冷冻对山羊精子转染外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响

本实验将鲜精和冻精分别与地高锌标记的线形化的pEGFP-N,质粒孵育转染,用原位杂交方法检测转染效率;PCR和Southern Blotting检测精子与外源DNA的整合效率;与成熟卵母细胞体外受精,PCR检测阳性胚胎比率,用透射电镜技术、碘化丙锭和羟化荧光素双探针技术和单细胞电泳（Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE）技术,观察精子冷冻前后的超微结构、精子质膜完整性和精子核DNA损伤的变化,研究冷冻对山羊（Caprahircus）精子转染内化外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响及机理。结果表明,冻精显著提高了转染外源DNA的效率（81．60％±16．59％VS32．95％±2．93％,t=4．873,P=0．003;41．80％±6．26％vs27．89％±8．64％,t=2．634,P=0．039）。PCR和Southern Blotting检测表明外源DNA已经整合到精子基因组上。用冻精与成熟卵母细胞体外受精,体外受精穿透率和卵裂率显著低于鲜精组（24．19％±3．15％vs58．86％±3．73％,t=7．131,P〈0．001;11．83％±2．37％vs29．71±3．47％,t=4．302,P〈0．001）,但体外生产的胚胎PCR阳性率比鲜精组显著提高（45．45％±10．87％VS24．44％±6．06％,t=1．750,P=0．013）。超微结构观察和双荧光探针检测都发现冷冻-解冻精子质膜完整性降低（8．34％±4．21％VS65．67％±6．46％,t=12．492,P〈0．001）,SCGE显示冷冻极显著增加了精子彗尾长度和彗星细胞比例（42．67μm±4．56μmvs21．14／Lm±2．36μm,t=5．644,P=0．005;60．00％±4．00％vs17．37％±2．57％;t=15．787,P〈0．001）。冷冻-解冻可以提高山羊精子转染外源DNA的效率,冷冻破坏精子质膜完整性,解除质膜的阻碍作用,是提高外源DNA转染效率的一个主要原因[动物学报54（6）：1089-1097,2008]。     

三氧化二砷脂质体透过载瘤大鼠血脑屏障的实验研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）脂质体通过载瘤大鼠血脑屏障（BBB）的效果。方法：超声薄膜分散法制备三氧化二砷脂质体,建立药物标准曲线,检测包封率;立体定向技术建立C6／Wistar大鼠脑胶质瘤模型;取Wistar雄性载瘤大鼠84只,随机分为三氧化二砷脂质体组和三氧化二砷组,分别经静脉注射三氧化二砷脂质体和三氧化二砷注射液,给药后0．5h、1h、2h、4h、8h、16h、24h取大鼠脑组织冻存,应用双道原子荧光法检测载瘤大鼠脑组织中的砷含量。结果：制备稳定的三氧化二砷脂质体,包封率分别为92、2％,92．2％,92．3％;As2O3脂质体组及As2O3给药后7个时间点鼠脑组织中砷含量（μg／L）分别为：341．09±18．18,523、98±27．36,475．19±15、52,467.02±22．46,471．52±24．38,382.30±13．26,282．47±19．71;99.93±17.10,148.07±26、21,101.78±17．54,89．09±19．41,74.39±13．85,50．44±15.31,51．52±19．23。比较给三氧化二砷组及给三氧化二砷脂质体组载瘤大鼠脑组织中砷含量有显著差异（P〈0．05）。结论：三氧化二砷脂质体对血脑屏障的透过性明显优于单纯砷剂。     

新牧I号杂花苜蓿异交机制与自花粉的生殖干扰

通过控制试验和荧光观测等手段对新牧I号杂花苜蓿Medicago varia Martyn‘XinmuNo.1＇柱头可授期与最佳授粉时间、自花粉的堵塞效应、花粉萌发与花粉管生长状况等进行研究,结果显示：（1）苜蓿柱头可授期与单花寿命具高度的同步性,在单花开放的第1天授粉,传粉效率最高,结荚率达65.17%±2.01%（P〈0.01）,为柱头的最佳授粉时期;在单花开放后第4天授粉,其结荚率仍达34.25%±6.73%。（2）自花授粉比异花授粉有着较低的花粉萌发率和花粉管生长速度;清除柱头自花粉后再授异花粉,其结荚率/花序和荚内种子粒数由原来的51.76%±5.37%和2.11±0.18粒,提高到72.31%±6.24%（P〈0.01）和3.46±0.25粒（P〈0.01）,自花粉对柱头的堵塞效应非常明显。（3）在繁育系统中,苜蓿采取了雌雄异熟和自交不亲和两套机制来避免自交,但是由于其独特的花结构,即使雄蕊先熟,在保证苜蓿异交机制中也没有起到有效的作用,而其典型的自交不亲和系统,虽然保证了苜蓿较低的自交率,却无法避免自花粉的生殖干扰。     

喉鳞癌患者血清中内皮抑素水平对喉鳞癌诊断价值的研究

目的：探讨喉鳞癌患者血清中内皮抑素水平的变化,及其与肿瘤临床分期及预后的关系。方法：（1）对50例喉鳞癌患者、30例喉息肉患者和30例健康人用ELISA方法检测血清中内皮抑素水平;（2）对喉鳞癌组不同临床分期的血清中内皮抑素的水平进行比较。结果：（1）喉鳞癌组血清中内皮抑素水平（51．45±19．83ng／mL）,显著高于喉息肉组（34．56±12．4ng／mL）和正常对照组（33．12±13．04ng／mL）,差别有统计学意义（P〈0．01）。喉息肉组与正常对照组之间差别无显著性（P〉0．05）。（2）Ⅱ期喉鳞癌患者血清内皮抑素的水平（66．22±10．89ng／mL）高于Ⅰ、Ⅱ期患者内皮抑素水平（39．31±14．42ng／mL,47．98±22．01ng／mL）,差别有统计学意义（P〈0．01）,Ⅰ期与Ⅱ期之间内皮抑素水平差别无显著性（P〉0．05）。结论：内皮抑素含量水平可以作为喉鳞癌的诊断及顸后判断的重要指标之一。     

氨溴索对粘液型铜绿假单胞茵生物膜藻酸盐作用的体外研究

目的探讨氨溴索对铜绿假单胞菌临床分离株形成的生物膜（biofilm,BF）主要成分藻酸盐的干预作用,研究其对藻酸盐合成过程中起重要作用的基因表达和合成过程中限速酶活性的影响,以及其对藻酸盐降解的影响。方法建立铜绿似单胞菌临床分离株BF体外模型,培养7d后得到成熟BF。将BF内的细菌振荡下来后,用疏酸-苯酚法检测氨溴索对藻酸盐含量的影响;RT-PCR检测藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA表达;分光光度计检测合成过程中限速酶——GDP-甘露糖脱氢酶（guanosine diphospho-D-mannose dehydrogenase,GMD）的活性,并检测藻酸盐的降解情况。结果在氨溴索3．75mg／ml作用下,藻酸盐含量（mg／g）由86．4024±0．8588下降到59．9199±0．5803（F=66．2,P〈0．01）;其合成重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达分别由1．2994±0．0173、1．0488±0．0457、0．9888±0．0267和0．8731±0．0336变化为1．0253±0．0265、0．9594±0．0106、0．8536±0．0179和1．0770±0．0503（F=91．9,41．1,88．4和56,9,P均〈0．05）;其合成限速酶GMD活性由0．0989±0．0055下降到0．0558±0．0016（F=121．2,P〈0．01）;藻酸盐的降解量（△mg／g）由1．4122±0．0073变化为1．4175±0．0019（F=21．81,P〉0．05）。1．875mg／ml氨溴索作用下,有同样的趋势但效应不如高浓度明显。结论氨溴索可以降低铜绿假单胞菌BF藻酸盐的含量,影响藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达,降低藻酸盐合成限速酶GMD活性,但对藻酸盐的降解无影响。     

天津八仙山自然保护区狍春季的卧息地利用

2007年春季,在天津八仙山自然保护区对狍卧息地利用进行了研究。共发现52个狍的卧息地,同时设置93个对照地。资源选择指数结果表明,狍偏好阔叶林,利用中上坡位,喜欢阳坡和半阴半阳坡,选择水源距离适中,偏爱远离人为干扰的卧息地。逐步判别分析结果显示,灌木盖度、隐蔽度、灌木高度、郁闭度、灌木距离和坡度是判别卧息地和对照地的关键因子,即为影响其卧息地利用的主要因子,判别正确率为98．1％。作为生性胆怯易惊的偶蹄类,具有隐蔽条件较好[灌木盖度适中（转换后为16．77±1．07。）、隐蔽度高（29．54±1．47m）、灌木高度稍高（1．22±0．05m）]的地点是狍适宜的卧息地,以逃避捕食者;与此同时,卧息地较舒适[郁闭度低（转换后为5．48±0．31°）、灌木距离较远（2．99±0．13m）、坡度小（2．11±0．09°）],以利于怀孕母狍呼吸与活动,反映其繁殖期生理需求。     

珍稀植物连香树(Cercidiphyllum japonicum)的种子萌发特性

连香树（Cercidiphyllum japonicum Sieb.et Zucc.）属第三纪孑遗植物,被列为国家二级保护植物,种群的自然更新困难。在实验室条件下研究了连香树种子萌发的生物学特性,以了解该种自然种群更新困难的原因和机制,为其有效保护提供理论依据。经测定,连香树种子千粒重为（0.5821±0.0166）g,种子重量极轻且产量大。四唑染色法对种子生活力的测定表明有活力种子比率仅为19.8%±1.3%。种子吸胀时吸水量达种子干重的482.13%±8.54%。将种子划分为6种表面形态类型进行萌发实验,发现不同形态种子萌发率显著不同,大小适中的黄褐色饱满种子萌发率最高,可达91.25%±2.36%。仅用饱满种子进行萌发实验,验证主要环境因子对种子萌发过程的影响,结果表明,以滤纸置床时萌发率高且有利于种子萌发整齐;种子表面可能存在促进种子萌发的物质;种子萌发对于湿度的响应最为明显,适宜的萌发湿度是20%～25%;萌发具有广泛的温度和光照适应性,除5℃萌发率降低外,10～30℃之间的萌发率无显著差异,随温度升高,萌发开始时间提前,萌发速率加快,幼苗活力指数增加;过弱光照不利于幼苗生长。种子萌发特性导致连香树种群自然更新困难的原因可能是：（1）虽然占有更多安全位,但小种子在竞争中处劣势;（2）生境片断化减少了种子产量也降低了种子质量;（3）较低温度条件下启动萌发有利于幼苗的物质积累,但增大了种群的风险;（4）林下光照不足使幼苗根茎生长严重失衡;（5）湿度依赖易造成爆发型萌发。     

小兴安岭阔叶红松(Pinus koraiensis)林种子雨的时空动态

研究种子散布的时空动态对于揭示群落更新机制和植被斑块分布格局具有重要意义。于2005～2007年在凉水自然保护区的9hm^2阔叶红松林永久样地的中心地带（150m×150m）,设置287～319个种子接收器（面积为0.5m^2,网口位于离地面1m处）,定期收集并鉴定其中的种子。结果表明：（1）乔木树种的种子雨强度在不同的年份间存在差异,由2005年到2007年逐年递减（分别为（864.2±1084.3）粒·m^-2、（300.9±349.4）粒·m^-2和（144.8±195.5）粒·m^-2）。11个树种均表现出了年际间的差异,一些树种如水曲柳、糠椴、白桦、红皮云杉、冷杉在某一年份结实量很小或几乎不结实,而红松受人为干扰较大。（2）种子散布存在明显的季节变化,从5月份到11月份均收集到了各树种的种子,且种子雨在10月达到高峰,11月中旬基本结束,但不同的树种的时间变化形式不同。高峰期,种子雨以完整种子为主;而在这之前的种子雨主要以未成熟种子为主。（3）种子雨的构成在各年份间保持稳定。（4）变异函数分析表明,在不同的年份种子雨空间异质性不同,而空间异质性与种子雨强度呈正相关。     

辽东山区长白落叶松(Larix olgensis)种子雨和种子库

长白落叶松是东北地区主要的用材树种,其种子雨和种子库研究鲜见报道。在辽东山区用收集器收集的种子分析了长白落叶松种子雨组成、质量和扩散距离,每隔2个月调查1次种子库数量,并结合靛蓝染色法测定每次种子的活力来分析土壤种子库动态。结果表明,辽东山区的长白落叶松种子雨从8月中旬开始,9月末到10月初达到高峰期,11月初结束。在起始期,种子雨以干瘪的不完整种子为主,而从高峰期开始,种子雨以完整种子为主。整个长白落叶松种子雨中不完整种子约占种子雨总量的45％,这些不完整种子由被动物取食、空粒和病虫害危害种子组成。完整种子的平均生活力为56．4％,即有活力的种子仅占整个种子雨的30％。种子雨集中在母树周围,在林缘1次扩散距离一般不超过1．5倍树高。种子雨到达地面之后,主要分布在枯枝落叶层,土壤0—5em层有少量分布,土壤5em以下没有种子分布;土壤种子库的种子主要在翌年雪融化后开始萌发、被取食、搬运以及腐烂,其中腐烂种子数占45．4％,动物取食为30．0％。种子库的种子数量和活力在冬季没有明显变化,而在翌年,种子数量和活力明显减少,4、6月和8月份种子数量分别为（506．3±35．56）粒m^-2,（267．1±17．47）粒m^-2和（143．6±9．83）粒m^-2,对应的活力分别为47．8％±4．68％,19．4％±3．39％和0％,这表明长白落叶松种子不能在地面形成连续的种子库。     

版纳蝴蝶兰的组织培养与快速繁殖

1植物名称 版纳蝴蝶兰（Phalaenopsis mannii Rchb．F．）。 2材料类别 种子。 3培养条件 种子萌发培养基：（1）MS;（2）MS＋椰子乳100mL·L^-1;（3）1／2MS;（4）1／2MS＋椰子乳100mL·L^-1;（5）1／4MS;（6）1／4MS＋椰子乳100mL·L^-1;（7）1／2MS＋苹果汁100mL·L^-1;