑类白念珠菌作用,协同指数(FICI)0.5;两药合用对白念珠菌生长可产生抑制作用;两药合用降低耐药基因CDR1表达水平。结论芒果苷与氟康唑合用可产生协同抗唑类耐药白念珠菌作用。     

抗生素诱导小鼠阴道菌群失衡及乳杆菌调节作用的研究

目的 构建抗生素诱导的小鼠阴道菌群失衡模型,并研究乳杆菌对假丝酵母菌的阴道菌群失调的调整作用.方法 以IRC小鼠为实验对象,用头孢曲松造成阴道菌群失调,并将白假丝酵母接种到小鼠阴道内,造成小鼠阴道白假丝酵母过度增殖模型.对抗生素作用后的小鼠,采用乳杆菌预防、同步、治疗3种方式,阴道接种德氏乳杆菌DM8909菌液(2×108CFU/ml);取其阴道分泌物进行假丝酵母菌及乳杆菌的阴道菌群分析,并同时进行分泌物镜检,取阴道组织标本做病理组织学检查.结果 模型组小鼠阴道内细菌总数显著下降(P<0.01),出现阴道红肿、分泌物涂片镜检查到白细胞及假丝酵母.乳杆菌对小鼠抗生素导致的阴道菌群失衡的调节作用明显,受损小鼠阴道菌群的多样性和数量恢复至正常(P>0.05),其中乳杆菌预防组阴道菌群破坏程度最小(P<0.01);乳杆菌干预后的小鼠都可以显著性清除阴道内的假丝酵母菌(P<0.01),以乳杆菌预防组效果最好.结论 德氏乳杆菌DM8909能阻止白假丝酵母对阴道上皮的黏附作用,能调整阴道的菌群,对阴道黏膜有一定的修复功能.     

一株源自人体阴道抗真菌的 优势乳杆菌的分离、筛选及鉴定

摘要：目的 筛选并鉴定出可以抗真菌且益生特性优良的乳杆菌菌株,为研制预防和治疗人体真菌性阴道炎症的微生态制剂奠定坚实的理论基础。方法 利用经典的微生物方法,将健康人体阴道内乳杆菌分离出来;利用发酵工程学、细胞生物学以及药理学方法,将分离出的乳杆菌中益生特性优良且可以抑制白假丝酵母菌的优势菌株筛选出来,利用分子生物学方法,将筛选出的优良乳杆菌菌株进行鉴定。结果 筛选出1株产酸性能优良,产过氧化氢,具有较强黏附能力,且能够抑制白假丝酵母菌的优势乳杆菌菌株,此菌株经鉴定为Lactobacillus crispatus。结论 本实验从健康人体阴道内分离、筛选并鉴定出的1株可抗真菌性能优良乳杆菌菌株SQ004,具有制备预防和治疗人体真菌性阴道炎症微生态制剂主要菌株的条件。     

医院内假丝酵母菌感染菌种的分布及耐药分析

目的了解医院内假丝酵母菌感染菌种的分布及抗真菌药物的耐药谱,为临床抗真菌治疗提供正确数据。方法采用VITEK-32微生物自动鉴定仪进行假丝酵母菌菌种的鉴定,同时用ATB FUNGUS真菌药敏条作药敏试验。结果从住院患者的血液、痰、尿、分泌物、胆汁等标本中共检出真菌505株。其中白假丝酵母菌281株,热带假丝酵母菌124株,光滑假丝酵母菌21株,季也蒙假丝酵母菌17株,近平滑假丝酵母菌16株,克柔假丝酵母菌10株,皱折假丝酵母菌8株,异常汉逊假丝酵母菌6株,5氟-胞嘧啶和两性霉素抑菌效果最好,其耐药率分别为2.8%和3.4%。其他4种抗真菌药物制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑和酮康唑的耐药率分别为6.1%、13.7%、9.3%和28.3%。结论医院假丝酵母菌感染耐药率逐年上升,非白假丝酵母菌感染明显增加。氟康唑对白假丝酵母菌有很强的抗菌活性且毒副作用小。假丝酵母菌感染的迅速增加同广泛应用超广谱抗菌药物、激素及免疫抑制剂等有关。假丝酵母菌感染死亡率高,因此早期诊断及有效性治疗是减少死亡率的关键。     

伊犁黑蜂蜂胶对不同生长状态白假丝酵母菌抑菌作用的体外研究

目的探究伊犁黑蜂蜂胶对白假丝酵母菌游离状态及其生物膜状态的影响。方法采用NCCLS M27-A2酵母微量稀释法结合平板法测定蜂胶对游离状态下白假丝酵母菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);玻片法在体外构建白假丝酵母菌生物膜模型,采用MTT法检测蜂胶对白假丝酵母菌生物膜状态下的最低生物膜清除浓度(MBEC)及抑制作用;激光共聚焦显微镜(CLSM)观察不同浓度蜂胶醇提取物对同一时间白假丝酵母菌生物膜的抑菌效果,并进行红蓝荧光染色定量分析。结果伊犁黑蜂蜂胶对浮游白假丝酵母菌的MIC为4mg/mL,MBC为8mg/mL;伊犁黑蜂蜂胶对生物膜状态下白假丝酵母菌的MBEC为16mg/mL,随着药物浓度的增加抑菌性逐渐增大,差异具有统计学意义(P0.05);CLSM观察,伊犁黑蜂蜂胶作用于白假丝酵母菌生物膜后可使生物膜内活菌比例降低,生物膜活性减弱,生物膜内实验菌死亡率随蜂胶浓度增加呈上升趋势,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论伊犁黑蜂蜂胶在体外对不同状态下的白假丝酵母菌均起到了明显的抑制作用。     

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对白假丝酵母菌黏附作用的影响

目的探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物（ethyl acetateextract of Huanglianjiedu decoction,EAHD）对白假丝酵母菌黏附作用的影响。方法XTT法检测白假丝酵母菌黏附力;平板法计数导管上黏附的白假丝酵母菌CFU;倒置显微镜观察黏附的白假丝酵母菌;qRT—PCR法定量检测黏附相关基因EAP1、HWP1、ALS1、ALS3、MP65的表达。结果312μg/mL EDHA可显著抑制白假丝酵母菌在聚苯乙烯和聚酯导管上的黏附;白假丝酵母菌生长早期在EDHA作用下,菌细胞出芽数均呈现剂量依赖性降低;EDHA作用后,EAP1、HWP1均下调,ALS3、MP65均上调,ALS1几乎未变化。结论EAHD可显著抑制白假丝酵母菌的黏附作用。     

猪乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中的表达及抑菌活性比较

为了获得优化的猪乳铁蛋白乳杆菌表达系统,并比较重组猪乳铁蛋白的抑菌活性,根据乳杆菌使用密码子的偏嗜性优化合成猪乳铁蛋白成熟肽编码序列,将其克隆到乳杆菌表达载体pPG612.1的XhoⅠ/BamHⅠ位点,获得了plf乳杆菌表达载体质粒pPG612.1-plf。将获得的重组质粒分别电转化入干酪乳杆菌ATCC393、戊糖乳杆菌KLDS1.0413、植物乳杆菌KLDS1.0344和副干酪乳杆菌KLDS1.0652细胞内,获得4种表达猪乳铁蛋白的重组乳杆菌。经木糖诱导,通过Western blotting和激光共聚焦检测重组猪乳铁蛋白的表达,用ELISA方法检测和比较4种重组菌上清中表达猪乳铁蛋白的量,并用琼脂孔穴扩散抑菌法检测4种重组乳杆菌表达乳铁蛋白的抑菌活性。结果表明,乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中均得到正确表达,其产物分子量约73 kDa,重组干酪乳杆菌、重组戊糖乳杆菌、重组植物乳杆菌和重组副干酪乳杆菌的重组猪乳铁蛋白表达量分别为9.6μg/mL、10.8μg/mL、12.5μg/mL、9.9μg/mL。重组猪乳铁蛋白对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌和李氏杆菌均有一定的抑菌作用,对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,且4种重组乳杆菌中重组植物乳杆菌表达产物的抑菌效果优于其他重组菌的表达产物。结果表明在4种乳杆菌中重组猪乳铁蛋白的最佳表达系统为植物乳杆菌,该结果为猪乳铁蛋白的乳杆菌表达系统进一步开发与应用奠定了基础。     

Metabolic flux analysis of carbon balance in Lactobacillus strains

Metabolic flux analyses were performed based on the carbon balance of six different Lactobacillus strains used in this study. Results confirmed that L. delbrueckii, L. plantarum ATCC 21028, L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1, L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1‐pCU‐PxylAB, and L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1‐pLEM415‐xylAB metabolized glucose via EMP: whereas, L. brevis metabolized glucose via PK pathway. Xylose was metabolized through the PK pathway in L. brevis, L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1‐pCU‐PxylAB and L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1‐pLEM415‐xylAB. Operation of both EMP and PK pathways was found in L. brevis, L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1‐pCU‐PxylAB, and L. plantarum NCIMB 8826 ΔldhL1‐pLEM415‐xylAB when glucose plus xylose were used as carbon source. The information of detailed carbon flow may help the strain and biomass selection in a designed process of lactic acid biosynthesis. © 2016 American Institute of Chemical Engineers Biotechnol. Prog., 32:1397–1403, 2016     

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶激活因子基因的克隆、测序与功能鉴定

根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析,设计简并引物从L.diolivorans基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因(gldG、gldH)全序列,补全了GenBank中该基因序列的未知部分,构建了表达质粒pSE-gldGH,以E.coliBL21为宿主,进行诱导表达.表达产物的变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明:gldGH表达产生68ku、13ku两个蛋白质,它们经金属螯合亲和层析与凝胶过滤得到共纯化,纯化产物即假定的激活因子为分子质量约325ku的蛋白质聚合体,由这两个蛋白质以等摩尔量组成,因此假定的激活因子可能为α4β4亚基结构.以L.diolivorans二醇脱水酶为对象,进行激活实验,结果证实gldGH表达产物具备二醇脱水酶激活因子的功能.     

A one-step reaction for the rapid identification of Lactobacillus mindensis, Lactobacillus panis, Lactobacillus paralimentarius, Lactobacillus pontis and Lactobacillus frumenti using oligonucleotide primers designed from the 16S-23S rRNA intergenic sequences

Aims:  Species-specific primers targeting the 16S–23S ribosomal DNA (rDNA) intergenic spacer region (ISR) were designed to rapidly discriminate between Lactobacillus mindensis , Lactobacillus panis , Lactobacillus paralimentarius , Lactobacillus pontis and Lactobacillus frumenti species recently isolated from French sourdough.
Methods and Results:  The 16S–23S ISRs were amplified using primers 16S/p2 and 23S/p7, which anneal to positions 1388–1406 of the 16S rRNA gene and to positions 207–189 of the 23S rRNA gene respectively, Escherichia coli numbering (GenBank accession number V00331 ). Clone libraries of the resulting amplicons were constructed using a pCR2·1 TA cloning kit and sequenced. Species-specific primers were designed based on the sequences obtained and were used to amplify the 16S–23S ISR in the Lactobacillus species considered. For all of them, two PCR amplicons, designated as small ISR (S-ISR) and large ISR (L-ISR), were obtained. The L-ISR is composed of the corresponding S-ISR, interrupted by a sequence containing tRNA^Ile and tRNA^Ala genes. Based on these sequences, species-specific primers were designed and proved to identify accurately the species considered among 30 reference Lactobacillus species tested.
Conclusions:  Designed species-specific primers enable a rapid and accurate identification of L. mindensis , L. paralimentarius , L. panis , L. pontis and L. frumenti species among other lactobacilli.
Significance and Impact of the Study:  The proposed method provides a powerful and convenient means of rapidly identifying some sourdough lactobacilli, which could be of help in large starter culture surveys.     

环丙沙星预先处理牙鲆消化道对干酪乳杆菌定植的影响

利用1株干酪乳杆菌,通过实验研究用环丙沙星预先处理牙鲆消化道后乳杆菌的定植和演替规律。在投喂含有1.2×10^9CFU/g乳杆菌的饲料5 d后,消化道定植的乳杆菌超过106CFU/g,其后维持在10^6～10^8CFU/g动态平衡中。同时随着乳杆菌的投喂,不经环丙沙星预先处理牙鲆消化道的正常组,鱼消化道的弧菌数从10^7～8CFU/g降低到10^6CFU/g左右;而经环丙沙星预先处理牙鲆消化道的药饵组,鱼胃、小肠和盲囊的弧菌数则是先增加,然后显著下降。停喂乳杆菌7 d后,2个实验组鱼消化道的乳杆菌均从10^5～6CFU/g下降到10^4CFU/g,干酪乳杆菌正常组鱼盲囊中弧菌从10^5CFU/g回升到10^6CFU/g,胃和小肠中弧菌数量基本不变。干酪乳杆菌药饵组则有所不同：除胃中弧菌数量则基本不变外,盲囊和小肠中弧菌数量继续下降,其原因有待进一步研究。实验结果表明,干酪乳杆菌能在牙鲆消化道内定植,而用预先处理牙鲆消化道后,更有利于乳杆菌的定植;乳杆菌的投喂和定植,使牙鲆消化道中的弧菌数量明显下降。     

Strain typing with ISLpl1 in lactobacilli

Twenty-seven Lactobacillus plantarum ssp. plantarum, 11 Lactobacillus paraplantarum and five Lactobacillus casei-related strains, isolated from various autochthonous Serbian and Montenegro-fermented foods, were identified using phenotypical characterization and current PCR methods based on PCR of the recA gene or the 23S-5S rRNA gene intragenic spacer (IS) region. The strains were genotypically characterized by a new method based on the insertion sequence element ISLpl11 that grouped these lactobacilli into 10 IS-fingerprinting groups. Between six and 23 copies of the ISLpl1 were found in each strain and the ISLpl1-fingerprint groups correlated well with the origin of the strains. The method proved suitable for strain typing of lactic acid bacteria at the infraspecies level.     

阴道常见乳杆菌及相关研究进展

近年来,随着全基因组测序等分子生物技术的应用,人们对阴道微生态系统的结构和功能的认识逐渐清晰。研究发现很多妇科疾病的出现伴随着阴道菌群失调,因此研究正常的阴道菌群结构和功能对预防和治疗菌群失调引起的疾病有重要意义,这也是目前人体微生态研究领域的热点。本文总结了近年关于健康女性阴道菌群的组成和类型的研究,阐述了阴道中常见乳杆菌如卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌等在功能研究方面的最新进展,以期为乳杆菌在防治妇科疾病如细菌性阴道病(BV)、外阴假丝酵母菌病(VVC)并推进其产品开发及临床应用等方面提供一些理论参考。     

Nucleic acid studies on some heterofermentative lactobacilli: Description of Lactobacillus malefermentans sp.nov. and Lactobacillus parabuchneri sp.nov.

Chemotaxonomic studies were performed on some heterofermentative lactobacilli of uncertain taxonomic position. Two strains from beer and six strains from a variety of habitats were found to be distinct from each other and all other Lactobacillus species examined on the basis of DNA-DNA hybridizations and warrant new species for which the names L. malefermentans and L. parabuchneri , respectively, are proposed.     

嗜酸乳杆菌的生长与富硒的动态关系研究

目的考察嗜酸乳杆菌在添加Na2SeO3的MRS培养基中的生长与富硒的关系和规律.方法以未添加Na2SeO3的MRS培养基的对照相比.结果加硒培养基中嗜酸乳杆菌生长较为缓慢,生长的延滞期增加,对数期缩短.结论处于延滞期的嗜酸乳杆菌细胞对硒的吸收作用比较强,富硒量迅速增加至最高达62.054 μl/g菌细胞.     

乳酸杆菌对实验性急性胰腺炎损伤的治疗价值

目的探讨乳酸杆菌对急性胰腺炎的治疗作用。方法采用家兔急性胰腺炎模型,其中实验组给予乳酸杆菌干预,检测实验组、对照组血清淀粉酶、血清钙和血糖3项指标。结果实验组血清淀粉酶水平低于对照组(P<0.01)。结论乳酸杆菌对实验性急性胰腺损伤有修复作用。