柑桔全爪螨高致病力菌株芽枝状枝孢霉的生物学特性研究

【目的】明确柑桔全爪螨Panonychus citri(Mc Gregor)高致病力菌株芽枝状枝孢霉Cladosporium cladosporioides(CQBBW3)的生物学特性。【方法】通过单因素试验,测试了不同培养基、碳源、氮源、温度及pH对CQBBW3菌株生长和产孢的影响。【结果】CQBBW3菌株的LC50为4.66×108个孢子/m L,LT50为6.2353 d。最佳生长培养基是淀粉琼脂培养基,最适产孢培养基为察氏培养基;菌丝生长最适碳源和氮源为甘露醇和甘氨酸,产孢最适碳源和氮源为乳糖和赖氨酸;最适生长温度为25℃,最适产孢温度为15℃和30℃;最适生长pH值为6.0~8.0,最适产孢pH值7.0。【结论】CQBBW3菌株对柑桔全爪螨有较好的杀虫活性,喜好25℃、中性、富含有机营养的环境。本研究为菌株快速培养及其真菌杀虫制剂的开发与田间应用奠定基础。     

内生解淀粉芽孢杆菌CC09产Iturin A摇瓶发酵条件优化

【目的】提高内生解淀粉芽孢杆菌CC09发酵产抗菌脂肽Iturin A的产量。【方法】首先采用单因子实验研究了碳源、氮源、NaCl浓度、pH、温度、转速和装液量等因子对CC09产Iturin A能力的影响,然后对其中显著性因子:氮源浓度、pH、温度及装液量4个因素进行正交实验,进一步优化发酵条件。【结果】优化培养基组成及发酵条件可以提高CC09菌株的生长速度及产Iturin A的量,其中可溶性淀粉以及一定比例的蛋白胨和酵母粉是CC09菌株产Iturin A的良好碳源和氮源;培养温度、装液量、培养液pH等也对CC09菌株产Iturin A有显著影响。优化后的培养基成分:可溶性淀粉(碳源)5 g/L、比例为3:1的胰蛋白胨酵母粉混合氮源15 g/L、NaCl 1 g/L;最佳培养条件:pH 6.0、28°C、摇床转速120 r/min、培养瓶装液量20%。【结论】在此条件下,Iturin A的产量可达到690 mg/L,较优化前的138 mg/L提高了4倍。     

地生弯颈霉的培养与生长条件

从长白山北坡森林土壤中分离纯化得到1株地生弯颈霉(Tolypocladium geodes),对其培养及生长条件(如培养基、光照、温度、碳源、氮源和pH等)进行了试验。结果表明,地生弯颈霉在麦芽浸膏琼脂培养基(MEA)上菌落生长直径最大,马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上产孢量最高;5~30℃温度范围内均能生长,25℃时生长和产孢量最佳;最适碳源和氮源分别为葡萄糖和柠檬酸铵;光暗交替条件下,最利于其生长和产生孢子;pH4~9范围内均能生长和产孢,pH=8时菌落直径最大,pH=6时产孢量最高。     

蝉拟青霉LB菌株的生物学特性

本文研究碳源、氮源、温度、湿度、pH值和光照等对蝉拟青霉LB菌株生长、产孢和孢子萌发的影响.结果表明,适合该菌株菌落生长和产孢的最佳碳源是可溶性淀粉和蔗糖,最佳氮源为蛋白胨;菌丝生长和孢子萌发的最适温度范围是25℃～27℃,产生分生孢子的最适温度是25℃;分生孢子萌发所需湿度范围是RH 90%～100%,当RH低于90%时很难萌发;在pH值4～10的范围内该菌能生长和产孢,菌丝生长最适pH为6,产生分生孢子和孢子萌发最适pH范围为6-7;光照处理对该菌产孢有一定的影响;分生孢子的致死条件为55℃ 10min.生物学特性显示,蝉拟青霉LB菌株是一株对营养要求不高、对环境适应能力较强的昆虫病原真菌.     

余甘子采后软腐病菌的分离鉴定及其细胞壁水解酶活性

【背景】药食同源的余甘子果实在采后贮藏过程中极易软腐变质,严重影响其品质和经济价值。【目的】明确引起余甘子果实软腐病的病原菌种类及其生长特性和产细胞壁水解酶活性,为余甘子采后软腐病的控制及延长其贮藏期奠定基础。【方法】采用组织块分离法从采后发病的余甘子果实分离病原菌,按照科赫法则确定分离菌株的致病性;采用形态学特征结合rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,测定病原菌菌丝生长和产孢特性,检测产胞外细胞壁水解酶活性。【结果】从具有软腐症状的余甘子果实中分离得到32株真菌,其中菌株DQ23是余甘子采后软腐病的致病菌,通过形态特征结合rDNA-ITS序列将其鉴定为Penicillium choerospondiatis。其菌丝在酵母膏葡萄糖琼脂培养基(YDA)上生长最快,在马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)上产孢最多。该菌能有效利用多种碳、氮源,适宜产孢的碳源为蔗糖、葡萄糖,氮源为蛋白胨、牛肉膏、酵母膏。菌丝生长的最适温度和pH范围分别为25°C和3.0-5.0,产孢的最适温度和pH范围分别为25°C和4.0-7.0。光照均利于菌丝生长和产孢。该菌具有分解果胶、纤维素的能力,无分解蛋白质、鞣质的能力。【结论】Penicillium choerospondiatis是余甘子果实软腐病的病原菌,研究结果为该病害的防控奠定了基础。     

一株产高温蛋白酶嗜热菌A-2的筛选鉴定及酶学特性分析

本研究为从云南腾冲热泉中分离纯化得到一株产高温蛋白酶的菌株并对其进行驯化培养,用以探究该菌株的生长条件及酶学特性,通过选择培养基筛选能够分解脱脂奶粉产蛋白酶的菌株,应用常规方法液体培养菌体,探究温度、pH、碳源、氮源对菌株生长情况的影响,并采用福林酚法测蛋白酶活性。并提取蛋白酶液对酶的最适pH、温度以及热稳定性、pH稳定性进行研究。结果发现通过含脱脂奶粉的固体培养基筛选得到一株产蛋白酶菌株A-2,经过生理生化试验和16S rDNA鉴定知该菌种属于Aneurinibacillus属。酵母粉、葡萄糖、55℃、pH值7.5分别为菌株生长的最适氮源、碳源、温度和pH。此外该菌株所产的蛋白酶最适温度为60℃,在pH值7~9具有较好的酶活性。因此,该菌株为嗜热芽孢杆菌,所产的碱性蛋白酶具有较高的耐受温度和pH稳定性,为进一步开发利用提供参考的价值。     

球孢白僵菌不同碳氮源的研究及对烟粉虱的时间-剂量-死亡率模型分析

【目的】明确不同碳、氮源对球孢白僵菌Beauveria bassiana生长的影响,确定适合该菌株生长的碳、氮源;通过研究球孢白僵菌对烟粉虱Bemisia tabaci的致病力,评价球孢白僵菌防治烟粉虱的潜力。【方法】在培养基中添加不同碳、氮源,研究其对球孢白僵菌生长速率和产孢量的影响,用浸叶法研究不同孢子浓度(1×10~4、1×10~5、1×10~6、1×10~7、1×10~8个/mL)的球孢白僵菌对烟粉虱的致病力并利用时间-剂量-死亡率模型对数据进行拟合,分析该模型的时间效应和剂量效应。【结果】蔗糖作为碳源、酵母作为氮源时球孢白僵菌的生长速率快和产孢量高;利用时间-剂量-死亡率模型对测定的数据进行拟合分析得出,随着接种天数的增加,球孢白僵菌的LC_(50)、LC_(90)逐渐降低,剂量效应增强;随着孢子浓度的增加,LT50逐渐降低,时间效应增强。【结论】球孢白僵菌的合适碳源为蔗糖,最适氮源为酵母。该菌株对烟粉虱有较强致病力,1×10~8个/mL的孢子浓度可作为防治烟粉虱的理想浓度,本试验为球孢白僵菌对烟粉虱的生物防治提供有力依据。     

嗜热菌Anoxybacillu sp.产淀粉酶培养基优化及产酶条件研究

目的：对产淀粉酶嗜热菌Anoxybacillu sp.菌株进行培养基优化及产酶条件研究,以便提高菌株的产酶能力,并为下一步菌 株的诱变育种研究提供基础。方法：常规方法液体培养菌株,用平板初筛和DNS法复筛选择产淀粉酶能力较高的菌株;单因素筛 选培养基最适的碳源、氮源、Ca2+浓度和Mg2+浓度,对单因素筛选的最佳碳源、氮源、Ca2+和Mg2+的三个较佳浓度进行四因素三 水平正交试验优化培养基;对培养基不同pH值及不同培养温度进行培养条件研究。结果：产淀粉酶菌株筛选结果显示：六株菌中 淀粉酶酶活力值最大的是菌株Anoxybacillu sp.DL4,差异有统计学意义（P＜0.05）。培养基单因素筛选结果显示：最适碳源为麦芽糖、最适氮源为 硝酸铵、最适Ca2+、Mg2+浓度均为0.02%,差异有统计学意义（P＜0.05）。培养基优化结果显示：C 源0.1 %,N源0.2 %,Mg2+ 0.04%, Ca2+ 0.04 %为最佳的培养基成分组合。产酶条件筛选结果显示：培养基pH 值为6、培养温度为55 ℃时菌株产酶水平最高,差异有 统计学意义（P＜0.05）。结论：培养基的优化及最适的产酶条件能提高嗜热菌Anoxybacillu sp.DL4 产淀粉酶能力,Ca2+、Mg2+离子 对菌株产淀粉酶有促进作用。     

苹果树腐烂病生防真菌Z-12A的鉴定及其生防效果

【背景】由苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)引起的苹果树腐烂病是我国苹果产区的毁灭性病害之一,具有分布广、危害重和防治难等特点,严重制约着苹果产业的发展,急需寻找一种对该病高效、安全的防治措施。【目的】明确一株分离自甘肃省静宁县苹果树根际土壤的生防菌株Z-12A的分类地位,评价其对苹果树腐烂病的生防潜力。【方法】结合形态学特征和rDNA ITS序列分析对拮抗菌株Z-12A进行鉴定,采用生长速率法测定了其生物学特性;采用平板对峙培养法和生长速率法测定菌株Z-12A对苹果树腐烂病菌菌丝生长的影响;利用菌株Z-12A活菌和发酵液分别处理苹果枝条及小白鼠测定其生物安全性;使用离体枝条烫伤接种法测定菌株Z-12A对腐烂病的防治效果。【结果】形态学观察和rDNA ITS序列分析结果表明该菌株为埃及青霉(Penicillium egyptiacum)。该生防菌菌丝生长的最适培养基是萨氏培养基(Sabouraud Dextrose Agar With Yeast Extract,SDAY),而高氏1号培养基(Gauze’s Medium No.1,GA)上产孢量最大;菌丝生长和产孢的最佳碳源是木糖,最佳氮源是硝酸钾;菌丝生长的最佳pH为5.0,最适宜产孢的pH为7.0;25℃时菌丝生长最快,产孢的最适温度为10℃。平板对峙试验表明菌株Z-12A对苹果树腐烂病菌抑制率为88.71%,发酵液在培养皿内的抑菌率为61.07%;显微观察显示菌株Z-12A可使苹果树腐烂病菌菌丝畸形及细胞原生质外渗;其发酵液对离体枝条防效为66.69%;安全性评价表明菌株Z-12A对苹果树和小白鼠安全。【结论】菌株Z-12A对苹果树腐烂病具有较强的生物防治效果,具有一定的生防潜能,可为该病生防菌剂的选择提供新的菌种资源。     

氮源对蛹虫草生长及类胡萝卜素产生的影响

【背景】蛹虫草是一种珍稀食药用菌,类胡萝卜素不仅为其重要活性成分,而且影响子实体的外观品相,但是类胡萝卜素产生的影响因素不明。【目的】揭示氮源对蛹虫草生长和类胡萝卜素产生的影响。【方法】测定不同氮源培养基中菌株生长速度、分生孢子产生及类胡萝卜含量,筛选菌株生长的最适氮源,进一步研究不同浓度的氮源对蛹虫草生长及类胡萝卜素产生的影响,并测定不同光照条件下氮源浓度对蛹虫草子实体类胡萝卜素产生的影响。【结果】蛹虫草在不同的氮源培养基中菌落形态和类胡萝卜素产生存在明显差异。麦麸和黄豆粉培养基中菌株生长速度最快,但是菌落稀疏,正面分别呈现荧光黄色和极微弱红色;蛋白胨和酵母提取物培养基中菌落致密,产孢量极显著高于其它氮源培养基(P0.01),菌落正面为橙黄色;甘氨酸和柠檬酸为氮源时完全没有色素产生,其它无机和氨基酸氮源培养基平板背面有微量色素产生。固体和液体静置培养条件下均发现蛋白胨浓度在0-3%的范围内,随着浓度的增加,类胡萝卜素含量增加;子实体栽培中不同的氮源浓度均表现为蓝光光照条件下类胡萝卜素含量显著高于白光;而在白光和蓝光光照条件下均表现为蛋白胨浓度为1%时类胡萝卜素含量最高,分别为2 809.38±386.24μg/g和4 093.75±518.37μg/g。【结论】氮源种类和浓度显著影响蛹虫草类胡萝卜素的产生,蓝光光照和1%蛋白胨浓度为子实体类胡萝卜素产生的最佳条件,这为栽培富含类胡萝卜素的蛹虫草子实体提供了试验依据。     

牛筋草离孺孢生物学特性及代谢产物活性测定

对牛筋草离孺孢属(Bipolaris sorokiniana)NJ-08菌株的生物学特性及代谢产物除草活性测定结果表明：此菌株的菌丝体生长速度慢, 但产孢量大, 致病性强。菌丝体生长最适温度25°C, 致死温度是55°C/10 min, 最适pH值为8, 碳源以葡萄糖最佳, 供试氮源则不利于菌丝体生长。产生分生孢子最适温度25°C, 最适pH值为8, 碳源以葡萄糖最好, 氮源以硝酸钠产孢量最高。分生孢子萌发温度在20°C~35°C之间没有差异, 适宜pH值为5~7, 碳源以D-木糖的孢子萌发率最高, 氮源以蛋白胨的孢子萌发率最高, 不同处理间存在明显差异。NJ-08菌株产生的代谢产物作用于牛筋草, 可使叶片黄化或枯死, 代谢产物对指示植物及杂草如柱花草、地桃花、猪屎豆和辣椒的胚根胚芽生长都有明显的抑制作用, 抑制率均超过了90%, 显示出很好的除草活性。     

对蜱致病性球孢白僵菌培养条件的优化

对前期筛选得到的具有生防潜力的杀蜱真菌Beauveria bassiana AT17菌株进行相关生物学性状的研究,建立一套规范的实验室培养的技术和方法,同时对其液固双相发酵技术进行优化,在于提供优质高效的生防材料,为其真菌制剂的规模化生产提供实践和理论基础。通过采用单因素筛选方案对其最适基础培养基、温度、pH值、碳源、氮源、微量元素及液固双相发酵配方进行研究,发现该菌株在PDA、PPDA、PDAY、SDAY、SMAY 5种培养基上均能较好生长,在PDA上生长最快,在PDAY上产孢量最大。温度对菌丝的生长和产孢影响显著,25°C菌丝生长最快,且产孢量最大。B.bassiana AT17菌株在pH 4-10范围内均可生长,在偏碱性环境内生长最快,在pH 5-6的偏酸性环境内产孢量最大。综合评价真菌各项指标后,葡萄糖和酵母粉为菌丝生长和产孢的最佳碳源和氮源,固体物料麦麸+玉米粉+米粉与基础培养液3/4 SDAY按2:1均匀混合后,添加0.05%K+可作为菌株固体发酵的最佳物料配方组合。     

Comparative mycelial and spore yield by Trichoderma viride in batch and fed-batch cultures

The effects of cultural parameters such as carbon and nitrogen source and environmental factors including temperature and pH were investigated on spore and mycelial yield of Trichoderma viride, which has potential as a biocontrol agent against species of Fusarium in batch culture and fed-batch culture where there was limiting nutrient. The results obtained indicated that growth and sporulation of T. viride were greatly influenced by various carbon and nitrogen sources, and by environmental factors such as pH and temperature. Mannitol, wheat bran and rice bran as sole carbon sources appear to stimulate high mycelial growth and spore yield in fed-batch culture. Growth and sporulation were also favoured by NaNO₃, peptone and NH₄SO₄ as the nitrogen sources in fed-batch and batch cultures_. Maximum growth and sporulation was between pH 4.5 and 6.0. Temperatures between 30 and 37 °C were good for mycelium growth of T. viride while temperatures between 30 to 45 °C were good for sporulation. The amount of spore and mycelium produced and the time required for attainment of maximum spore yield increased with increasing carbon and nitrogen source in batch culture. The final spore yield obtained in fed-batch culture was two times higher than the apparent spore-carrying capacity of batch culture. These results show that T. viride is capable of growing and sporulating with varied nutritional and environmental conditions, and, therefore, this strain of T. viride may be useful as a biocontrol agent under diverse physiological and environmental conditions.     

Isolation of amylolytic strains of Thermoactinomyces vulgaris and production of thermophilic actinomycete amylases

Kuo, M. J. (Iowa State University, Ames), and P. A. Hartman. Isolation of amylolytic strains of Thermoactinomyces vulgaris and production of thermophilic actinomycete amylases. J. Bacteriol. 92:723-726. 1966.-Of 759 isolates obtained from dung, compost, and soil samples, a culture of Thermoactinomyces vulgaris (strain 5) was selected for further study on the basis of quantities of amylase produced in synthetic and nonsynthetic media, rapid growth and sporulation, culture stability upon prolonged storage at 5 C, and growth temperature range. Inoculum preparation, temperature optimum for amylase formation, and the effects of various kinds and levels of carbon and nitrogen sources on amylase production were studied with T. vulgaris strain 5. An optimal procedure for production of T. vulgaris amylases is proposed.     

三种香蘑属野生食用菌菌株的培养条件优化

【背景】供试菌株分别是分离自山西省宁武县管涔山的肉色香蘑Lepista irina、斑褶香蘑L. panaeolus和山西省蒲县五鹿山的紫丁香蘑L. nuda 3种野生食用菌的子实体。【目的】获得3种野生食用菌的最佳培养条件。【方法】以菌丝生长速度为指标研究不同碳源、氮源、碳氮比、pH和培养温度等各因素对菌丝生长的影响,根据Box-Benhnken中心组合试验设计原理,采用3因素3水平的响应面法确定使菌丝体达到最快生长速度的最佳培养碳源、氮源和pH。【结果】肉色香蘑在葡萄糖20.9 g/L、土豆196.47 g/L、pH 6.0、培养温度21 °C的条件下,菌丝日均生长速度达到最大,为1.13 mm/d;斑褶香蘑在甘露醇17.4 g/L、酵母膏8.1 g/L、B族维生素0.1 g/L、K2HPO4 2.5 g/L、MgSO4 2.5 g/L、pH 7.9、培养温度25 °C的条件下,菌丝日均生长速度达到最大,为0.73 mm/d;紫丁香蘑在土豆200 g/L、可溶性淀粉20.5 g/L、KNO3 2.1 g/L、K2HPO4 2.5 g/L、MgSO4 2.5 g/L、B族维生素0.1 g/L、pH 7.0、培养温度25 °C的条件下,菌丝日均生长速度达到最大,为2.38 mm/d。【结论】获得了3种香蘑属菌株的最佳培养条件,为后续优质野生食用菌的引种驯化积累了相关数据和资源。     

Decolorization of azo dyes using Basidiomycete strain PV 002

Summary Basidiomycete PV 002, a recently isolated white-rot strain from decomposed neem waste displayed high extracellular peroxidase and rapidly decolorized azo dyes. In this study, the optimal culture conditions for efficient production of ligninolytic enzymes were determined with respect to carbon and nitrogen. An additional objective was to determine the efficiency of PV 002 to degrade the azo dyes. White-rot strain PV 002 efficiently decolorized Ranocid Fast Blue (96%) and Acid Black 210 (70%) on day 5 and 9 respectively under static conditions. The degradation of azo dyes under different conditions was strongly correlated with the ligninolytic activity. The optimum growth temperature of strain PV 002 was 26 °C and pH 7.0.     

一株乙草胺降解菌的分离及其降解特性研究

【目的】分离获得一株能有效降解乙草胺的菌株,并研究其降解乙草胺的影响因素,为乙草胺生物修复提供微生物资源。【方法】通过富集培养和分离培养,从样品中筛选能以乙草胺为唯一碳氮源的菌株。通过划线培养获得单菌落,并采用革兰氏染色法和16S r RNA基因测序进行菌株的初步鉴定和系统分类。通过单因素试验研究初始乙草胺浓度、外加碳氮源对其降解乙草胺的影响,并基于正交设计进行优化。【结果】分离获得的一株菌为革兰氏阴性菌,初步确定为Pseudomonas sp.,能有效利用乙草胺进行生长。单因素试验证明在乙草胺初始浓度为10 mg/L时降解率最高;外加碳氮源能提高乙草胺降解率,其中葡萄糖和蛋白胨分别最为有效。正交设计表明在最优条件下,其对乙草胺降解率可以达到80.2%。【结论】菌株A-1能有效利用乙草胺进行生长,其降解乙草胺受多种因素影响。本研究将为利用进行该菌株进行乙草胺污染修复提供菌种资源。     

耐盐碱菌株的分离筛选及生物学特性和盐碱去除效率的研究

将采集于黑龙江省大庆市盐碱地的土壤样品经适当稀释后,涂布于高盐碱的培养基中,分离纯化获得41株菌。经过不断分别或同时提高培养基的盐、碱浓度进行耐盐碱菌株的筛选,获得1株耐盐碱菌株7,其在pH值13且盐(NaCl)浓度达到200g.L-1的培养基中仍可生长,该菌株既属于极端嗜盐微生物又属于极端嗜碱微生物。分别于不同碳源、氮源、碳氮比、初始pH值和培养温度条件下,对菌株7的生物学特性和盐、碱去除能力进行研究。结果表明,该菌株生长和去除盐碱的最佳碳源为牛肉膏;最佳氮源为蛋白胨;碳氮比为4:1时,最有利于菌株的生长和对盐、碱的去除;菌株生长的最适初始pH值为9.5,最适温度为20℃,而盐、碱去除的最佳温度则为30～35℃。